液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)聯(lián)合高危HPV-DNA檢測對宮頸癌前病變的診斷效度

王澤曼, 陳 玉， 鄭建鵬

(珠海市第二人民醫(yī)院1體檢部婦科，2防保科,3檢驗科，廣東 珠海 519020)

液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)聯(lián)合高危HPV-DNA檢測對宮頸癌前病變的診斷效度

王澤曼1, 陳 玉2△， 鄭建鵬3

(珠海市第二人民醫(yī)院1體檢部婦科，2防保科,3檢驗科，廣東 珠海 519020)

目的： 探討液基細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)(LCT)聯(lián)合高危人乳頭狀瘤病毒DNA(HPV-DNA)檢測診斷宮頸癌前病變的效度。方法對2007年12月～2010年12月來我院行體檢的19～65歲的6 521名女性采用LCT進(jìn)行宮頸癌的篩查，以及HPV分型基因芯片檢測系統(tǒng)進(jìn)行18種高危HPV基因亞型檢測。對上述檢測陽性者行陰道鏡下宮頸活組織檢查，對檢測均陰性者依其意愿進(jìn)行陰道鏡下宮頸活組織檢查。結(jié)果LCT陽性(≥ASCUS)152例，HPV陽性86例，其中二者均為陽性的有42例，LCT和HPV均為陰性的有6 325例；LCT陽性的152例和HPV陽性的86例中病理活組織檢查結(jié)果為陽性(≥CIN I)的分別有112例和68例，其中LCT和HPV均陽性的42例中病理活組織檢查陽性的有34例。LCT和HPV均為陰性的6 325例中有2 000人自愿行病理檢查，其中1人病理檢查結(jié)果為陽性。LCT診斷宮頸癌前病變的靈敏度為76.19%，特異度為98.05%；HPV檢測診斷宮頸癌前病變的靈敏度為46.26%，特異度為99.12%；兩方法聯(lián)合診斷(其中1項陽性即判定為患者)宮頸癌前病變的靈敏度為99.32%，特異度為99.61%。結(jié)論液基細(xì)胞檢測技術(shù)和高危HPV-DNA檢測的聯(lián)合應(yīng)用優(yōu)于單項技術(shù)檢測，對于宮頸癌前病變的篩檢具有重要意義。

液基細(xì)胞技術(shù)； HPV-DNA檢測； 宮頸癌前病變；效度

宮頸癌是最常見的一種婦科惡性腫瘤，其發(fā)生和發(fā)展是一個比較長的演變過程，而宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是與宮頸浸潤癌密切相關(guān)的一組癌前病變，它反映宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程。宮頸癌前病變主要包括不典型增生和原位癌，病理學(xué)診斷分為3級即CIN I級(輕度不典型增生)、CIN II級(中度不典型增生)、CIN III級(重度不典型增生和原位癌)。近10年來大量流行病及基礎(chǔ)研究的資料證實HPV持續(xù)性感染是CIN及宮頸癌發(fā)生的必要條件[1]。根據(jù)人乳頭狀瘤病毒(human papiloma virus,HPV)與癌瘤的關(guān)系，HPV可分為低危型和高危型。低危型HPV有6、11、40、42、43、44、53、54、57、61、62、72、81、83等型；高危型HPV有16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、MM4等型。高危型HPV檢測已成為宮頸癌的重要篩查手段，不僅能提高細(xì)胞學(xué)篩查的敏感性，還可預(yù)警細(xì)胞學(xué)正常或ASCUS患者的病情發(fā)展，也能減少HPV陰性而細(xì)胞學(xué)異常女性的檢查次數(shù)，延長檢查間隔期。人乳頭狀瘤病毒DNA(HPV-DNA)檢測與細(xì)胞學(xué)聯(lián)合篩查宮頸病變具有高效性，兩者結(jié)合的宮頸癌全面篩查方案有望取代單一的細(xì)胞學(xué)檢測[2-5]。

效度指測量值與真實值的符合程度，對一篩查方法的真實性評價使用靈敏度、特異度等指標(biāo)[6]。本文對2007年12月～2010年12月來我院體檢的19～65歲的女性6 521人進(jìn)行液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)(liquid-based cytology technique,LCT)和HPV-DNA檢測，對檢測陽性者行陰道鏡下宮頸活組織檢查，對檢測陰性的依其意愿進(jìn)行陰道鏡下宮頸活組織檢查，探討LCT聯(lián)合HPV-DNA檢測診斷宮頸癌前病變的效度。

