氫氧化鈉瘤內注射對肝癌生長和轉移抑制作用的實驗性研究

嚴 俊 陶文照 陳 偉 盧國鋒 胡育新

原發性肝癌嚴重危害我國人民的生命健康，大多數患者確診時已經是晚期，不適合接受手術等根治性的治療手段，局部治療成為晚期肝癌的主要治療手段之一［1］。超聲引導下瘤內酒精注射成為肝癌治療的重要手段之一［2］，但具有穿透力不足、需反復多次注射、局部疼痛等潛在不足。本研究中，我們在肝癌動物模型上使用成本更為低廉的氫氧化鈉瘤內注射，以了解該療法對腫瘤生長和轉移的抑制作用，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

氫氧化鈉，無水乙醇，生理鹽水(0.9%氯化鈉)均購于國藥集團化學試劑有限公司。氫氧化鈉依據實驗設計，用生理鹽水配置成1%、2%、3%無菌溶液。BALB/c雄性裸鼠50只，4～6周齡，體重(20±2)g，由第二軍醫大學實驗動物中心提供，無特殊病原菌(SPF)級屏障系統內飼養。

1.2 人肝癌裸鼠移植瘤模型的建立

使用模型為上海長海醫院病理科陶文照教授所建立的裸鼠人肝癌組織模型(SMMU-LTNM)［3］。在無菌條件下將皮下移植瘤取出，并切成2 mm×2 mm×2 mm大小瘤塊，用套管針將瘤塊接種于上述50只裸鼠的前肢背部皮下，形成人肝癌裸鼠模型。

1.3 實驗分組與給藥方法

BALB/c裸鼠背部皮下植入瘤塊2周后，隨機分為5組，接受不同的試劑瘤內注射，包括:①氫氧化鈉低濃度組(1% 氫氧化鈉);②中濃度組(2% 氫氧化鈉);③高濃度組(3% 氫氧化鈉);④對照組(生理鹽水);⑤陽性對照組(無水酒精)。瘤內注射的藥物或生理鹽水的體積均為0.1 ml，每只動物在第1天和第11天分別接受1次瘤內注射。

1.4 觀察指標

腫瘤移植后及治療期間，動態觀察裸鼠移植瘤生長情況及裸鼠的體重變化、飲食和精神狀態的變化。應用游標卡尺測量皮下瘤體大小，并按(長×寬2/2)計算腫瘤體積，隨機分組后每3天測量一次。取皮下移植瘤置于10%中性福爾馬林液中固定，每封標本在近中心處做病理切片，并行HE染色，光鏡下觀察腫瘤組織壞死情況，依據腫瘤壞死范圍分成輕度(壞死面積＜30%)、中度(壞死面積30% ～70%)、重度(壞死面積＞70%)。

1.5 統計學分析

統計學處理應用統計軟件SPSS 12.0軟件處理，計量資料的比較采用t檢驗，計數資料率的比較采用卡方檢驗，P＜0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況

生理鹽水組裸鼠皮下移植瘤體進行性增大，且皮膚干燥、消瘦明顯，處于進行性惡液質狀態，平均體重為(18.8±4.8)g。陽性對照組和各濃度氫氧化鈉組裸鼠皮膚較為紅潤，進食較好，體重均顯著重于對照組(P＜0.05)。氫氧化鈉中、高濃度組動物體重均重于低濃度組，但均無統計學差異(P＞0.05)(圖1)。

圖1 第18天各組荷瘤裸鼠體重

2.2 腫瘤生長情況

對照組裸鼠皮下肝癌呈漸進性生長，實驗結束時(d 18)，腫瘤體積由大到小為:對照組＞氫氧化鈉低濃度組＞陽性對照組＞氫氧化鈉中濃度組＞氫氧化鈉高濃度組。對照組腫瘤平均體積為(508±94)mm3，顯著大于各濃度氫氧化鈉組或陽性對照組(P＜0.05)。氫氧化鈉低濃度組腫瘤平均體積顯著大于中、高濃度組(P＜0.01)，但與陽性對照組無顯著差異(P=0.157)。氫氧化鈉中濃度組與高濃度組間腫瘤體積比較亦無顯著差異(P=0.07)(圖2)。

2.3 肺轉移

實驗結束時，對照組所有動物均出現顯著肺轉移，肺轉移率顯著高于其他組(P＜0.05)，肺切片HE染色平均每張切片上出現肺轉移灶數目為(5.5±2.6)個，氫氧化鈉低濃度組有3只動物發生肺轉移，但肺轉移灶數目較少，分別為1、1、3個;陽性對照組有1只動物發生肺轉移，轉移灶數目為4個;氫氧化鈉中、高濃度組的所有動物均未發現明顯的肺轉移灶。

