補金片質量標準研究

姜澤，李東飛，姚維民，王琦，孫玉濱*

(1.吉林農業大學，吉林 長春 130118；2.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033)

補金片質量標準研究

姜澤1，李東飛2，姚維民2，王琦1，孫玉濱2*

(1.吉林農業大學，吉林 長春 130118；2.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033)

目的：完善補金片的質量標準。方法：采用TLC對紅參、陳皮、當歸、桔梗進行了鑒別；采用HPLC測定了紅參中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量。結果：樣品TLC色譜中，紅參、陳皮、當歸、桔梗的鑒別斑點清晰，重現性好。對紅參中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re進行了含量測定，結果人參皂苷Rg1在0.18～2.01 μg、人參皂苷Re在0.20～2.20 μg，呈良好線性關系(r=0.999 9)，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的平均回收率分別為98.5 %(RSD=1.3 %)和100.1 %(RSD=1.6 %)。結論：本方法結果準確、操作簡便，為該制劑的質量控制和標準提升提供了科學依據。

補金片；TLC;HPLC;質量標準

補金片是由紅參、陳皮、桔梗等18味中藥組成的復方制劑,具有補腎益肺，健脾化痰，止咳平喘的功效。用于治療肺結核，慢性支氣管炎，肺氣腫，肺心病等疾病。原標準只收載了片劑項下的檢查項目，為有效地控制其內在質量,本文采用HPLC對處方中紅參中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re進行了含量測定,并對紅參、陳皮、桔梗、蛤蚧、當歸進行了薄層色譜鑒別。所建立的方法簡便可行,重現性好,對控制和評價補金片產品質量提供了依據，具有實際應用價值。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津-2010A、Agilent1100 series高效液相色譜儀。

1.2 試藥

人參皂苷Re、Rg1、Rb1對照品(批號分別為：110754-200421，110734-200726，110704-20042，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用)。紅參對照藥材(批號：121045-200503)、陳皮對照藥材(批號：120969-200406)、當歸對照藥材(批號：120927-200411)、桔梗對照藥材(批號：121028-200304)均購自中國藥品生物制品檢定所。

薄層板(天津思利達科技有限公司，批號：090608，規格：10 cm×10 cm)，薄層硅膠G板(青島海洋化工廠，批號：20090304，規格：10 cm×10 cm)。

乙腈為色譜純；水為經MILLIPOR純水器所得純化水；其他試劑均為分析純。

補金片樣品(集安益盛制藥業集團有限公司，批號：091107，20100227，20100321；吉林茂祥藥業有限公司，批號：20090401；通化華晨藥業有限公司，批號：0900201，20100102，20100103；通化百信藥業有限公司，批號：20100103，20100104；吉林天泰藥業有限公司，批號：090201)。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 紅參的鑒別 取本品10 g，研細，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL溶解；置分液漏斗中，用三氯甲烷提取2次，每次20 mL，棄去三氯甲烷液；水溶液用水飽和的正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液輕輕搖洗2次，每次20 mL,棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20 mL,棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1、Re及Rg1對照品，加甲醇制成1 mL各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。再取紅參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗[1]，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品、對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同顏色的斑點，見圖1。置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色熒光斑點，見圖2。

1.人參皂苷Rb1，2.人參皂苷Re，3.人參皂苷Rg1，4.紅參對照藥材，5.供試品(通化百信藥業有限公司，批號：100104)6.供試品(通化華辰藥業股份有限公司，批號：091201)7.供試品(通化百信藥業有限公司，批號：091107) 8.陰性樣品圖1 紅參薄層色譜圖

1.人參皂苷Rb1，2.人參皂苷Re，3.人參皂苷Rg1，4.紅參對照藥材，5.供試品(通化百信藥業有限公司，批號：100104)6.供試品(通化華辰藥業股份有限公司，批號：091201)7.供試品(通化百信藥業有限公司，批號：091107) 8.陰性樣品圖2 紅參薄層色譜圖(紫外365 nm)

