高效液相色譜法測定結腸消炎丸中蘆丁含量

徐艷紅，陸 君，郭漢文，陳靜蘇

(1.遼寧省錦州市食品藥品檢驗所，遼寧 錦州 121001; 2.遼寧省食品藥品檢驗所，遼寧 沈陽 110023;3.遼寧省錦州市中醫醫院藥劑科，遼寧 錦州 121000)

結腸消炎丸為醫院制劑，由補骨脂、訶子、地榆、槐花等8味中藥組方，是將中藥粉碎后制成的大蜜丸，功能止血收斂、行氣止瀉、緩急止痛，用于治療泄瀉、休息痢等疾病。筆者采用高效液相色譜法測定結腸消炎丸中蘆丁的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

日立L－2000型高效液相色譜儀，包括日立L－2130泵、日立L－2300柱溫箱、D－2000 Elite色譜工作站、日立L－2400紫外檢測器;BP－211D型電子天平。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為100080－200707);樣品、陰性樣品均由某醫院制劑室提供(批號分別為100901，101002，101103);乙腈為色譜純(天津市科密歐化學試劑有限公司)，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse XDB －C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－水(15∶85);流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃;檢測波長:257 nm;進樣量:5 μL。理論板數按蘆丁峰計算不低于3 000，分離度大于 1.5。

2.2 溶液制備

取于120℃干燥至恒重的蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得對照品溶液。取本品大蜜丸剪碎，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)45 min，強力振搖10 min，放冷，再稱定質量，搖勻，濾過，取濾液25 mL，殘渣加水25 mL，微熱使溶解，放冷，用水飽和的正丁醇提取3次，每次25 mL，合并正丁醇液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇適量使溶解轉移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液[1]。按處方比例及制備方法制備不含槐花的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各5 μL，照擬訂的色譜條件測定。結果供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰的保留時間一致，且陰性無干擾。色譜圖見圖1。

線性關系考察:精密稱取蘆丁對照品 13.14 mg，置 25 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 1，3，5，7，9，11，13，15 μL 注入色譜儀中測定，以峰面積積分值為縱坐標(Y)、蘆丁進樣量為橫坐標(X)繪制標準曲線，回歸方程為 Y=1 804 956.01X －184 543.67，r=0.999 7(n=8)。結果表明，蘆丁進樣量在 0.525 6 ～7.884 0 μg范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

穩定性試驗:取同一供試品(批號為101103)溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12，14 h 時進樣測定。結果蘆丁峰面積平均值為2 193 905.2，RSD 為 1.5%(n=8)，表明供試品溶液穩定性良好。

精密度試驗:取同一對照品溶液連續進樣。結果蘆丁峰面積平均值為2 194 333，RSD為0.8%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品(批號為101103)，依法制備供試品溶液，依法測定。結果蘆丁平均含量為 5.241 1 mg/g，RSD為0.3%(n=6)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為101103，含量為5.241 1 mg/g)適量，共6份，分別加入高、中、低質量濃度的蘆丁對照品溶液，按供試品溶液的制備與測定方法操作，測定蘆丁含量，并計算回收率。結果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 蘆丁加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

精密吸取供試品溶液5 μL，按擬訂的色譜條件測定，以外標兩點法計算含量。結果批號為100901，101002，101103的樣品中蘆丁分量分別為 5.239 4，5.240 5，5.241 1 mg/g。

3 討論

取蘆丁對照品溶液，照紫外－可見分光光度法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA]，在200～400 nm波長范圍內掃描，結果蘆丁在257 nm波長處有最大吸收，并結合藥典方法，因此選擇257 nm作為檢測波長[1]。將樣品分別用純水、50%甲醇、70%甲醇、50%乙醇提取，經試驗考察，50%甲醇效果最佳，成分提取完全。由于樣品中組分很多，使用正丁醇反復提取，可以消除其他干擾[2]。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:580，442.

[2]杜志茂，黃安軍，白 娟.HPLC同時測定消栓通絡膠囊中阿魏酸、蘆丁和丹酚酸B的含量[J].中成藥，2010，32(3):433－435.