高效液相色譜法測定普瑞巴林膠囊的含量

肖 健，曹楊遠(yuǎn)

(福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品藥品研究所，福建 福州 350101)

普瑞巴林(pregabalin，PGB)的化學(xué)名為 (S)－(+)－3－氨甲基－5－甲基己酸，是美國輝瑞公司研究開發(fā)的一種γ－氨基丁酸(GABA)受體阻滯劑，用于治療部分癲癇發(fā)作，其作用機(jī)制是通過抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)電壓依賴性鈣通道的一種α2－σ亞基蛋白，減少神經(jīng)末梢的去極化，減少Ca2+內(nèi)流，從而減少興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放[1]。普瑞巴林的治療指數(shù)高，不良反應(yīng)少，是一種市場潛力巨大、安全有效的抗癲癇藥物。目前普瑞巴林的含量測定方法有紫外光譜法和熒光光譜法[2]、高效液相色譜紫外檢測法[3－6]、高效液相色譜熒光檢測法[7]以及高效液相色譜－質(zhì)譜法[8]。筆者采用高效液相色譜法紫外檢測法測定了普瑞巴林膠囊的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，N2000型色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)。普瑞巴林對照品(美國輝瑞公司提供，批號為20080908);普瑞巴林膠囊(美國輝瑞公司，規(guī)格為50 mg/粒，批號為 20090125，20090314，20090316，20090318);試驗用甲醇、乙腈為色譜純，磷酸鹽為分析純，水為二次蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 － 乙腈－pH=7.0的20 mmol/L磷酸鹽緩沖液(400∶150∶450);流速:1.0 mL/min;檢測波長:210 nm;進(jìn)樣量:20 μL;柱溫:35℃。稱取普瑞巴林對照品24.7 mg，置25 mL量瓶中，加10%流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，取20 μL進(jìn)樣測定。結(jié)果其保留時間為3.440 min(見圖1)，理論板數(shù)為9 829.6，拖尾因子為1.14，可滿足測定要求。

圖1 普瑞巴林色譜圖

2.2 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密稱取普瑞巴林對照品199.6 mg，置100 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋到刻度，搖勻，配成對照品貯備液。再分別精密量取 3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 mL 置 10 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，分別取20 μL進(jìn)樣，測定峰面積，以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(C，μg/mL)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線 A=17 462.9 C+540.7，r=0.999 7(n=5)。結(jié)果表明，普瑞巴林質(zhì)量濃度在598.8～1 397.2 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

最低檢測限:取普瑞巴林對照品適量，加流動相溶解并逐級稀釋，進(jìn)樣20μL測定。按3倍信噪比計算，普瑞巴林最低檢測質(zhì)量濃度為 4.94 μg/mL。

進(jìn)樣精密度:精密稱取普瑞巴林對照品25.1 mg，置25 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的RSD為0.92%，表明方法進(jìn)樣精密度良好。

中間精密度:分別取樣品膠囊(批號為20090125)內(nèi)容物細(xì)粉適量(約相當(dāng)于普瑞巴林25 mg)，精密稱定，由不同的操作者，使用不同的儀器，于不同的時間，照含量測定項下方法操作，測定并計算普瑞巴林膠囊的含量。結(jié)果平均含量為101.1%，RSD=0.89%，表明方法的中間精密度良好。

重復(fù)性:取本品膠囊(批號為20090125)內(nèi)容物細(xì)粉適量(約相當(dāng)于普瑞巴林25 mg)，共6份，精密稱定，分別置25 mL量瓶中，加流動相至3/4量瓶，超聲5 min，加流動相至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，取20 μL進(jìn)樣測定，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算普瑞巴林的含量。結(jié)果平均含量為100.1%，RSD=1.05%(n=6)，表明方法的重復(fù)性較好。

加樣回收試驗:取已知含量(99.6%)的膠囊內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于普瑞巴林12.5 mg)，共9份，3份為1組，精密稱定，分別置25 mL量瓶中;分別精密加入對照品貯備液(1.996 g/L)5.0，6.2，7.5 mL制成低、中、高3種不同質(zhì)量濃度的溶液(各3份，每份平行操作2份)，加流動相稀釋至刻度，精密量取20 μL進(jìn)樣，測定含量并計算普瑞巴林的回收率。結(jié)果見表1。

表1 普瑞巴林加樣回收試驗測定結(jié)果(n=9)

2.3 含量測定

取裝量差異項下膠囊內(nèi)容物細(xì)粉適量(約相當(dāng)于普瑞巴林50 mg)，置50 mL量瓶中，加流動相至約3/4量瓶，超聲5 min，加流動相至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液(1 g/L)，另取普瑞巴林對照品(約25 mg)，精密稱定，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度為1 g/L的溶液作為對照品溶液。分別取對照品溶液和供試品溶液各20 μL進(jìn)樣測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計算標(biāo)示量的百分含量。結(jié)果批號為20090314，20090316，20090318的樣品中普瑞巴林含量分別為標(biāo)示量的99.6%，101.1%，100.7%(n=3)，3批樣品的含量均符合規(guī)定。

3 討論

采用高效液相色譜法紫外檢測法測定普瑞巴林膠囊的含量，方法準(zhǔn)確度高、精密度好，適用于其質(zhì)量控制。

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