虎眼萬(wàn)年青多糖含量的研究

楊曉騰，李井濤，吳立軍

(1.沈陽(yáng)藥科大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110016；2.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033)

*吳立軍，E-mailwulijun_111@hotmail.com

虎眼萬(wàn)年青多糖含量的研究

楊曉騰1,2，李井濤2，吳立軍1*

(1.沈陽(yáng)藥科大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110016；2.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033)

目的研究虎眼萬(wàn)年青多糖含量測(cè)定方法。方法采用比色法，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定虎眼萬(wàn)年青多糖的含量。結(jié)果虎眼萬(wàn)年青多糖的線性范圍是0.408 3～0.816 6mg，重復(fù)性含量為8.5 %,RSD=0.7 %(n=6)；平均回收率為97.4 %，RSD=1.1 %(n=6)；精密度RSD=0.1 %(n=6)；在45 min內(nèi)樣品吸光度較穩(wěn)定，在24 h樣品穩(wěn)定。結(jié)論通過(guò)對(duì)虎眼萬(wàn)年青多糖含量的研究，確定了虎眼萬(wàn)年青多糖含量的測(cè)定方法。

虎眼萬(wàn)年青；多糖；紫外分光光度計(jì)

虎眼萬(wàn)年青OrnithogalumcaudatumAit為多年生草木植物，是吉林省道地藥材。吉林省白山市的虎眼萬(wàn)年青由朝鮮傳入，當(dāng)?shù)乩习傩樟?xí)稱珍珠草，民間用其鮮汁液涂抹患處以治療療瘡，內(nèi)服可治療無(wú)名腫毒、肝炎、肝硬化、肝癌等[1-2]，未見(jiàn)歷代本草收載。本品全草入藥，味甘、性微寒、歸肝、脾經(jīng)。清熱解毒、消堅(jiān)散結(jié)。用于治療癰疸、疔瘡、瘰疬、痄腮、無(wú)名腫毒、黃疸[1-2]。復(fù)方萬(wàn)年青膠囊中虎眼萬(wàn)年青作為君藥，列于處方中；而抗腫瘤藥物虎眼萬(wàn)年青注射液的開(kāi)發(fā)項(xiàng)目也正在進(jìn)行中。虎眼萬(wàn)年青中多糖類化合物主要是依賴于對(duì)免疫功能具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用，從而表現(xiàn)出一定的抗衰老、抗病毒和抗腫瘤作用[3-4]。多糖作為虎眼萬(wàn)年青中功效成分，對(duì)免疫功能有著較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用。因此，建立有效方法對(duì)虎眼萬(wàn)年青中多糖的含量進(jìn)行測(cè)定是必要的。實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)[5-8]采用比色法測(cè)定多糖。

1 儀器與試藥

島津UV-2550紫外分光光度計(jì)。試劑均為分析純；D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110833-200503)。2，3，5-二硝基水楊酸試液(甲液：稱取6.9g結(jié)晶酚于15.2mL10%氫氧化鈉的溶液中，用水稀釋至69mL，并在此溶液中加入6.9g亞硫酸氫鈉。乙液：稱取255g酒石酸鉀鈉加至300mL氫氧化鈉溶液中，再加880mL1%3,5-二硝基水楊酸溶液，混勻，既得。甲液與乙液混合，貯于棕色瓶中，7d后使用)。虎眼萬(wàn)年青樣品共3批，產(chǎn)地均為長(zhǎng)白縣，經(jīng)吉林省食品藥品檢驗(yàn)所孫玉濱主任藥師鑒定。

2 方法

2.1對(duì)照品溶液的制備

精密稱取于105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量，加水制成1mg·mL-1的溶液，即得。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密量取對(duì)照品溶液0.4，0.5，0.6，0.7，0.8mL置25mL量瓶中，加水稀釋至2.0mL，分別精密加入3，5-二硝基水楊酸試液1.5mL，混勻，在沸水浴中加熱5min，立即冷卻至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻。另精密量取水2.0mL置25mL量瓶中，同法操作，作為對(duì)照品空白溶液。照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在520nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.9140X×0.0468，r=0.9990，線性范圍為0.4083～0.8166mg。

2.3供試品溶液的制備

取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50mL，稱定重量，浸泡過(guò)夜，回流提取3h，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2mL置25mL量瓶中，共取2份，1份加3mol·L-1鹽酸溶液10mL，置沸水浴中加熱30min，取出，冷卻，加酚酞指示液1滴，用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)至近紅色，再滴加氫氧化鈉溶液(1→20)使呈紅色，加水稀釋至25mL，搖勻。另1份不加3mol·L-1鹽酸溶液，同法操作，作為樣品空白溶液[6]。

