高效液相色譜法測定膽香鼻炎片中綠原酸含量

趙曉榮，郭洪麗，孫長仁，白 靜，王玉金，王宏宇

(吉林省白山市食品藥品檢驗所，吉林 白山 134300)

膽香鼻炎片是由豬膽汁膏、廣藿香、白芷、金銀花等9味中藥組成的復(fù)方制劑[1]。金銀花與其功能主治密切相關(guān)，主要活性成分為綠原酸。綠原酸含量測定方法成熟、簡便準(zhǔn)確，故采用《中國藥典(一部)》金銀花含量測定項下的方法及液相色譜條件[2]進(jìn)行含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－2010A型高效液相色譜儀，Class－vp色譜工作站。綠原酸對照品(批號為110753－200212，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為國產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:迪馬 C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:25 ℃;流動相:乙腈 －0.4% 磷酸(60 ∶40);流速:0.8 mL/min;檢測波長:327 nm;進(jìn)樣量:20 μL。在此條件下，色譜圖見圖1。理論板數(shù)按綠原酸峰計算，n=6 952，供試品色譜峰得到較好分離，參照中國藥典的規(guī)定，確定其理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取 0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，精密量取續(xù)濾液 5 mL，置 25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含8 μg的溶液，作為對照品溶液(10℃以下保存)。取不含金銀花的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，色譜圖見圖1。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相應(yīng)的色譜峰，而陰性對照品溶液無干擾，證明本法可行。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱取綠原酸對照品9.85 mg，加50%甲醇使溶解并制成質(zhì)量濃度為7.88 μg/mL的對照品溶液，分別精密吸取 5，10，15，20，30，40 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 A=2 991 453 C －3 754，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，綠原酸進(jìn)樣量在0.039 4～0.315 2 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照品溶液(3.94 μg/mL)，連續(xù)進(jìn)樣依法測定。結(jié)果主成分峰面積的 RSD=1.0%(n=5)，表明方法的精密度較好。

穩(wěn)定性試驗:取同一綠原酸對照品溶液(7.88 μg/mL)，依法測定，每隔3 h進(jìn)樣1次。結(jié)果峰面積的 RSD=0.4%，表明綠原酸的50%甲醇溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

重現(xiàn)性試驗:取同一批(批號為090105)樣品，依法測定。結(jié)果的 RSD=0.7%(n=5)，表明方法具有良好的重現(xiàn)性。

加樣回收試驗:取已測知含量的同批樣品(批號為090101，含量為1.384 1 mg/g)0.25 g，取6份，精密稱定，兩份為一組，分別精密加入綠原酸對照品 0.394，0.078 8，1.182 mg，依法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別取10個批號的樣品，按擬訂的含量測定方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。按2005年版《中國藥典(一部)》金銀花藥材含量測定方法，測定3批金銀花藥材中綠原酸的含量，結(jié)果見表3。根據(jù)10批樣品及3批藥材的含量測定結(jié)果，考慮到綠原酸的不穩(wěn)定性以及生產(chǎn)工藝過程中的波動等因素，暫訂本品每片含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計，不得少于 0.30 mg。

表2 10批樣品中綠原酸含量測定結(jié)果(mg/g)

表3 金銀花藥材含量測定結(jié)果

3 討論

取綠原酸對照品的 50%甲醇溶液(7.88 μg/mL)，經(jīng)島津UV－2450型紫外分光光度計在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果綠原酸在327 nm波長處有最大吸收，故確定327 nm波長為測定波長。經(jīng)過多次試驗，高效液相色譜法測定金銀花中綠原酸的含量，使原標(biāo)準(zhǔn)得到了提高，有效地控制了藥品的內(nèi)在質(zhì)量。

[1]WS3－B－0795－91，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:152.