諾麗果汁對老齡小鼠抗氧化功能影響的實驗研究

張建軍，王林元，歐麗娜，苗春平，徐 媛，劉 妍，金 磊，錢麗麗，龍 銳

(北京中醫藥大學，北京 100029)

諾麗果汁對老齡小鼠抗氧化功能影響的實驗研究

張建軍，王林元，歐麗娜，苗春平，徐 媛，劉 妍，金 磊，錢麗麗，龍 銳

(北京中醫藥大學，北京 100029)

目的:探討諾麗果汁對老齡小鼠抗氧化功能的影響。方法:老齡動物模型法，采用5、10、30mL/kg·bw劑量的諾麗果汁給老齡小鼠灌胃，于末次給藥后，分別測定血中丙二醛(MDA)的含量和肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)的活力。結果:與空白老齡對照組比較，諾麗果汁5、10、30mL/kg·bw劑量組能顯著提高肝組織中SOD、GSH－Px活力，降低血中過氧化脂質MDA含量。結論:諾麗果汁具有抗氧化功能。

諾麗果汁，老齡小鼠，抗氧化功能

諾麗果為茜草科巴戟天屬植物海巴戟天(Morinda citrifolia L.)的成熟果實。海巴戟天是一種小型熱帶長青植物，生長在海拔1300英尺以下的沿海地區，樹干大，挺拔，直立;葉片橢圓形，亮綠色;花白色，管狀;果實為聚合果，長卵形或球形，形似菠蘿，略小，成熟時呈白色或黃色。諾麗果在熱帶地區有悠久的食用歷史，在東南亞、印度、澳洲、南太平洋島、中美洲、加勒比地區、非洲等熱帶國家及地區均有食用歷史和文獻記載。南太平洋大溪地島當地土著人稱諾麗為“NONI”，第二次世界大戰時留守在南太平洋的美國駐軍，以食用諾麗果來增強體力，預防疾病。我國《海南植物志》記載海巴戟天的果實諾麗果可食用［1］，目前諾麗果漿在我國作為新資源食品應用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

實驗動物 清潔級ICR 10月齡小鼠40只，體重(45±5)g，由北京維通利華實驗動物中心提供，動物合格證號:SCKX(京2007－0001);大溪地諾麗果汁

來源于大溪地諾麗飲料(中國)有限公司，為棕褐色液體;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)測試盒 由南京建成生物工程研究所提供。

動物臺秤 常熟雙杰測試儀器廠;恒溫水浴箱

北京長風儀器儀表公司;752型分光光度計 上海分析儀器廠;離心機 長沙平凡儀器儀表有限公司。

1.2 實驗方法

實驗前，小鼠稱重后眼眶取血，分離血清，按試劑盒說明書測定血清中的MDA含量。按MDA水平將小鼠分為老齡對照組和低、中、高(5、10、30m L/kg·bw劑量的諾麗果汁給老齡小鼠灌胃)三個劑量組。實驗時按所設劑量組進行灌胃給藥，連續30d。

1.2.1 觀察指標及檢測方法

1.2.1.1 一般體征觀察 實驗期間觀察小鼠的精神、活動和毛色。

1.2.1.2 血清脂質過氧化指標的測定 末次給藥后小鼠摘眼球取血，置于試管中，離心(3000 r/m in，10m in)，分離血清測MDA含量。MDA含量測定采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法。

1.2.2.3 組織勻漿抗氧化酶活力的測定 小鼠摘眼球取血后處死小鼠，立即取新鮮肝臟組織塊(0.2～1g)，除去血液，濾紙拭干，稱重，加入9倍重量的冷生理鹽水，用組織勻漿機制成10%勻漿液，檢測SOD和GSH－Px活力。SOD活力測定采用鄰苯三酚氧化法，GSH－Px活力測定采用二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)法。

