一種新型培養基在沙門氏菌檢測中的效果評價

范媛媛，鄭 冰，王樹祥，楊公明

(1.華南農業大學食品學院，廣東廣州 510642;2.順德出入境檢驗檢疫局，廣東順德 528303)

一種新型培養基在沙門氏菌檢測中的效果評價

范媛媛1，2，鄭 冰2，王樹祥2，楊公明1，*

(1.華南農業大學食品學院，廣東廣州 510642;2.順德出入境檢驗檢疫局，廣東順德 528303)

目的:評價一種新型的SX2液體培養基對沙門氏菌的增菌效果。方法:對目標菌株的靈敏度、生長率、選擇性及生化反應等幾個方面進行測試，根據測試結果來判斷新型培養基的增菌效果。結果:新型培養基與國標推薦方法中使用的培養基的增菌效果相當。結論:此液體培養基可以作為沙門氏菌的快速檢測用增菌液。

沙門氏菌，培養基，檢測

沙門氏菌是人和動物的重要致病菌，是引起食物中毒的主要病原菌之一［1］，沙門氏菌作為食源性感染致病菌目前在世界各國還排列在細菌食物中毒的首位［2］。世界衛生組織十分明確地規定了沙門菌屬于食品衛生必檢項目之一。食品原料、飼料的運輸、加工生產過程都會因引進沙門氏菌而造成污染，沙門氏菌的污染已對食品安全構成了嚴重威脅［3］。因此準確地檢測食品及飼料中沙門氏菌，對預防疾病、提高畜禽產品質量，保護人類身體健康都具有十分重要的意義。食品中沙門氏菌的國家檢測標準已沿用多年，但由于其操作繁瑣、工作量大、耗時過長等不足，無法滿足快速檢測的需要。因此，研究者對傳統的沙門氏菌檢測方法和檢測方法中的培養基都進行了不斷改進，以期得到快速可靠的檢測方法。AFNOR改良法是法國標準化協會新推出的一種檢測方法，此檢測方法中采用了新型的SX2液體培養基。SX2液體培養基是在傳統方法前增菌的基礎上，改變了選擇性增菌所使用的培養基，由新型的液體培養基SX2取代了國標中的SC、TTB液體培養基，并且培養的溫度和時間也與國標法不同，分別為41.5℃，培養22～26h。文中針對SX2液體培養基對沙門氏菌的增菌效果進行評價。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

鼠傷寒沙門氏菌CMCC(B)50115、大腸埃希氏菌ATCC25922 BPW、SC增菌液 廣東環凱生物科技有限公司;VIDAS SLM篩檢條、API 20E、SX2增菌液、RVS增菌液 法國Bio Mérieux公司;BS瓊脂、XLD瓊脂、胰蛋白胨大豆瓊脂培養基TSA 北京陸橋技術有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 培養條件 使用GB4789.4與AFNOR改良法分別進行增菌實驗［4］，國標法中使用的培養基SC為《培養基制備指南》［5］的第二部分中推薦使用的參考培養基，其培養條件為37℃，24h;而AFNOR改良法使用的SX2培養基的培養條件為41.5℃，22～26h。對比兩種方法的增菌效果。為更好地驗證SX2的增菌效果，還選擇了另外一種參考培養基RVS，此培養基在一些國外標準中也經常使用，其培養條件為41.5℃，24h。

1.2.2 菌懸液的制備［5－6］分別取鼠傷寒沙門氏菌和大腸埃希氏菌標準菌株的營養瓊脂新鮮培養物少許，于無菌的生理鹽水中，制成一定濃度的菌懸液。

鼠傷寒沙門氏菌的菌懸液用無菌生理鹽水依次從10－1到10－10作連續10倍遞減稀釋液，備用。同時取1m L 10－10稀釋度的菌懸液涂布平板，做兩個平行樣，分別菌落計數，取平均值為85cfu。大腸埃希氏菌的菌懸液稀釋后，測量其濃度為8.0×104cfu/m L。

