一清軟膠囊含量測定方法的改進

王群英，何選林

(湖南省永州市藥品檢驗所，湖南 永州 425100)

一清軟膠囊主要由黃連、大黃、黃芩3種中藥組方，具有清熱燥濕、瀉火解毒、化瘀止血的作用，目前其質(zhì)量標準是分別測定黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量[1]。筆者采用反相高效液相色譜(RPHPLC)法同時測定一清軟膠囊中黃芩苷和鹽酸小檗堿含量[2－3]，方法簡單、快速、結(jié)果直觀，同時節(jié)約檢驗成本，提高工作效率，有利于生產(chǎn)廠家生產(chǎn)質(zhì)量控制。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜系統(tǒng)，包括1525泵，2996型紫外檢測器(美國)，Empowers工作站。黃芩苷對照品(批號為 110715－200815)、鹽酸小檗堿對照品(批號為110713－200911)均來自中國藥品生物制品檢定所;一清軟膠囊(規(guī)格為0.5 g/粒，批號分別為20081101，20080801，20090203);乙腈為色譜純，重蒸餾水、磷酸二氫鈉為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Hypersil－ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.2%磷酸二氫鈉(用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8)－乙腈(70∶30);檢測波長:270 nm;柱溫:25℃，進樣量:10 μL。在此條件下，色譜圖見圖1。黃芩苷的保留時間為5.4 min，理論板數(shù)按黃芩苷計算為1.7×105;鹽酸小檗堿的保留時間為12.8 min，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿計算為 2.0 ×105。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芩苷對照品25 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇適量，振搖使黃芩苷溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液貯備液。精密稱取鹽酸小檗堿對照品25 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇適量，振搖使鹽酸小檗堿溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液貯備液。取本品0.25 g，置50 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;取此溶液10 mL離心10 min(轉(zhuǎn)速15 000 r/min)，分取上清液，作為供試品溶液。精密稱取大黃0.25 g，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對照品溶液貯備液各 1，2，3，5，10 mL，分別置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)，得黃芩苷的回歸方程為 Y=3 219.2+1 713 254.7 X，r=0.999 95;得鹽酸小檗堿的回歸方程為 Y=872.3+1 951 650.6 X，r=0.999 96。結(jié)果表明，黃芩苷、鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度均在10～100 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:取質(zhì)量濃度均為50 μg/mL的黃芩苷、鹽酸小檗堿對照品溶液，依法測定，記錄連續(xù)5次的峰面積。結(jié)果黃芩苷的RSD=0.62%，鹽酸小檗堿的 RSD=0.68%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗:取同一份樣品，依法測定。結(jié)果黃芩苷、鹽酸小檗堿的含量分別為 13.35 mg/g和 12.89 mg/g，RSD 分別為 0.83%和0.72%(n=5)，表明方法重復(fù)性好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0，4，8，12，16 h 時測定黃芩苷和鹽酸小檗堿含量。結(jié)果每克樣品含黃芩苷分別為13.34，13.35，13.36，13.34，13.35 mg，RSD=0.75%;每克樣品含鹽酸小檗堿分別為 12.88，12.86，12.87，12.86，12.86 mg，RSD=0.80%。結(jié)果表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

陰性對照試驗:取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，依法進樣，色譜圖見圖1，表明陰性對照無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

加樣回收試驗:取已知含量的同一批樣品6份，精密稱定，分別精密加入對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取供試品溶液與黃芩苷、鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度各為50 μg/mL的對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3，mg/g)

3 討論

選用較常用的C18柱和以0.2%磷酸二氫鈉(用磷酸調(diào)pH至2.8)－乙腈(70∶30)為流動相，檢測波長270 nm，得到了良好分離效果，且配置簡單。經(jīng)紫外掃描，黃芩苷在 214.7，277.2，316.3 nm 波長處均有最大吸收，鹽酸小檗堿在 228.8，264.1，347.3 nm 波長處均有最大吸收，且在270 nm波長處黃芩苷與鹽酸小檗堿吸光度都較大，故選270 nm作為測定波長。

[1]YBZ00192005，國家食品藥品監(jiān)督管理局標準(試行)[S].

[2]李 妍，宋舒暖，李留法，等高效液相色譜法同時測定清新靈微丸中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20(11):2 773－2 774.

[3]張 婷，周平蘭，HPLC法測定復(fù)方芩柏顆粒中黃芩苷和鹽酸小檗堿含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2009，20(4):349 －351.