2.1.2 陳皮的定性鑒別[2]取本品5 g，研細，加乙醇40 mL，置水浴上加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次(15 mL,10 mL)，棄去乙醚液，再用水飽和正丁醇提取4次(15,10,10,10 mL)，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取陳皮對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取橙皮苷對照品，加甲醇制成1 mL各含1 mg溶液，照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇(5∶1∶1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5 %三氯化鋁乙醇溶液，置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品、對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖3。

1.橙皮苷，2.陳皮對照藥材，3.供試品(通化華辰藥業股份有限公司，批號：091201);4.供試品(通化百信藥業有限公司，批號：091107)5.供試品(吉林省集安益盛藥業股份有限公司，批號：100227)6.陰性樣品圖3 陳皮薄層色譜圖(紫外365 nm)

2.1.3 當歸的定性鑒別 取本品10 g，研細，加乙醚40 mL，冷浸1 h，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材1 g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取供試品溶液10 μL，對照藥材溶液5 μL,分別點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-醋酸乙酯(85∶15)為展開劑，展開，展距8 cm，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖4。

1.供試品(通化華辰藥業股份有限公司，批號：100102)2.供試品(吉林省集安益盛藥業股份有限公司，批號：091107)3.供試品(通化華辰藥業股份有限公司，批號：091201)4.陰性樣品 5.當歸對照藥材圖4 當歸薄層色譜圖(紫外365 nm)

2.1.4 桔梗的定性鑒別 取本品5 g，研細，加乙醇30 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取桔梗對照藥材1 g，加乙醇20 mL，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯(3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖5。

1.桔梗對照藥材 2.供試品(吉林省集安益盛藥業股份有限公司，批號：100321)3.供試品(通化百信藥業有限公司，批號：100104)4.供試品(通化華辰藥業股份有限公司，批號：091201)5.供試品(通化百信藥業有限公司，批號：091107) 6.陰性樣品圖5 桔梗薄層色譜圖

2.2 紅參的含量測定研究

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取在105 ℃干燥12 h的人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品30片，去包衣，精密稱定，研細，精取3.0 g，置于索氏提取器中，加石油醚(30～60 ℃)50 mL，加熱回流2 h，棄去石油醚，揮干藥渣溶劑，加甲醇45 mL，回流提取至無色，定量轉移至50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，備用。精密吸取25 mL，水浴蒸干，殘渣加水15 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定量轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按照處方量制得不含紅參的陰性對照溶液，依上述方法測定。

2.2.4 系統適用性試驗 色譜柱：Alltima擴展C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱,以乙腈-水(19∶81)為流動相，流速0.8 mL·min-1進行洗脫，檢測波長為203 nm，理論板數不低于6 000。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性樣品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定，色譜圖見圖6。

A. 紅參對照品，B. 補金片樣品，C.缺紅參陰性對照品圖6 補金片、紅參對照品、陰性對照品HPLC圖

2.2.5 標準曲線制備 精密稱取人參皂苷Re、Rg1混合對照品適量，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.182 8 mg、Re 0.206 6 mg的溶液，分別精密吸取1，3，5，7，9，11 μL測定，以對照品溶液的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，人參皂苷Rg1Y=499 520.55X+15 768.69，r=0.999 7；人參皂苷ReY=417 758.68X+11 893.68,r=0.999 7。結果表明人參皂苷Rg1在0.18～2.01 μg、人參皂苷Re在0.20～2.20 μg，呈良好線性關系，符合外標法定量測定的要求。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取供試品溶液5 μL(集安益盛藥業樣品，批號：20100227)，注入液相色譜儀，重復進樣6次，測定其色譜峰面積，人參皂苷Rg1的RSD=0.35 %，人參皂苷Re的RSD=1.07 %，結果表明所用儀器具良好的精密性。

2.2.7 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液5 μL(集安益盛藥業樣品，批號：20100227)，按上述色譜條件，在1，2，3，4，5，6 h進行測定，記錄其峰面積，人參皂苷 Rg1的RSD=0.28 %，人參皂苷Re的RSD=2.13 %，結果表明6 h內供試品溶液中人參皂苷Rg1、Re的含量基本穩定。

