檳榔藥材高效液相色譜指紋圖譜研究＊

丁 野，姚 蓉，龍海燕，李文莉

(湖南省藥品檢驗所，湖南 長沙 410001)

檳榔居我國著名四大南藥之首，原產于馬來西亞，我國主產于海南、臺灣、云南河口以及西雙版納熱帶雨林間，廣西、廣東和福建僅有少量的分布[1]。檳榔含生物堿、鞣質、脂肪酸、氨基酸類等成分，其中生物堿是主要的保健和藥理活性成分之一[2－3]。目前國內外已對檳榔生物堿的提取分離、成分鑒定、含量測定和藥理效應方面進行了深入的研究[4－9]，但未見有指紋圖譜方面的報道。筆者采用反相高效液相色譜法建立了檳榔的高效液相色譜指紋圖譜分析方法，為其質量控制提供了更全面的信息。

1 儀器與材料

安捷倫1200型高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站，KQ－300DE超聲清洗儀。氫溴酸檳榔堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111684－200401);甲醇為色譜純，水為純凈水，其他均為分析純;試驗中所用藥材均經作者鑒定為檳榔 Areca catechu L.的干燥成熟種子，藥材來源見表1。

表1 樣品信息表

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Inertsil ODS－3 C18柱(250 mm ×4.6 mm ×5 μm);流動相:0.15%三乙胺溶液(磷酸調節pH至6.5)－甲醇(87∶13);流速:1.0 mL/min;檢測波長:215 nm;柱溫:30 ℃;進樣量:5 μL。

2.2 溶液制備

取氫溴酸檳榔堿對照品適量，精密稱定，加50%乙醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得對照品溶液。取本品粉末(序號A，過5號篩)約0.2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，稱定質量，超聲處理(300 W，30 kHz)15 min，放冷，再稱定質量，用50%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

精密度試驗:取同一份供試品溶液，連續進樣6次，依法測定。結果各共有峰相對保留時間的 RSD為0.08% ～0.10%，相對峰面積的 RSD為1.9% ～2.6%。

重復性試驗:取同一批藥材，依法制備6份樣品并進行檢測。結果各共有峰相對保留時間的 RSD為0.06% ～0.09%，相對峰面積 RSD為1.3% ～1.9%。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，8，12，24 h 時進樣，記錄色譜圖。結果各共有峰的相對保留時間 RSD為0.37% ～0.46%、相對峰面積 RSD為 2.9% ～4.5%，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.4 指紋圖譜建立

對14批樣品的指紋圖譜進行分析，選擇穩定性好、吸收較強、特征比較明顯的色譜峰作為共有峰，其中1號峰保留時間與氫溴酸檳榔堿保留時間一致，作為參照峰，共標定了3個共有峰。利用國家藥典委員會開發的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004A版》軟件生成指紋圖譜共有模式，并計算上述14批藥材指紋圖譜的相似度。參數設置:剪切溶劑峰0～5 min，對照圖譜生成方法為中位數法，時間窗寬度為0.2 min，自動匹配。生成的標準指紋圖譜共有模式以及14批樣品的高效液相色譜指紋圖譜見圖1和圖2。計算的相似度值見表2。

圖2 14批檳榔藥材指紋圖譜

表2 相似度結果表

3 討論

在選擇提取溶劑時，分別考察了水、75%乙醇、50%乙醇、25%乙醇、無水乙醇，結果表明，除無水乙醇提取所得色譜圖峰形較差外，其他溶劑所得色譜圖峰形均較好且所得色譜峰數量相同，而以50%乙醇提取率最高，故選擇50%乙醇為提取溶劑。考察了不同流動相對供試品溶液的分離效果，經過反復試驗，結果以甲醇－0.15%三乙胺溶液(磷酸調pH至6.5，13∶87)為流動相所得色譜圖分離度好，基線平穩。通過相似度評價軟件計算，14批檳榔藥材指紋圖譜相似度均大于0.9，表明不同產地的檳榔藥材的生物堿類成分具有較大程度的相似性。

[1]南京藥物學院藥材教研組.藥材學[M].北京:人民衛生出版社，1994:1 041－1 045.

[2]申秀麗，段亮亮.檳榔的化學成分及藥理研究進展[J].宜春學院學報，2009，31(2):95 －97.

[3]張 春，呂飛杰，陶海騰.檳榔活性成分及其功能作用的研究進展[J].中國食物與營養，2008(6):50－53.

[4]胡四琴，徐仿周，高文平，等.檳榔生物堿提取分離及檢測方法的研究進展[J].中藥材，2009，32(2):308 －311.

[5]陳浩桉，賴宇紅，王曉鈺，等.高效陽離子交換色譜法測定檳榔中檳榔堿的含量[J].中藥材，2002，25(1):27 －28.

[6]楊 春，蘇少忠，徐杏云，等.RP－HPLC法測定胃通顆粒中檳榔堿的含量[J].中國中藥雜志，2003，28(5):459 －460.

[7]Cox S，Piatkov I，Vickers ER，et al.High performance liquid chromatographic determination of arecoline in human saliva[J].J Chromatogr A，2004，1 032(1－2):93－95.

[8]Suzuki H，Harada M，Satake M，et al.Determination of arecoline and arecaidine in areca by reversed－phase，ion－pairhigh－performance liquid chromatography[J].Nat Med，1995，49(3):303 － 307.

[9]徐麗華，崔麗華，劉 群.藥材粒度及提取方法對檳榔含量測定結果的影響[J].藥物分析雜志，1998，18(4):263 －264.