1.2.3 靈敏度實驗 接種時，取10－5～10－9稀釋液各0.1m L分別加入SC、RVS、SX2液體培養基中，每一稀釋度接種3管，按相關標準要求的條件培養后，觀察結果。三分之二或以上管數呈現生長(混濁)的最高稀釋度為該培養基的靈敏度［7］。

1.2.4 生長率實驗 采用定量的方法評價培養基的微生物學性能。取0.1m L的1.2.2中稀釋度為10－9的鼠傷寒沙門氏菌的菌懸液，接種于SC、SX2液體培養基中;取0.1m L的1.2.2中的大腸埃希氏菌的稀釋菌懸液接種于SC、SX2液體培養基中;再取上述的兩種菌懸液各0.1m L混合后接種于SC、SX2液體培養基中，每步接種都分別做兩個平行樣。經相關標準要求的條件培養后，取1m L接種了非目標菌的培養液涂布于TSA平板，計數菌落總數;再取1m L接種了目標菌的培養液、1m L接種了目標菌和非目標菌的混合菌培養液的 10－7、10－8、10－9稀釋液，分別涂布接種于TSA平板，選擇適合計數的平板，計數菌落總數。

生長率PR的計算公式如下:

式中，PR:生長率(回收率);NS:從一個或多個待測培養基平板上得到的菌落總數;N0:從一個或多個規定的參考培養基平板上得到的菌落總數(該菌落總數應≥100cfu)。

參照ISO等標準，非選擇培養基上目標菌的生長率不得低于0.7;選擇性培養基上目標菌的生長率最低應為 0.1，非目標菌的 SF值至少應達到 2［5－6，8］。

1.2.5 選擇性實驗 采用半定量的方法測試SX2的選擇性。取1m L的1.2.2中制備的大腸埃希氏菌菌懸液加入SX2肉湯中，接種三個平行樣，按相關條件培養。用3mm接種環取培養物劃平行直線接種于TSA平板，培養后觀察非目標菌的生長情況，根據非目標菌的生長情況進行評價:非選擇性平板上沒有菌落生長或少于10cfu，則表示液體測試肉湯的選擇性良好。

1.2.6 生化特性測試 選取1.2.4生長率實驗中，混合菌用SX2增菌后，在平板TSA上得到的典型菌落，采用API 20E進行生化實驗。

2 結果與分析

2.1 靈敏度實驗結果

鼠傷寒沙門氏菌在SC、RVS、SX2液體培養基中的生長情況見表1。

表1 鼠傷寒沙門氏菌在三種液體培養基中的生長情況

從表1可知，SX2和SC、RVS增菌液的靈敏度均可達到10－9，因此可以判斷，在檢測沙門氏菌時，SX2增菌液的靈敏度與SC、RVS增菌液的靈敏度相當。

2.2 生長率實驗結果

分別計數各TSA平板后，鼠傷寒沙門氏菌、大腸埃希氏菌在SC、SX2液體培養基中的生長情況見表2。

表2 工作菌株在液體培養基中的生長情況

由表2可見，鼠傷寒沙門氏菌在SX2增菌液中的生長率為0.94，遠遠大于0.1;而非目標菌大腸埃希氏菌的最高濃度為3cfu/m L，遠遠小于標準要求的濃度104cfu/m L;在混合菌中目標菌的生長未受到非目標菌的抑制，始終為優勢菌，其最低濃度為 2.5×108cfu/m L，大于標準規定的最低濃度106cfu/m L。以上各項指標表明此培養基對目標菌和非目標菌的培養均符合ISO等培養基標準的要求。

2.3 選擇性實驗結果

三個TSA平板中，兩個平板上無菌落生長，只有一個平板上的大腸埃希氏菌菌落為1cfu，小于標準要求的10cfu，則結果表示，液體測試肉湯SX2的選擇性良好。

2.4 生化實驗結果

挑取1.2.4中TSA平板上的菌落進行生化實驗，結果表明，實驗菌株為鼠傷寒沙門氏菌，與標準菌株相符。

3 結論與討論

通過以上實驗結果可以看出，新型的液體培養基SX2能達到國家標準要求，可以作為實驗室檢測沙門氏菌用培養基，并且其檢測方法與傳統方法相比簡便、省時，從前增菌到上機，只需要48h，如果結果是陰性，最多耗時49h就可以出報告，而且不需要劃平板、觀察菌落形態特征;而傳統的方法，得到陰性結果也要3d。

