吡格列酮對(duì)老年冠心病合并糖尿病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及脂聯(lián)素水平的影響

陳平英 ，余以勇 ，曹 政 ?，吳瑞霞 ，陳 彬 ，華先平 ，楊 勇

（1．湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院 心內(nèi)科，湖北十堰 442000；2．竹溪縣人民醫(yī)院 心內(nèi)科，湖北竹溪 442300）

吡格列酮對(duì)老年冠心病合并糖尿病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及脂聯(lián)素水平的影響

陳平英1，余以勇2，曹 政1?，吳瑞霞1，陳 彬1，華先平1，楊 勇1

（1．湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院 心內(nèi)科，湖北十堰 442000；2．竹溪縣人民醫(yī)院 心內(nèi)科，湖北竹溪 442300）

目的：觀察吡格列酮對(duì)老年冠心病合并糖尿病患者外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs)數(shù)量及血脂聯(lián)素水平的影響。方法：本研究共入選65例老年（年齡≥60歲）冠心病合并糖尿病患者，隨機(jī)分為吡格列酮組和安慰劑對(duì)照組，用藥12周后利用流式細(xì)胞術(shù)雙色分析法檢測(cè)2組患者外周血中EPCs的百分比，其中EPCs以CD34+／KDR+雙標(biāo)記陽(yáng)性確定，對(duì)比2組患者在服藥前后EPCs數(shù)量及血脂聯(lián)素水平的變化。結(jié)果：2組患者用藥前EPCs數(shù)量基本相近，觀察 12 周后吡格列酮組患者 EPCs數(shù)量顯著增加（0.027±0.017vs0.046±0.03，P＜0.05），對(duì)照組患者12周后EPCs數(shù)量雖較前有所增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。12周后2組患者脂聯(lián)素水平均有所增加，但吡格列酮組患者治療前后血脂聯(lián)素水平顯著升高（4.5±1.7mg/Lvs7.0±2.3mg/L，P＜0.05）。結(jié)論：吡格列酮能夠促進(jìn)老年冠心病合并糖尿病患者EPCs的動(dòng)員過程，還可提升患者血脂聯(lián)素水平，可能具有抗動(dòng)脈硬化功效。

內(nèi)皮祖細(xì)胞；吡格列酮；老年；冠狀動(dòng)脈疾病；糖尿病

Author’saddressDepartmentofCardiology，TaiheHospital，HubeiUniversityofMedicine，HubeiShiyan 442000，China

近期臨床研究證實(shí)：吡格列酮能夠降低2型糖尿病患者心血管事件的發(fā)生率[1]，但其具體機(jī)制目前尚不清楚。內(nèi)皮祖細(xì)胞 （endothelial progenitor cell，EPCs)在動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的內(nèi)皮功能修復(fù)過程中發(fā)揮了重要的作用[2]，而且冠心病患者外周血EPCs的數(shù)量與其心血管不良事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)[3]，EPCs數(shù)量可以作為預(yù)測(cè)冠心病患者發(fā)生心臟不良事件風(fēng)險(xiǎn)性的重要指標(biāo)，研究發(fā)現(xiàn)：吡格列酮具有促進(jìn)2型糖尿病患者EPCs動(dòng)員的作用[4]，但對(duì)于合并有糖尿病的冠心病患者是否具有類似的作用目前尚不清楚，本研究旨在觀察吡格列酮對(duì)老年冠心病合并糖尿病患者EPCs數(shù)量及血脂聯(lián)素水平的影響，并探討吡格列酮改善合并糖尿病冠心病患者臨床預(yù)后的可能機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 主要試劑

FTIC標(biāo)記的CD34抗體購(gòu)自美國(guó)BD Pharmingen公司。 藻紅蛋白（phycoerythrin，PE)標(biāo)記的VEGFR-2+／KDR單克隆抗體，流式檢測(cè)專用紅細(xì)胞裂解液試劑盒（包含紅細(xì)胞裂解液、洗液及固定液)以及脂聯(lián)素檢測(cè)ELISA試劑盒均購(gòu)自美國(guó)R&D公司。

