盤葉忍冬花蕾與金銀花相似度的研究

李麗，毛崇武，許永全，何福江

（1.甘肅省中醫學校，甘肅蘭州730050；2.甘肅省醫學科學研究院，甘肅蘭州730050）

盤葉忍冬花蕾與金銀花相似度的研究

李麗1，毛崇武1，許永全1，何福江2

（1.甘肅省中醫學校，甘肅蘭州730050；2.甘肅省醫學科學研究院，甘肅蘭州730050）

目的應用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）對8個產地的金銀花藥材和甘肅省境內5個地產的盤葉忍冬花蕾與金銀花標準品進行相似度研究。方法色譜柱為Diamensil（鉆石）C18（150mm×4.6mm，5μm），梯度洗脫，流動相A為0.5%的磷酸水溶液-乙腈（100∶15），B為甲醇，流速為1.0ml·min-1，檢測波長為340nm。結果各樣品圖譜與標準品圖譜基本一致，但不同產地的樣品各成分含量的相對比值有較大差別。結論采用RP-HPLC圖譜分析方法進行樣品之間或樣品與對照品（或對照藥材）間的對比，有利于鑒別藥材真偽，保證藥材質量。

盤葉忍冬花蕾；金銀花；相似度

金銀花為常用中藥，具有清熱解毒，涼風散熱之功效[1]，其主要成分為有機酸類、黃酮類和揮發油類化合物[2]。中國藥典只收載忍冬科忍冬（Lonicera japonica Thunb.）植物的干燥花蕾或帶初開的花[3]，其質量控制限于綠原酸和木犀草苷成分。本文采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）對幾種金銀花商品藥材與盤葉忍冬花蕾進行了化學成分相似度比對。

1 儀器試劑與對照品

1.1 儀器

Agilent 1100系列，四元泵G1311A，含在線真空脫氣機，紫外檢測器G13651，Agilent Chemistation化學工作站。

1.2 試劑

甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。色譜柱：Diamensil C18柱（150mm×4.6mm，5μm）。

1.3 樣品與對照品

各個產地金銀花藥材樣品均取于甘肅省黃河藥市。經甘肅省藥檢所鑒定1～8號為忍冬（Lonicera japonica Thunb），9～13號為盤葉忍冬（L.tragophylla Hemsl.）。藥材產地詳見表1。對照品：綠原酸、咖啡酸、蘆?。ㄖ袊幤飞镏破疯b定所）。對照藥材：金銀花對照藥材（中國藥品生物制品鑒定所）。

表1 樣品來源

2 方法與結果

2.1 實驗條件的選擇

（1）供試品溶液的制備。①對照品溶液的制備：精密稱取綠原酸、咖啡酸與蘆丁對照品適量，用甲醇溶解制成混合對照品溶液，使濃度分別為：綠原酸（0.3mg·ml-1），咖啡酸（0.08 mg· ml-1）與蘆?。?.6 mg·ml-1）。②樣品供試液的制備：精密稱取金銀花藥材粉末（過40目篩）0.5g，置錐形瓶中，加石油醚（60～90℃）20ml，超聲處理（50Hz，250W）20min，靜置10min,棄去石油醚液，待樣品中殘存的石油醚全部揮發后，加甲醇定容10ml，超聲處理20min，濾過，濾液轉移至10ml容量瓶中，以甲醇少許，分次洗滌容器及殘留物，洗滌液并入同一量瓶中，以甲醇定容，制得供試液。

（2）不同流動相系統及檢測波長的選擇。吸取上述樣品溶液10μl進樣，分別以0.1%甲酸和甲醇，0.5%磷酸和甲醇，0.5%磷酸-乙腈（100∶15）和甲醇，甲醇和乙腈作為流動相梯度洗脫，記錄254、330、340與360nm 4個波長的色譜圖。結果表明，用0.5%磷酸-乙腈（100∶15）和甲醇梯度洗脫，波長340nm的條件為最佳。梯度洗脫條件見表2。對照品、對照藥材的與2號金銀花樣品的RP-HPLC圖譜見圖1。