面對目前進出口貿易頻繁，檢測任務逐漸加重的現狀，簡便省時快速的檢測方法日益受到檢測機構的青睞。那么如何改進方法，提高檢測效率，就要求從最基本的培養基做起，選擇一種適合的培養基，既能快速促進目標菌的生長，又能明顯抑制非目標菌的生長。很多國家和機構一直在對培養基的性能進行改進。

本文所使用的SX2液體培養基就是法國標準化協會新推出的一種沙門氏菌檢測方法——AFNOR改良法中所使用的培養基，此AFNOR改良法是法國標準化協會在雙線增菌法、單線增菌法基礎之上建立起來的新方法，與其他方法的明顯改進就是使用了SX2新型培養基。自1994年4月確認了VIDAS SLM沙門氏菌測試可作用所有人和動物食品的沙門氏菌快速測試方法后［9］，被一些國家陸續采用，1996年5月被AOAC采用［10］，丹麥獸醫與食品管理局、加拿大公共衛生部、英國、德國也把VIDAS SLM測試作為標準方法;而我國檢測細菌的標準方法還是傳統的培養法，所以我們可以借鑒一些國外方法，提高檢測效率，或者將國內和國外的方法相結合，但陽性結果的樣品必須按國標方法做證實實驗方可報告結果。

［1］賀連華，吳平芳，劉濤.食品中沙門菌檢驗方法的優化與應用［J］.實用預防醫學，2008，15(5):1575－1576.

［2］Cheng CM，Lin W，Van KT，et al.Rapid detection of Salmonella in foods using real－time PCR［J］.Food Prot，2008，71(12):2436－2441.

［3］王耀，鄭秋月，曹際娟.SYBRTMR Green Ⅰ實時PCR快速檢測沙門氏菌［J］.中國食品衛生雜志，2006，18(4):314－317.［4］吉林省疾病預防控制中心，河南省疾病預防控制中心，廣西壯族自治區疾病預防控制中心，等.GB 4789.4－2008，食品衛生微生物學檢驗沙門菌檢驗［S］.北京:中國標準出版社，2008:1－6.

［5］SN/T 1538.2－2007.培養基制備指南［S］.第 2 部分:培養基性能測試使用指南.

［6］SN/T 1538.1－2005.培養基制備指南［S］.第 1 部分:實驗室培養基制備質量保證通則.

［7］中國生物制品標準化委員會.中國生物制品規程(2000年版)［M］.北京:化學工業出版社，2000.

［8］ISO/TS 11133－2:2003.Microbiology of food and animal feeding stuffs－Guidelines on preparation and production of culture media［S］.Part 2:Practical guideline on performance testing of culturemedia.

［9］Norme ISO6579，Directivesge neralesco ncemant les methodesde re cherchb des Sa lmonella，AFNOR［S］.December，1993，5.

［10］CURIALE，et al.Journal of AOAC［J］.1997，80:469－504.

Application of a new culture media in Salmonella examination

FAN Yuan－yuan1，2，ZHENG Bing2，WANG Shu－xiang2，YANG Gong－m ing1，*
(1.College of Food Science，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China;
2.Entry－exit Inspection and Quarantine Bureau，Shunde 528303，China)

The effectiveness of a new liquid culture media SX2for Salmonella was evaluated.Several aspects，such as sensitivity，productivity，selectivity and biochemicalevents were tested，according to the test results to evaluate the effectiveness.The effectiveness of new liquid culture media was correspondent with routine.Finally，the new liquid culture media may be used as culture media for Salmonella rapid detection.

Salmonella;culture;detection

TS207.4

A

1002－0306(2011)08－0415－03

2010－07－30 *通訊聯系人

范媛媛(1977－)，女，在讀博士研究生，工程師，研究方向:食品質量與安全。