1.2 研究對(duì)象及方案

2010年6月～2011年5月在我科住院的、合并2型糖尿病的不穩(wěn)定型心絞痛患者，入選標(biāo)準(zhǔn)包括：①經(jīng)臨床確診的2型糖尿病患者且糖化血紅蛋白（HbA1c)水平在6.5%～9.0%；②經(jīng)冠脈造影證實(shí)為冠心病，臨床表現(xiàn)符合不穩(wěn)定心絞痛診斷標(biāo)準(zhǔn)且在入院期間接受冠脈介入治療者；③年齡60～75歲；④無心功能不全表現(xiàn)；⑤未合并嚴(yán)重肝、腎疾患者。

排除標(biāo)準(zhǔn)為：①已接受過噻唑烷二酮類藥物治療者；②存在應(yīng)用吡格列酮禁忌證者，如：藥物過敏、心功能不全、肝腎功能異常者。

將入選患者隨機(jī)分為吡格列酮組和安慰劑對(duì)照組，對(duì)照組患者不能選用噻唑烷二酮類藥物，可由主治醫(yī)師根據(jù)病情選擇磺脲類、雙胍類、α-糖苷酶抑制劑等口服藥物以及皮下注射胰島素控制血糖，吡格列酮組患者應(yīng)用吡格列酮（30mg/d）治療，如血糖控制不佳可考慮加用磺脲類、雙胍類、α-糖苷酶抑制劑等口服藥物以及皮下注射胰島素控制血糖，所有入選患者均要求在入院后血糖控制于目標(biāo)水平 （即空腹血糖：3.9～7.2mmol/L，隨機(jī)血糖≤10.0mmol/L），并于入組前及研究12周時(shí)檢測(cè)EPCs數(shù)量和血脂聯(lián)素的水平。

1.3 冠脈介入治療

患者術(shù)前常規(guī)服用阿司匹林、氯吡格雷藥物，之前未服用上述藥物者，按指南要求術(shù)前給予負(fù)荷量（300mg頓服），冠脈介入治療術(shù)中應(yīng)用肝素（100IU/kg）抗凝治療，冠脈支架均選用國(guó)產(chǎn)雷帕霉素洗脫支架（Partner支架，樂普公司），術(shù)后正規(guī)服用雙聯(lián)抗血小板藥物至少1年。

1.4 EPCs數(shù)量和血脂聯(lián)素水平的檢測(cè)

所有患者在接受冠脈介入治療術(shù)后即刻及12周后抽取外周靜脈血以檢測(cè)EPCs數(shù)量和血脂聯(lián)素的水平。EPCs數(shù)量檢測(cè)：采集外周靜脈血標(biāo)本各取100μl，分別加入2個(gè)15ml的離心管中。取一管作陰性對(duì)照 （未加PE標(biāo)記和APC標(biāo)記的抗體)，另一管中加入10μl FTIC標(biāo)記的CD34抗體及10μl PE標(biāo)記的VEGFR-2+/KDR單克隆抗體，震蕩混勻，室溫避光孵育15min。將流式檢測(cè)專用紅細(xì)胞裂解液用去離子水稀釋10倍后加入2ml裂解紅細(xì)胞，震蕩混勻，室溫暗處放置10 min，接著以300g離心力離心5min后棄上清。將流式檢測(cè)專用洗液用去離子水稀釋10倍后加入2ml稀釋的檢測(cè)專用洗液并震蕩混勻，再次以300g的離心力離心5min后棄上清，加入400μl稀釋后洗液及50μl固定液，最后利用Beckman流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman公司)檢測(cè)分析CD34+/KDR+雙標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。以EPCs占外周血有核細(xì)胞的百分比代表外周血EPCs數(shù)量。血脂聯(lián)素的檢測(cè)采用ELISA法測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，2組間治療后差別的比較應(yīng)用協(xié)方差分析，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 患者的臨床基本特征

吡格列酮組男性患者20例，對(duì)照組男性患者23例。表1示，2組患者的基礎(chǔ)血糖水平及使用胰島素治療患者的比例基本相近，在冠心病危險(xiǎn)因素（如吸煙、高血壓、血脂異常等）方面，2組間均無顯著性差異。

