HPLC法測定不同產地芍藥中丹皮酚的含量

湘潭職業技術學院 李俊雅 李 君

河南羚銳制藥股份有限公司 袁德先

HPLC法測定不同產地芍藥中丹皮酚的含量

湘潭職業技術學院 李俊雅 李 君

河南羚銳制藥股份有限公司 袁德先

芍藥藥材來源于毛茛科植物芍藥（Paeonia lacilfora Pall）的干燥根，收載于《中國藥典》2010年版1部。中醫臨床用于治療頭痛眩暈，肋痛、腹痛，四肢攣痛，血虛萎黃，月經不調，自汗、盜汗。現代研究證明丹皮酚是芍藥藥材主要活性成分之一。本文，筆者以丹皮酚含量變化為依據，用高效液相法測定不同產地芍藥中丹皮酚的含量。

一、儀器與樣品

儀器為島津LC-20AT高效液相色譜儀，SPD-20A型紫外檢測器，CTO-10A S vp型柱溫箱，CBM-102型工作站。樣品為丹皮酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號0708-9704），芍藥樣品于2010年11月—2011年1月分別采于湖北十堰、安徽亳州、四川雅安、河南南陽、湖南懷化等地。甲醇、異丙醇、乙腈為色譜純，所用其他試劑均為分析純。

二、方法與結果

1.色譜條件與系統適用性試驗。色譜柱SHMADZU shim-pack-vp-ODS 150mm×4.6mm（column size）serial NO 8042464，柱溫：室溫。流動相：甲醇-水（60∶40）。流速：1.0m l·min-1。檢測波長：274nm，理論塔板數按丹皮酚峰計算應不低于5 000。在此條件下，丹皮酚與相鄰成分達到基線分離，與其他相鄰色譜峰分離度大于1.5，符合分離要求。（圖1，圖2）

2.溶液的制備。

（1）對照品溶液制備。取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1.0mL含0.02mg（實配為0.032mg/mL）的溶液，即得丹皮酚對照品溶液。

（2）樣品溶液制備。取芍藥藥材研細，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇，密塞，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）45min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.線性關系考察。分別精密吸取對照品溶液（0.032 0mg/ mL）5.0uL，7.0uL，10.0uL，12.0uL，15.0uL依次進入色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標（Y），含量為橫坐標（X）得回歸方程為：Y=7×106X+8384.5，r=0.9999，表明丹皮酚在0.16～0.48μg范圍內具有良好的線性關系。

4.精密度實驗。精密吸取同一丹皮酚對照溶液（0.032 0mg/ mL）10μL，按上述色譜條件下，連續進樣6次，以峰面積計算RSD值，得對照品溶液的RSD為0.55%，表明精密度良好。

5.穩定性實驗。取樣品制成供試品溶液，精密量取10μL，分別在0，1，2，4，8，12h進樣，記錄色譜峰面積，計算RSD值，測得樣品的RSD值為0.97%，表明樣品的穩定性良好。

6.重復性實驗。同一批樣品精密稱取5份，分別按樣品測定方法測定，進行HPLC分析，計算RSD值，測得供試品RSD值為1.24%，表明樣品的重現性良好。

7.加樣回收率實驗。精密稱取芍藥干燥根粗粉5份，加入一定量的丹皮酚對照品，制備樣品液，進行HPLC分析，計算加樣回收率，測得供試品RSD值為1.35%，表明樣品的加樣回收率良好。

8.樣品測定。以HPLC法分別測定采收于湖北十堰、安徽亳州、四川雅安、河南南陽、湖南懷化等地芍藥中丹皮酚的含量。結果見表1。

表 1 不同產地丹皮酚含量測定結果

三、討論

1.經紫外線掃描，丹皮酚在274nm波長處有最大吸收，在此波長處，丹皮酚吸收靈敏，基線平穩，且陰性對照無干擾，故本實驗選定274nm為測定波長。

2.本實驗曾選用乙腈-水-冰醋酸（33∶65∶2）、甲醇-醋酸-水（60∶2∶38）、甲醇-水（80∶20）等作流動相，發現分離效果差，丹皮酚峰變寬。經實驗探索，反復調整甲醇-水的比例后，發現采用甲醇一水（70∶30）為流動相，丹皮酚出峰時間約為4.5min，與相鄰成分達到基線分離，出峰時間、峰形、柱效均較為滿意，且陰性對照無干擾。