水通道蛋白1在卵巢癌組織中的表達(dá)

王艷麗,朱繼紅,高永梅,張利群

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,吉林長(zhǎng)春130021)

卵巢癌患者大多伴有大量腹水,目前其病理機(jī)制尚不完全清楚。水通道蛋白1(AQP1)是Agre最早發(fā)現(xiàn)的水通道,它分布廣泛,具有特異轉(zhuǎn)運(yùn)水的功能,與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān),目前已成為眾多學(xué)者研究的熱點(diǎn)[1]。AQP-1與卵巢腫瘤的關(guān)系國(guó)內(nèi)外至今報(bào)道很少,本試驗(yàn)通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)AQP1在卵巢癌組織的表達(dá),并初步探討其意義。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集吉林大學(xué)第一、第二醫(yī)院2000-2004年手術(shù)治療的66例卵巢漿液性腫瘤標(biāo)本和10例卵巢正常組織作為對(duì)照。66例卵巢漿液性腫瘤標(biāo)本中,良性12例,交界性8例,惡性46例,在46例卵巢漿液性惡性腫瘤中,從病理分化程度上看:高分化12例,中分化18例,低分化16例;從臨床分期上看:Ⅰ期14例,Ⅱ期18例,Ⅲ-Ⅳ期14例;有腹水36例(腹水均以腹腔穿刺放液或開(kāi)腹后以出量計(jì)算,＞200 ml認(rèn)為有腹水)。患者年齡38-83歲,平均年齡58歲。上述標(biāo)本離體后經(jīng)4%多聚甲醛固定48小時(shí),石蠟包埋,連續(xù)切片3 μ m厚,HE染色,病理證實(shí)。

1.2 試劑與方法 AQP1單克隆抗體及SP試劑盒由福州邁新公司提供,常規(guī)免疫組織化學(xué)染色,DAB發(fā)色。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照,分別以已知的AQP1陽(yáng)性的卵巢癌組織切片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果觀察和判定

AQP1腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽(yáng)性細(xì)胞,表達(dá)的判定以陽(yáng)性細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)估。陽(yáng)性細(xì)胞＞50%為陽(yáng)性表達(dá);陽(yáng)性細(xì)胞＜50%為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 各組率的比較采用 χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 AQP1在正常卵巢組織及卵巢漿液性腫瘤組織中的表達(dá)

AQP1在卵巢漿液性癌及卵巢交界性漿液性腫瘤中陽(yáng)性率分別為82.6%和62.5%,明顯高于正常卵巢,差異有顯著性(P＜0.05)。卵巢良性漿液性腫瘤陽(yáng)性率為25%,與正常卵巢組織比較,差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。(見(jiàn)表1)

表1 AQP1在正常卵巢和卵巢漿液性腫瘤組織中的表達(dá)

2.2 AQP1表達(dá)與卵巢漿液性癌臨床病理特征

卵巢漿液性癌中AQP1的表達(dá)與臨床分期、病理分級(jí)以及有無(wú)腹水的關(guān)系見(jiàn)表2,不同臨床分期和病理分級(jí)的卵巢漿液性癌組織中AQP1陽(yáng)性率比較,差異均無(wú)顯著性(P＞0.05);卵巢漿液性癌有無(wú)腹水時(shí)癌組織AQP1表達(dá)陽(yáng)性率分別為72.2%和40%,兩者比較,差異有顯著性(P＜0.05)。

表2 卵巢漿液性癌不同臨床病理特征與AQP1表達(dá)的關(guān)系

3 討論

1988年Agre等在鑒別人類(lèi)Rh血型抗原時(shí)偶然在紅細(xì)胞膜上發(fā)現(xiàn)了1種新的跨膜蛋白[1]。1991-1992年Agre等又完成了該蛋白的分子克隆和功能鑒定,證明該蛋白具有水通道功能,從而確認(rèn)了細(xì)胞膜上存在轉(zhuǎn)運(yùn)水的水通道蛋白的理論[2]。這種新的跨膜蛋白分子量為2.8×103,于1997年被正式命名為水通道蛋白1(AQP1).隨后,在許多動(dòng)、植物及微生物中相繼發(fā)現(xiàn)水通道蛋白。目前哺乳動(dòng)物的組織中已經(jīng)鑒定13種水通道白(AQP0-AQP12),廣泛分布于各種組織和器官,在維持機(jī)體的水平衡中起著重要的作用,且與水平衡紊亂所造成的一些疾病密切相關(guān),其中以AQP1分布最廣,作用最多。AQP1廣泛分布于機(jī)體,特別是那些與液體吸收和分泌有關(guān)的上皮細(xì)胞及可能協(xié)同水跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的內(nèi)皮細(xì)胞中,AQP1只允許水自由雙向的穿過(guò)細(xì)胞膜,不轉(zhuǎn)運(yùn)離子,質(zhì)子等[3]。研究發(fā)現(xiàn):多種腫瘤組織亦表達(dá)AQP1,可能與腫瘤細(xì)胞的起源,生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[4,5]。此外,在微血管內(nèi)皮細(xì)胞也發(fā)現(xiàn)AQP1的高度表達(dá),推測(cè)AQP1的高表達(dá)也可能與腫瘤的血管新生有關(guān)[6-8]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):AQP1在正常卵巢、卵巢良性漿液性腫瘤、卵巢交界性漿液性腫瘤、卵巢漿液性癌腫均有表達(dá)。與正常卵巢陽(yáng)性率20%比較,卵巢交界性漿液性腫瘤、卵巢漿液性癌陽(yáng)性率分別為82.6%和62.5%,明顯高于正常卵巢,差異有顯著性(P＜0.05);卵巢良性漿液性腫瘤雖有表達(dá),但是與正常卵巢組織比較,差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。卵巢癌在病理分級(jí)和臨床分期上,差異沒(méi)有顯著性(P＞0.05),與石一復(fù)[9]等研究結(jié)果不同,考慮可能和研究樣本的數(shù)量相對(duì)較少有關(guān)。由此推測(cè)考慮AQP1可能與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。卵巢漿液性腫瘤腹水的發(fā)生均在惡性腫瘤中出現(xiàn),交界性和良性腫瘤中均未出現(xiàn),而且惡性卵巢漿液性腫瘤有腹水和無(wú)腹水AQP1的表達(dá)比較差異有顯著性(P＜0.05),由此推測(cè)卵巢癌的腹水的發(fā)生可能和AQP1有關(guān)。

AQP1在腹膜毛細(xì)血管、內(nèi)皮細(xì)胞、間皮細(xì)胞均有表達(dá),考慮與腹水的吸收有關(guān);Yang等[10]應(yīng)用基因敲除技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)AQP1敲除后的小鼠對(duì)水通透性能力明顯下降,但對(duì)非滲透性水重吸收無(wú)影響。Akiba等[11]利用腹膜間皮細(xì)胞培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn):隨著培養(yǎng)液中葡萄糖和甘露醇濃度的升高,AQP1mRNA表達(dá)增強(qiáng),這就為細(xì)胞因子血管活性介質(zhì)、滲透性物質(zhì)調(diào)節(jié)腹膜AQP1表達(dá)和水轉(zhuǎn)運(yùn)提供可能,也為今后調(diào)控AQP1來(lái)改變腹膜水通透探索一系列藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)(包括增加腹水重吸收及加強(qiáng)利尿藥物的療效)。本研究明確了AQP1在卵巢癌組織中高表達(dá),可能為卵巢癌的病理機(jī)制和卵巢癌腹水的發(fā)生到增多可能提供了新的理論依據(jù),為卵巢癌的臨床治療提供新的靶點(diǎn)。

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