表2 流動相梯度條件

圖1 對照品A、對照藥材B、2號金銀花樣品C RP-HPLC圖譜

2.2 RP-HPLC圖譜的建立

（1）RP-HPLC圖譜的制備。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，按前述色譜條件操作記錄60min，結果認為40min即可出完峰。

（2）共有峰的確定。通過13個樣品RP-HPLC圖譜測定，比較其色譜圖，確定共有峰為7個。以綠原酸為參照物（對照品）測定各峰的保留時間和面積，換算成相對保留時間和相對面積，結果見表3和表4，其各峰相對保留時間的RSD（相對標準偏差）＜4.5%，共有峰的面積之和大于90%。

表4 各地產樣品RP-HPLC圖譜共有峰相對面積

（3）共有峰的歸屬。各取綠原酸、咖啡酸與蘆丁混合對照品溶液10μl，在上述色譜條件下進樣，對比保留時間，可知S、2、4號峰分別為綠原酸、咖啡酸與蘆丁。

（4）方法學考察。①穩定性。以2號金銀花為供試品，分別在0、2、8、12、24h進樣，按上述條件測定，結果表明，各色譜峰相對保留時間RSD不超過2.0%，相對峰面積的RSD不超過3.7%，說明供試品溶液在24h內穩定。②精密度。以2號金銀花為供試品，連續進樣5次，結果表明，各色譜峰相對保留時間RSD不超過0.34%，相對峰面積的RSD不超過2.0%。③重現性。取2號金銀花藥材各5份為供試品，檢測RP-HPLC圖譜，結果表明，各色譜峰相對保留時間RSD不超過0.8%，相對峰面積的RSD不超過4.5%。

2.3 RP-HPLC圖譜相似度評價[4]

采用Excel 2005軟件，以1～8號產地的金銀花和9～13號盤葉忍冬的RP-HPLC圖譜中所有峰的峰面積與對照品藥材為模板的峰面積值或以1～13號樣品所有峰的峰面積與其均值為模板進行整體相似性計算。結果見表5。13批金銀花與盤葉忍冬藥材與對照藥材的RP-HPLC圖譜有較好的一致性。本方法可用于綜合評價盤葉忍冬與金銀花的質量。

表5 各地產樣品RP-HPLC圖譜相似度

3 討論

（1）比較了0.5%磷酸溶液-乙腈的梯度洗脫，發現得到較少的色譜峰，改用0.5%磷酸溶液-乙腈（90∶15）和甲醇梯度洗脫，色譜峰出現較多。實驗表明，樣品保留時間、重現性、分離度較好。

（2）對13個產地樣品的RP-HPLC圖譜中主要峰群的整體圖譜與對照藥材RP-HPLC圖譜基本一致，但各成分含量的相對比值有較大差別。相似度計算結果表明，1～8號、11、12號樣品達到0.900以上，10號與13號樣品相似度分別為0.880和0.630。其中13號樣品是委托甘肅華亭縣醫院采收的，花大多已盛開，且因晾曬方法不當，顏色暗黃，相似度差異的原因可能與樣品采集的時節、晾曬方法不當有關。

（3）鑒于金銀花中所含成分的復雜性，采用藥材RP-HPLC圖譜分析方法，進行樣品之間或樣品與對照品（或對照藥材）之間的RP-HPLC圖譜比對，有利于鑒別藥材真偽，保證藥材質量。

[1]黃西峰.金銀花的研究概況及展望[J].中國中藥雜志，1997，22（4）：247～249.

[2]黃麗瑛，呂桂楨，李繼彪.中藥金銀花化學成分的研究[J].中草藥，1996，27（11）：645～647.

[3]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業出版社，2005.

[4]苗愛東，孫殿甲.Excel 2002在中藥指紋圖譜相似度計算中的應用[J].藥學進展，2003，27（1）：51～54.

R282.5

B

1671-1246（2011）03-0099-02

注：本文為2005年甘肅省中醫管理局立項項目，2008年經甘肅省科技廳組織鑒定為“國內同類研究領先水平”（甘科鑒字[2008]第292號）