反相高效液相色譜法測定布南色林原料的含量及有關物質

廖華衛，陳 云，白家和

(廣東省雷州市人民醫院，廣東 湛江 524200)

布南色林是由日本住友制藥株式會社開發的口服制劑，現已在日本上市，在美國和歐洲正進行Ⅲ期臨床[1]。本品為高度選擇性的5－羥色胺2受體和多巴胺2受體拮抗劑，對多巴胺1和腎上腺素α1、H1組胺受體和M1膽堿受體親和力較小，臨床主要用于治療非典型性精神病[2]。本品屬第2代抗精神病藥物，錐體外系反應比市場上現有抗精神病藥的要少。為考察布南色林原料的質量，筆者對其質量控制中的有關物質及含量測定方法進行了研究，報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC10Avp型高效液相色譜儀(日本島津)。布南色林對照品(自制，含量不少于99.9%，批號為100101);布南色林原料(自制，批號為100201，100202，100203);甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸二氫鈉、庚烷磺酸鈉等其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Waters Xterra RP18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－甲醇－25 mmol/L的磷酸二氫鈉溶液(內含25 mmol/L庚烷磺酸鈉，用磷酸調 pH 至 3.0，35 ∶30 ∶35);流速:1 mL/min;檢測波長:243 nm;柱溫:30℃;進樣量:10 μL。在此條件下，供試品溶液色譜中布南色林峰能達到基線分離，理論板數按布南色林峰計應不低于3 000。色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取布南色林對照品10.22 mg，加甲醇溶解，并定容至50 mL容量瓶中，得質量濃度為0.204 4 g/L的布南色林對照品貯備液。精密移取1 mL布南色林對照品貯備液，置10 mL容量瓶中，得到0.020 44 g/L的對照品溶液。取布南色林原料，研細，精密稱取布南色林10.46 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇充分溶解并定容至刻度，搖勻，濾過，即得供試品貯備液，作為有關物質測定用供試品溶液。精密量取續濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得含量測定用供試品溶液。精密移取供試品溶液1 mL，加甲醇稀釋并定容至100 mL的容量瓶中，即得對照溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:取布南色林原料研細粉末，精密稱取布南色林100 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得布南色林原溶液。分別精密量取5 mL布南色林原溶液至5個50 mL容量瓶中，取3份分別加入1 mol/L鹽酸、1 mol/L NaOH溶液各5mL和10%過氧化氫溶液1mL，置水浴加熱10 min;第4份置105℃烘箱中5 h;第5份置光照強度(4 500±500)lx條件下光照5 d;然后將酸、堿降解的溶液調pH至中性，用甲醇定容，搖勻，作為各破壞方法的有關物質供試品溶液。精密量取各有關物質的供試品溶液、對照溶液10 μL，分別進樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。結果表明主峰和降解產物能達到基線分離，分離度符合要求，空白溶劑對主峰和降解產物測定無干擾，表明此方法專屬性強。色譜圖如圖1 D－H。

線性關系考察:精密量取對照品貯備液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 μL注入液相色譜儀，按2.1項下色譜條件測定布南色林峰面積，以布南色林質量濃度(C)為橫坐標、峰面積(A)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 A=－15 334.9+14 793 787.2 C，r=0.999 4(n=6)。結果表明，布南色林進樣濃度在 1.022～10.22 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:取對照品溶液6份，依法測定。結果布南色林峰面積的 RSD=1.2%(n=6)，表明此法精密度好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別放置 0，2，4，8，12，24 h后進樣測定。結果布南色林峰面積的 RSD=0.7%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

重復性試驗:取樣品(批號為100202)6份，精密稱定，依法制成供試品溶液，照2.1項下色譜條件進樣測定。結果布南色林含量的平均值為 99.68%(g/g)，RSD=0.8%(n=6)。

定量限測定:取取布南色林對照品溶液，稀釋測定至信噪比為10∶1時的相應質量濃度測定定量限。結果定量限是2 ng。

回收率試驗:精密稱取布南色林樣品(含量99.84%)9份，每份約相當于布南色林20 mg，分別置100 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲溶解并定容至刻度，配制成3個不同質量濃度的溶液。搖勻，過濾。精密量取續濾液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得供試品溶液。按2.1項下色譜條件進樣測定布南色林的峰面積，并計算其回收率。結果見表1。

表1 回收率試驗結果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取布南色林樣品，研細，精密稱取約10 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，過濾精密量取續濾液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定布南色林峰面積，并計算其含量。結果表明，3批樣品的含量分別為 99.6%，99.6%，99.7%，平均含量為 99.6%，RSD=0.1%。

2.5 有關物質檢查

取回收率試驗項下樣品作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1 mL，加流動相稀釋至100 mL量瓶中，作為布南色林對照溶液。取10 μL對照溶液進樣，調節檢測靈敏度，使主峰峰高為滿量程的20%;再精密量取10 μL供試品溶液進樣，記錄色譜至主成分峰保留時間的3倍。結果3批樣品中的有關物質的峰面積總和分別為0.22% ，0.24% ，0.15% ，單個雜質均小于 0.1% ，總雜質均小于1.0%，符合新藥研發有關雜質研究的指導原則。

3 討論

從結構可知，布南色林是一個呈堿性的有機化合物，難容于甲醇、乙醇、水。根據其特性，加入離子對試劑磷酸二氫鈉與庚烷磺酸鈉后，與布南色林形成中性的分子態物質，大大增強了布南色林的保留能力，所得峰形較好，可獲得較高的理論板數，拖尾因子達到要求，經方法學驗證結果滿意。該方法簡便準確、專屬性強、精密度好、回收率高，為考察布南色林片的含量以及穩定性試驗提供可靠的方法。

在建立布南色林有關物質含量測定的方法過程中，本試驗添加相當于1%布南色林濃度的中間體4－(4－氟苯基)－5，6，7，8，9，10－六氫環辛烷并[b]吡啶 －2(1H)－酮以及2－氯－4－(4－氟苯基) －5，6，7，8，9，10 － 六氫環辛烷并[b]吡啶考察方法的專屬性，模擬布南色林中可能存在的雜質狀態，驗證即有少量雜質存在時布南色林與雜質的分離情況，而不以相同濃度的布南色林與中間體混合進樣(因為實際檢測中不可能存在這樣的狀況)。強力破壞試驗是為了揭示布南色林的內在穩定性，也是研發中不可缺少的一部分，這些試驗是在比加速試驗更猛烈的條件下進行，包含了藥品在銷售、運輸過程中可能遇到的各種復雜情況，以證明在所選色譜條件下，能否檢測出在此劇烈條件下所產生的雜質。結果顯示，雜質與主峰、雜質與雜質間的分離度均符合要求，表明該法專屬性強，適用于布南色林有關物質的含量測定。

[1]王俊芳，王小妹，王哲烽，等.布南色林的合成[J].中國醫藥工業雜志，2009，40(4):247 －254.

[2]王曉潔，朱忠華.抗精神分裂癥藥布南色林的合成[J].科教文匯，2007，12(4):219.