2.4測(cè)定方法

精密量取供試品溶液及樣品空白溶液各2mL置25mL量瓶中，精密加入3，5-二硝基水楊酸試液1.5mL，混勻，在沸水浴中加熱5min，立即冷卻至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻。以樣品空白溶液作為空白溶液，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含葡萄糖的重量(mg),計(jì)算，既得。

2.5精密度試驗(yàn)

取樣品3.0002g精密稱定，依法測(cè)定，重復(fù)6次，計(jì)算RSD=0.1%，結(jié)果表明儀器精密度較好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.6.1比色后樣品穩(wěn)定性 取精密度項(xiàng)下比色后溶液，分別在0，15，30，45，60，75min測(cè)定6次，結(jié)果表明比色后樣品在45min吸光度較穩(wěn)定。

2.6.2樣品穩(wěn)定性 取精密度項(xiàng)下供試品溶液，分別在0，5，10，15，20，24h進(jìn)行比色，測(cè)定6次，計(jì)算RSD=0.1%，結(jié)果表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品6份，依法測(cè)定，計(jì)算平均含量為8.5%，RSD=0.7%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50mL，稱定重量，浸泡過(guò)夜，回流提取3h，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2mL置25mL量瓶中，共取2份，1份加3mol·L-1鹽酸溶液10mL，加D-無(wú)水葡萄糖5mg，精密稱定，置沸水浴中加熱30min，取出，冷卻，加酚酞指示液1滴，用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)至近紅色，再滴加氫氧化鈉溶液(1→20)使呈紅色，加水稀釋至25mL，搖勻。另1份不加3mol·L-1鹽酸溶液，不加對(duì)照品，同法操作，作為樣品空白溶液。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 萬(wàn)年青多糖加樣回收率試驗(yàn)

2.9樣品含量測(cè)定

依法測(cè)定3批樣品，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3批虎眼萬(wàn)年青中多糖含量測(cè)定

3 討論

3.1取樣量的考察

取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)1，3，5g，依法測(cè)定，結(jié)果表明取樣量為3g時(shí)，樣品的測(cè)定值和校正值與標(biāo)準(zhǔn)曲線匹配良好。

3.2提取條件的考察

取樣品5份，取樣量為3g，各加50mL的水，分別超聲處理1h，浸泡過(guò)夜超聲處理1h，浸泡過(guò)夜回流1h，浸泡過(guò)夜回流3h，浸泡過(guò)夜回流4h，依法測(cè)定。結(jié)果表明浸泡過(guò)夜是必要的，回流提取要優(yōu)于超聲提取，回流最佳時(shí)間為3h。

[1] 中國(guó)科學(xué)院植物研究所.中國(guó)高等植物圖鑒[M].第5冊(cè).北京：科學(xué)出版社，1987：464.

[2] 宋文耆.虎眼萬(wàn)年青形態(tài)組織特征鑒定[J].中藥材，1995,18(5)：240-241.

[3] 石磊，李娟，劉志強(qiáng)，等.虎眼萬(wàn)年青多糖增強(qiáng)非特異性免疫和體液免疫的作用[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2002,28(3)：232-234.

[4] 劉大有，王開(kāi)宇，張惠，等.虎眼萬(wàn)年青化學(xué)成分的研究(Ⅰ)[J].中草藥，1998,29(7)：443.

[5] 黃瑞松.中草藥多糖含量測(cè)定方法概述[J].中國(guó)藥師,2005,8(1)：68.

[6] 王麗娜，陳水鈁，張方，等.3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定多糖含量的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào),2009,30(4)：232-234.

[7] 劉宏源,楊金燕,黃松,等.3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定鐵皮石斛中多糖的含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2010,6(8)：14-16.

[8] 宋俊英.茶薪菇總糖、還原糖和多糖的測(cè)定[J].中草藥,2006,37(9)：1421-1422.

PolysaccharideAssayStudyofOrnithogalumcaudatumAit

YANG Xiao-teng1,2，LI Jing-tao2，WU Li-jun1

(1.ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China;2.JilinInstituteforFood&DrugControl,Changchun130033,China)

Objective: Study the methods to determine the Polysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit.MethodsBy colorimetry, using UV spectrophotometric to determine the polysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit.ResultsPolysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit linear range is0.4083～0.8166mg; repeatability8.5%,RSD was0.7% (n=6); recovery was97.4%, RSD% was1.1% (n=6); precision RSD% was0.1% (n=6); in45minutes, the sample absorbance was stable, in24hours, the sample was stable.ConclusionThrough the study of polysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit, we established the method for determination of polysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit.

OrnithogalumcaudatumAit; Polysaccharide; UV spectrophotometric

2010-11-09)