1.2.2 實驗數據統計 所測定指標均采用均數±標準差(±s)表示，使用SPSS13.0軟件中的方差分析(ANOVA)進行檢驗，P＜0.05表示差異有顯著性。

2 結果與分析

2.1 一般體征觀察結果

給予不同劑量的諾麗果汁30d后，各劑量組尤其高、中劑量組反應靈敏、行動靈活、毛色光亮;老齡對照組反應遲滯、行動緩慢、毛色粗糙。

2.2 諾麗果汁對老齡小鼠血清過氧化脂質的影響

給予不同劑量的諾麗果汁30d后，各劑量組與對照組比較血清MDA含量降低，差異有顯著性，其中高劑量組含量最低(P＜0.001)，見表1。

表1 諾麗果汁對老齡小鼠血清MDA含量的影響(±s)

表1 諾麗果汁對老齡小鼠血清MDA含量的影響(±s)

注:與對照組比較，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;表2、表3同。

劑量組 動物數(只) MDA含量(nmol/mL) P值對照＜0.001 10 13.14±2.77 －低 10 10.05±3.61＊＊ 0.007中 10 9.03±2.11＊＊＊ ＜0.001高 10 7.61±1.35＊＊＊

2.3 諾麗果汁對老齡小鼠肝組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活力的影響

給予不同劑量的諾麗果汁30d后，各劑量組與對照組比較肝組織中SOD活力升高，差異皆有顯著性(P ＜0.001)，見表2。

表2 諾麗果汁對老齡小鼠肝組織中SOD活力的影響(±s)

表2 諾麗果汁對老齡小鼠肝組織中SOD活力的影響(±s)

劑量組 動物數(只) SOD活力(NU/m L) P值對照＜0.001 10 92.80±9.50 －低 10 134.90±14.08＊＊＊ ＜0.001中 10 136.64±13.16＊＊＊ ＜0.001高 10 142.51±15.84＊＊＊

2.4 諾麗果汁對老齡小鼠肝組織勻漿中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)活力的影響

給予不同劑量的諾麗果汁30d后，各劑量組與對照組比較肝組織中GSH－Px活力升高，差異皆有顯著性(P＜0.001)，見表3。

表3 諾麗果汁對老齡小鼠肝組織中GSH－Px活力的影響(±s)

表3 諾麗果汁對老齡小鼠肝組織中GSH－Px活力的影響(±s)

劑量組 動物數(只) GSH－Px(活力單位) P值對照10 129.50±21.14 －低 10 170.99±25.07＊＊＊ ＜0.001中 10 224.25±26.18＊＊＊ ＜0.001高 10 270.17±29.93＊＊＊ ＜0.001

3 討論

衰老是機體各種生化反應的綜合表現，是體內外許多因素(環境污染、精神緊張、遺傳等)共同作用的結果［2］。而對于衰老產生的確切機制，迄今尚未明了。多年來，國內外學者相繼提出了十余種有關衰老的理論學說，其中普遍受到認同的衰老機制為自由基學說(HARMAN)，即人體在正常的生理代謝過程中會產生少量的含氧自由基［3］，如超氧陰離子(·)、羥自由基(·OH)、單線態氧(1O2)和過氧化氫(H2O2)等，這些物質會對細胞產生毒性，使細胞膜、組織、酶及基因受損，從而引起機體多種疾病的發生和衰老。而機體內的防御機制(抗氧化酶或抗氧化劑)會及時將其清除，以維持氧自由基的代謝平衡，因此一般不會對細胞、組織產生損傷。但隨著年齡的增長或在某些病理狀態下，體內抗氧化酶SOD、GSH－Px活性下降，過多的氧自由基不能被及時清除而堆積在細胞內，致使它們迅速與機體內的一些生物大分子，如蛋白質、核酸、氨基酸、脂質等發生反應，生成氧化物或過氧化物，而MDA正是自由基攻擊生物體的降解物，MDA生成的多少可間接反映組織的損傷程度［4］。