2.2.8 重復性試驗 取同一批號樣品(集安益盛藥業樣品，批號：20100227)，按上述色譜條件測定6次，人參皂苷Rg1平均含量為0.444 mg/片，RSD=1.51 %；人參皂苷Re平均含量為0.079 mg/片，RSD=1.79 %，結果表明本法具有良好的重復性。

2.2.9 回收率試驗 精密稱取已知含量的供試品(集安益盛藥業樣品，批號：20100227，含量：人參皂苷Rg11.605 4 mg·g-1、人參皂苷Re 0.285 5 mg·g-1)6份，每份1.5 g，分別精密加入對照品溶液人參皂苷Rg1(0.590 1 mg·mL-1)2 mL、人參皂苷Re(0.556 2 mg·mL-1)1 mL，揮干溶劑，按上述色譜條件測定，計算回收率，結果見表1、2。

表1 人參皂苷Rg1回收率試驗

注：人參皂苷Rg1對照品加入量均為1.180 2 mg

表2 人參皂苷Re回收率試驗

注：人參皂苷Re對照品加入量均為0.556 2 mg

2.2.10 樣品含量測定結果 取不同生產批號的樣品，分別依上述色譜條件測定10批樣品，結果見表3。

表3 10批補金片樣品中人參皂苷Rg1、Re總和測定結果 /mg/片

注：n=2

3 討論

3.1 薄層鑒別

紅參的薄層色譜鑒別，對于展開劑的選擇，通過預實驗，比較三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10 ℃以下放置的下層溶液和以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置的下層溶液，結果顯示以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，效果較好。桔梗的薄層色譜鑒別，對于展開劑的選擇，比較三氯甲烷-醋酸乙酯(2∶1)與三氯甲烷-醋酸乙酯(3∶1)結果顯示，以三氯甲烷-醋酸乙酯(3∶1)為展開劑，效果較好。

3.2 紅參的含量測定

進行了提取方法的考察，比較加熱回流至無色、超聲處理1 h，正丁萃取法、回流3 h，正丁萃取法。結果表明，加熱回流至無色的方法提取效果最好。對色譜柱進行了比較，Alltima HC C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱和Venuswl ASB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱能在60 min內將人參皂苷Re、Rg1混合對照品溶液完全分離，Diamansil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱超過100 min，說明其對色譜柱有一定的選擇性。

[1] 苗明三,李振國.現代實用中藥質量控制技術[M].北京：人民衛生出版社，2007：26.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社,2010：213.

TheStudyonQualityStandardofBujinTablet

JIANG Ze1,LI Dong-fei2, YAO Wei-min2, WANG Qi1, SUN Yu-bin2

(1.CollegeofChineseMedicinalMaterials,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China;2.JilinInstituteforFood&DrugControl,Changchun130033,China)

Objective: To perfect the quality standard of Bujin tablets.Methods: Identified red ginseng, dried tangerine peel, angelica, and balloonflower by TLC. The content of ginsenoside Rg1and ginsenoside Re in red ginseng were determined by HPLC.Results: In TLC chromatography, the spots of red ginseng, dried tangerine peel, angelica, and balloonflower were clear and have a good reproducibility. In the content determination experiments, the results showed that it has a good linear relationship when ginsenoside Rg1was in 0.18～2.01 μg and ginsenoside Re was 0.20～2.20 μg (r=0.999 9). The average recovery of ginsenoside Rg1is 98.5 %(RSD=1.3 %). The average recovery of ginsenoside Re is 100.1 %(RSD=1.6 %).Conclusion: The results of this method are accurate and convenient which provide a scientific basis for the quality control and standards enhancing of Bujin tablets.

Bujin tablet; TLC; HPLC; Quality standards

*孫玉濱，Tel：(0431)87913255,E-mail：syb5151@163.com

2010-09-13)