表1 2組患者的臨床及冠脈病變特征

表3 EPCs數(shù)量和血脂聯(lián)素的變化情況

表2 冠脈病變特征及介入治療情況

2.2 2組患者冠脈病變特征及介入治療情況

2組患者在冠脈病變數(shù)量、分布位置以及復(fù)雜病變比例方面基本相近，吡格列酮組患者共植入56枚支架，對(duì)照組共植入62枚支架。表2示，在PCI術(shù)中所用支架的平均長(zhǎng)度及支架直徑方面，2組患者間無顯著性差異。

2.3 EPCs數(shù)量和血脂聯(lián)素的變化情況

表3示，2組患者在治療前EPCs的數(shù)量基本相近，12周后吡格列酮組患者EPCs數(shù)量較治療前顯著增加（0.046±0.030vs0.027±0.017，P＜0.05），對(duì)照組患者研究前后EPCs數(shù)量無顯著性差異。12周后吡格列酮組患者EPCs數(shù)量較對(duì)照組顯著增加（0.046±0.030vs0.033±0.019，P＜0.05）。 2 組患者在用藥12周后血脂聯(lián)素的水平均有所增加，但吡格列酮組患者治療后血脂聯(lián)素水平較治療前顯著升高（7.0±2.3mg/Lvs4.5±1.7mg/L，P＜0.05）。

3 討論

內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）是一類能增殖并分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，研究已證實(shí)：EPCs在血管內(nèi)皮損傷后自身修復(fù)過程中發(fā)揮了極其重要的作用[5]。目前公認(rèn)的EPCs表面標(biāo)記物有3種：CD133、CD34 和 VEGFR-2 （KDR)，3 種標(biāo)記物均陽(yáng)性的EPCs主要存在于骨髓中，位于外周血中的EPCs表達(dá)CD133減少，但繼續(xù)表達(dá)CD34，并開始表達(dá)KDR[6]。因此，本實(shí)驗(yàn)以表達(dá)CD34和KDR雙陽(yáng)性的細(xì)胞作為循環(huán)EPCs，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：經(jīng)吡格列酮治療12周后，入選患者CD34+/KDR+細(xì)胞的數(shù)量顯著增高，說明吡格列酮能夠提高合并糖尿病冠心病患者外周循環(huán)中EPCs的數(shù)量。

循環(huán)EPCs數(shù)量可以作為預(yù)測(cè)血管功能和心血管病危險(xiǎn)程度的指標(biāo)，其數(shù)量減少提示血管內(nèi)皮修復(fù)能力降低，心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的增高[3]。在有關(guān)糖尿病患者的研究中發(fā)現(xiàn)：與非糖尿病健康者相比，糖尿病患者外周循環(huán)中EPC數(shù)量明顯減少，且與糖尿病嚴(yán)重程度呈反相關(guān)，目前認(rèn)為：糖尿病患者EPC數(shù)量減少導(dǎo)致內(nèi)皮修復(fù)功能失調(diào)是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病進(jìn)展的重要因素之一[7]。結(jié)合本研究的結(jié)果提示：吡格列酮能夠促進(jìn)糖尿病患者EPC的動(dòng)員，因此在改善機(jī)體血管內(nèi)皮修復(fù)能力、抑制冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性疾病進(jìn)展方面能夠發(fā)揮有益的作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)：吡格列酮能夠提升老年冠心病合并糖尿病患者血脂聯(lián)素的水平。體外研究也發(fā)現(xiàn)：吡格列酮能夠通過直接激活轉(zhuǎn)錄區(qū)上游的啟動(dòng)子增加脂聯(lián)素mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而促進(jìn)脂肪組織分泌脂聯(lián)素[8]。脂聯(lián)素是一種由脂肪組織合成分泌的具有胰島素增敏作用的調(diào)節(jié)激素，該激素能夠通過減輕內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷、減少泡沫細(xì)胞形成以及抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖、遷移等多種途徑發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用[9]，近來研究還發(fā)現(xiàn)：脂聯(lián)素還具有抑制EPC凋亡[10]、改善EPC內(nèi)皮修復(fù)能力的作用[11]，結(jié)合本研究的結(jié)果提示：吡格列酮有可能通過上調(diào)機(jī)體血脂聯(lián)素的分泌水平，進(jìn)一步促進(jìn)機(jī)體EPC的動(dòng)員、增殖過程。由于本研究入選的患者例數(shù)較少，這一結(jié)論尚有待于更大樣本量的研究來證實(shí)。

[1]Dormandy JA，CharbonnelB，Eckland DJ，etal.Secondary prevention of macrovascular events in patients with type 2 diabetes in the PRO active study（PROspective pioglit azone clinical trial in macro vascular events)：a randomised controlled trial[J].Lancet，2005，366：1279-1289.