2.4 腫瘤組織壞死評估

腫瘤組織切片HE染色可見所有腫瘤瘤內均發生壞死，各濃度氫氧化鈉治療組每組有8只腫瘤組織表現為大片壞死，陽性對照組7只腫瘤組織出現大片壞死，而對照組僅有1只腫瘤組織出現大片壞死。各治療組大片壞死發生率均顯著高于對照組(P＜0.05)。

3 討論

原發性肝癌是我國常見且危害人民健康最為嚴重的1種惡性腫瘤，防治形勢十分嚴峻，5年生存率約3%，我國每年死于此病的患者多達20萬人［4］。原發性肝癌以手術切除為主，但因其惡性度高，極易早期轉移且我國患者多合并肝硬化和肝功能失代償，故臨床切除率低且復發率高［5］，且能手術切除治療的僅占20%。

近年來，非手術治療肝癌技術逐以開展。除肝動脈栓塞治療外，尚有超聲引導下經皮穿刺瘤內注射治療，包括無水酒精、醋酸等注射、微波固化治療、射頻消融和激光熱療等。其中瘤內注射藥物這一方法，因有適應癥廣、創傷性小、療效好、副作用小、操作簡便、經濟負擔輕等優點，更適合我國國情［6］。對小肝癌患者使用無水酒精肝瘤體內注射，遠期療效并不亞于手術切除，5年生存率可達36%。然而，在文獻復習和臨床實際應用工作中我們發現上述方法仍有一些缺陷，如穿透力不足、需反復多次注射、局部疼痛等［7］，因此，需進一步努力探索新的、更加理想的治療藥物，以提高療效和減輕副作用。

氫氧化鈉作為1種強堿，具有較好的滲透性，且在損傷腫瘤的同時，不提高腫瘤內的酸性，從而減少缺氧誘導因子下游的促血管生成因子的表達。Jiang等［8］對新西蘭兔施行肝實質內注射氫氧化鈉溶液，發現2.5%和5%的濃度可以引起顯著的局灶性肝臟完全壞死，且2.5%的濃度具有較好的安全性。本研究中，我們應用了1%、2%和3%3個濃度，驗證了Jiang等的研究結果，裸鼠在接受3%氫氧化鈉瘤內注射時體重未發生顯著下降，反而因為結束干預時腫瘤負荷較低，裸鼠體重較重。而這3個濃度氫氧化鈉溶液瘤內注射均顯著抑制腫瘤肺轉移，其中1%的低濃度氫氧化鈉就可以達到與酒精注射相似的療效，中、高濃度的氫氧化鈉療效更為顯著。

圖2 2次注射后各組裸鼠腫瘤變化情況

總之，1% ～3%濃度的氫氧化鈉溶液瘤內注射，對于肝細胞癌具有較好的療效且無顯著毒副作用，值得進一步的臨床研究驗證。

［1］梁雪婧，朱尚勇，梁水庭.非手術局部損毀腫瘤方法治療原發性肝癌的現狀與進展〔J〕.中國癌癥防治雜志，2009，1(4):362.

［2］劉 揚，宗 明，張柏和，等.無水酒精局部注射治療復發性肝癌對癌細胞血行播散的影響〔J〕.中華普通外科雜志，2002，17(4):207.

［3］陶文照，徐 冰，龔志錦，等.人肝癌裸鼠連續傳代的病理變化特征〔J〕.中國腫瘤生物治療雜志，2007，14(2):163.

［4］楊秉輝.原發性肝癌的診斷:從臨床到亞臨床〔J〕.中華消化雜志，2003，23(6):325.

［5］中國抗癌協會肝癌專業委員會，中國抗癌協會臨床腫瘤學協作委員會，中華醫學會肝病學分會肝癌學組.原發性肝癌規范化診治專家共識〔J〕.臨床腫瘤學雜志，2009，14(3):259.

［6］李 凱.原發性肝癌的內科治療〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2006，13(4):1.

［7］鄧衛萍，曾愛瓊，陳麗輝，等.超聲引導下經皮穿刺無水酒精注射治療肝癌的護理配合〔J〕.海南醫學，2009，20(9):147.

［8］Jiang TA，Zhao QY，Chen MY，et al.Low － concentration sodium hydroxide solution injection in normal liver parenchyma of rabbits〔J〕.Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2005，4(2):285.