大溪地諾麗果汁每日服用60m L，其主要原料中諾麗果漿占70%，其余濃縮藍莓液和濃縮葡萄液各占一半，二者除調節口感外還具有一定的保健作用。諾麗果含有黃酮類、木質素類、多糖類和豐富的營養成分，包括蛋白質、碳水化合物、脂肪、維生素、微量元素以及氨基酸等，其中，維生素B12、維生素B3以及硒等微量元素的含量均高于其它水果。其活性主要涉及增強免疫力、抗氧化等［5］。諾麗果的發酵產品通過增加由BALB/C小鼠原代脾細胞分泌的Th2細胞因子，有著潛在的增強免疫力作用［6］;諾麗果汁中提取的具有增強免疫力作用且富含多糖的物質(Nonippt)，主要通過誘發體內Th1型細胞免疫的調節機制發揮抗癌作用［7］;諾麗果汁對BALB/C小鼠胸腺細胞有絲分裂具有促進作用，對T－細胞的免疫應答具有促進作用［8］;諾麗果中含有一種多糖物對路易斯肺腫瘤模型老鼠有抗腫瘤活性，并具有免疫調節作用［9］;諾麗果可作為輔助免疫療法應用于癌癥病人［10］。庫克諾麗(海巴戟)果汁提取物表現出顯著的清除自由基和抗氧化活性［11］。通過測定海巴戟的還原能力以及抗氧化活性，顯示海巴戟具有較強活性氧超氧化清除活性［12］。海巴戟果(諾麗果)可抑制銅引起的低密度脂蛋白的氧化，從中分得6個木脂素類化合物，它們的抗氧化作用與已知的抗氧化劑2，6－叔丁基－對甲苯酚相當［13］。諾麗果汁對吸煙者血漿中超氧化物自由基(SAR)和脂質過氧化物(LPO)的清除作用的臨床實驗研究中，對68位受試者進行了30d的隨機雙盲對照實驗，表明諾麗果汁可以保護吸煙者免受氧化損傷，從而輔助性地降低因吸煙而導致的癌癥的危險［14］。葡萄除富含多種維生素、氨基酸、礦物質、葡萄糖及果糖等營養成分外，還含有白藜蘆醇、齊墩果酸、β－谷甾醇、黃酮、鞣質、SOD等多種活性物質，具有增強免疫、抗氧化、抗衰老、抗病毒、抗菌等多方面的保健功能［15］;藍莓富含水溶性的花色素苷，有很強的抗氧化活性，可抗自由基、延緩衰老，具有增強免疫力和恢復視力的作用［16］。

本實驗通過研究給老齡小鼠灌胃諾麗果汁后，其過氧化脂質MDA含量和抗氧化酶SOD、GSH－Px活性的變化，考察諾麗果汁對老齡小鼠的抗氧化作用。實驗中，諾麗果汁5、10、30m L/kg·bw劑量組能顯著提高肝組織中SOD、GSH－Px活力，并且能明顯降低血清中過氧化脂質MDA含量。SOD、GSH－Px活力提高反映了機體清除自由基能力的增強;同時，MDA含量減少揭示機體受自由基攻擊程度降低。因而，研究結果顯示，服用諾麗果汁后，機體的抗氧化能力增強，也就是機體自身防御體系的功能加強，從而減少疾病的產生及衰老的形成，以達到其抗衰老的保健目的。

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Study on evaluation of antioxidant activity of Noni juice in vivo

ZHANG Jian－jun，WANG Lin－yuan，OU Li－na，MIAO Chun－ping，XU Yuan，LIU Yan，JIN Lei，QIAN Li－li，LONG Rui
(Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China)

Objective:To research the anti－oxidative activity of Noni juice in aged mice.Method:Tahitian Noni juice(TNJ)was administrated by gavage［5，10，30m L/(kg·bw)］to male mice(10－month－old CL ICR)for 30d.The mice were then sacrificed，and the blood and the livers were collected.The concentration of malondialdehyde(MDA)in the blood and the level of super oxide dismutase(SOD)and glutathione peroxidase(GSH－Px)in the liver were then measured by spectrophotometry.Result:TNJ produced a dose－dependent decrease of MDA，at the same time a dose－dependent increase of SOD and GSH－Px at all three doses.Conclusion:TNJ had antioxidant activity by protecting body against free radical－induced damage.

Noni juice(NJ);aged mice;anti－oxidative activity

TS275.5

A

1002－0306(2011)07－0392－03

2010－06－28

張建軍(1965－)，女，博士，副研究員，研究方向:中藥有效成分研究與臨床應用。