高效液相色譜法測定膽香鼻炎片中綠原酸含量

趙曉榮，郭洪麗，孫長仁，白 靜，王玉金，王宏宇

(吉林省白山市食品藥品檢驗所，吉林 白山 134300)

膽香鼻炎片是由豬膽汁膏、廣藿香、白芷、金銀花等9味中藥組成的復方制劑[1]。金銀花與其功能主治密切相關，主要活性成分為綠原酸。綠原酸含量測定方法成熟、簡便準確，故采用《中國藥典(一部)》金銀花含量測定項下的方法及液相色譜條件[2]進行含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－2010A型高效液相色譜儀，Class－vp色譜工作站。綠原酸對照品(批號為110753－200212，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為國產分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:迪馬 C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:25 ℃;流動相:乙腈 －0.4% 磷酸(60 ∶40);流速:0.8 mL/min;檢測波長:327 nm;進樣量:20 μL。在此條件下，色譜圖見圖1。理論板數按綠原酸峰計算，n=6 952，供試品色譜峰得到較好分離，參照中國藥典的規定，確定其理論板數按綠原酸峰計算應不低于3 000。

2.2 溶液制備

取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取 0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇25 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，用50%甲醇補足減失的質量，濾過，精密量取續濾液 5 mL，置 25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含8 μg的溶液，作為對照品溶液(10℃以下保存)。取不含金銀花的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，色譜圖見圖1。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上有相應的色譜峰，而陰性對照品溶液無干擾，證明本法可行。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密稱取綠原酸對照品9.85 mg，加50%甲醇使溶解并制成質量濃度為7.88 μg/mL的對照品溶液，分別精密吸取 5，10，15，20，30，40 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標、進樣量為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為 A=2 991 453 C －3 754，r=0.999 9(n=6)。結果表明，綠原酸進樣量在0.039 4～0.315 2 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液(3.94 μg/mL)，連續進樣依法測定。結果主成分峰面積的 RSD=1.0%(n=5)，表明方法的精密度較好。

穩定性試驗:取同一綠原酸對照品溶液(7.88 μg/mL)，依法測定，每隔3 h進樣1次。結果峰面積的 RSD=0.4%，表明綠原酸的50%甲醇溶液在12 h內穩定性較好。

重現性試驗:取同一批(批號為090105)樣品，依法測定。結果的 RSD=0.7%(n=5)，表明方法具有良好的重現性。

加樣回收試驗:取已測知含量的同批樣品(批號為090101，含量為1.384 1 mg/g)0.25 g，取6份，精密稱定，兩份為一組，分別精密加入綠原酸對照品 0.394，0.078 8，1.182 mg，依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別取10個批號的樣品，按擬訂的含量測定方法進行測定，結果見表2。按2005年版《中國藥典(一部)》金銀花藥材含量測定方法，測定3批金銀花藥材中綠原酸的含量，結果見表3。根據10批樣品及3批藥材的含量測定結果，考慮到綠原酸的不穩定性以及生產工藝過程中的波動等因素，暫訂本品每片含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計，不得少于 0.30 mg。

表2 10批樣品中綠原酸含量測定結果(mg/g)

表3 金銀花藥材含量測定結果

3 討論

取綠原酸對照品的 50%甲醇溶液(7.88 μg/mL)，經島津UV－2450型紫外分光光度計在200～400 nm波長范圍內掃描，結果綠原酸在327 nm波長處有最大吸收，故確定327 nm波長為測定波長。經過多次試驗，高效液相色譜法測定金銀花中綠原酸的含量，使原標準得到了提高，有效地控制了藥品的內在質量。

[1]WS3－B－0795－91，衛生部藥品標準·中藥成方制劑(第四冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:152.