[2]GeftD，SchwartzenbergS，George J，etal.Circulating endothelial progenitor cells in cardiovascular disorders[J].Expert Rev Cardiovasc Ther，2008，6：1115-1121.

[3]Caroline SL，Lothar R，Stephan F，et al.Reduced number of circulating endothelial progenitor cells predicts future cardiovascular events：proof of concept for the clinical importance of endogenous vascular repair[J].Circulation，2005，111；2981-2987.

[4]Pistrosch F，Herbrig K，Oelschlaegel U，et al.PPARγ-agonist increases number and migratory activity of cultured endothelial progenitor cells[J].Atherosclerosis，2005，183：163-167.

[5]Zamptaki A.Vascular repair by endothelial progenitor cells[J].Cardiovascular Research，2008，78：413-421.

[6]Fadini GP，Baesso I，Albiero M，et al.Technical notes on endothelial progenitor cells：ways to escape from the knowledge plateau[J].Atherosclerosis，2008，197：496－503.

[7]Fadini CP，Agostini C，Avogaro A，et al.Endothelial progenitor cells and vascular biology in diabetes mellitus：current knowledge and future perspectives[J].Current Diabetes Reviews，2005，1：41-58.

[8]Barry S，Camille R.Adiponectin translation is increased by the PPAR-γ agonists pioglitazone and-3 fatty acids[J].Am J Physiol Endocrinol Metab，2009，296：E480-489.

[9]Kobashi C，Urakaze M，Kishida M，et al.Adiponectin inhibits endothelial synthesis of interleukein-8[J].Circ Res，2005，97：1245-1252.

[10]Lavoie V，Kernaleguen AE，Charron G，et al.Functional effects of adiponectin on endothelial progenitor cells[J].Obesity，2011，19：722-728.

[11]Huang PH，Chen JS，Tsai HY，et al.Globular adiponectin improveshigh glucose-suppressed endothelialprogenitor cell function through endothelial nitric oxide synthase dependent mechanisms[J].Diabetes，2010，59：2949-2959.

Effect of pioglitazone on adiponectin and endothelial progenitor cells in elderly patients with coronaryartery disease and diabetes mellitus

CHEN Ping-ying，YU Yi-yong，CAO Zheng，et al//Journal of China-Japan Friendship Hospital，2011 Dec，25（6）：345－347

Objective：To evaluate whether pioglitazone have the effect on endothelial progenitor cell （EPCs)mobilizing and the plasma level of adiponectin in elderly patients with coronary artery disease and diabetes mellitus.Methods：Sixty-five elderly patients with coronary artery disease and diabetes mellitus after successful percutaneous coronary intervention were randomized into pioglitazone group （n=32)or placebo group （n=33).Peripheral blood samples were drawn at baseline and 12 weeks later to assess the number of EPCs and measure the plasma level of adiponectin.Circulating EPCs were defined by the surface markers CD34+/KDR+and analyzed by flow cytometry.Results：CD34+/KDR+cells were similar at baseline between the two groups.The number of EPCs were no significant change in the placebo group.In contrast，a significant increase of the number ofEPCswasseen in the pioglitazone group （0.027 ±0.017vs0.046 ±0.03，P ＜0.05）.Theplasmalevelsof adiponectin，similar in the 2 groups at baseline，were significantly more increased by pioglitazone than by placebo at 12-week follow up（P＜0.05）.Conclusion：Pioglitazone have the effect on EPCs mobilizing and a potent anti-atherosclerosis function in elderly patients with coronary artery disease and diabetes mellitus.

endothelial progenitor cells；pioglitazone；elderly；coronary artery disease；diabetes mellitus

R54

A

1001-0025（2011）06-0345-03

10.3969/j.issn.1001-0025.2011.06.007

1*本文通訊作者。

陳平英（1980－），女，住院醫(yī)師。

2011－08－16

2011－10－18