材 料 和 方 法

1研究對象

為2007年12月～2010年12月來我院體檢的6 521名女性，包括宮頸炎、宮頸濕疣、陰道不規(guī)則流血等患者，年齡19～65歲，平均(34.5±21.5)歲，孕次0～8次，產(chǎn)次0～5次，均有性生活史。

2方法

對所有患者采用LCT檢測法進(jìn)行宮頸癌的篩查，及HPV分型基因芯片檢測系統(tǒng)進(jìn)行18種高危HPV基因亞型檢測。對上述檢測陽性者行陰道鏡下宮頸活組織檢查，對上述兩項檢測均陰性的自愿進(jìn)行陰道鏡下宮頸活組織檢查。

2.1LCT 擦去宮頸表面黏液，用特制宮頸細(xì)胞刷伸入距宮頸管內(nèi)1 cm處，沿順時針方向旋轉(zhuǎn)5周左右，取出轉(zhuǎn)入細(xì)胞保存液中，并將保存液中的細(xì)胞進(jìn)行處理、制片以及閱片。采用TBS(the Bethesda System)[7]系統(tǒng)描述性診斷：非典型鱗狀上皮細(xì)胞(atypical squamous cells of undetermined signification,ASCUS)或非典型腺上皮細(xì)胞(atypical glandular cells of undetermined signification,AGUS)、低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high squamous intraepithelial lesion,HSIL)或不能排除高度鱗狀上皮內(nèi)病變的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(atypical squamous cell,cannot exclude high-grade squamous intraepithelial lesion,ASC-H)。對液基細(xì)胞檢查異常者(包括ASCUS/AGUS、LSIL、HSIL、ASC-H、鱗狀細(xì)胞癌/腺癌)即判定為陽性。

2.2高危HPV-DNA檢測 將宮頸刷置于宮頸口轉(zhuǎn)動4周，取足量分泌物及脫落細(xì)胞，然后將宮頸刷放入備有1 mL洗脫液的洗脫管中以送檢或保存于-20 ℃冰箱中待檢。檢測時先進(jìn)行離心、保留細(xì)胞塊再裂解、沉淀、保留上清液待用。采用亞能生物技術(shù)有限公司(深圳)生產(chǎn)的人乳頭瘤病毒分型基因芯片檢測系統(tǒng)進(jìn)行PCR擴(kuò)增、雜交、洗膜以及顯色，通過閱讀儀上掃描，結(jié)果自動識別、保存及打印。可同時檢測18種高危HPV亞型(包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、MM4)。

2.3陰道鏡下宮頸活組織病理檢查為確診宮頸癌及宮頸癌前病變最可靠依據(jù) 宮頸有明顯病灶者，可在病灶處直接取材。無明顯病灶在陰道鏡下行多點取材送病理學(xué)檢查，做最后確診。所取組織應(yīng)包括間質(zhì)及鄰近正常組織。病理診斷陽性包括宮頸上皮內(nèi)瘤變，按輕、中、重分為CIN I、CIN II、CIN III。

3統(tǒng)計學(xué)處理

對LCT和高危HPV-DNA檢測的診斷結(jié)果進(jìn)行關(guān)聯(lián)性檢驗和McNemer檢驗，并分別計算LCT、高危HPV-DNA檢測及兩者聯(lián)合診斷(其中1項陽性即為患者)宮頸癌前病變的靈敏度、特異度、陽性似然比和陰性似然比(陽性似然比越大，則確診疾病的能力越強(qiáng)；陰性似然比越小，則排除疾病的能力越強(qiáng))。

結(jié) 果

1LCT、高危HPV-DNA檢測和活組織病理檢查結(jié)果

6 521名受檢者中，LCT陽性152例，HPV陽性86例，其中二者均為陽性42例，LCT和HPV均為陰性6 325例，見表1。關(guān)聯(lián)性檢驗的結(jié)果顯示，2=807.37，Plt;0.01，關(guān)聯(lián)系數(shù)r=0.35，說明這2種診斷方法存在一定的正關(guān)聯(lián)性；McNemer檢驗的結(jié)果顯示，2=27.44，Plt;0.01，說明這2種診斷方法的陽性率不相等，不可互相替代。

LCT和HPV至少有1項陽性的196名受檢者均接受病理檢查，共檢出陽性146例，其中LCT陽性的152例和HPV陽性86例中病理活組織檢查結(jié)果為陽性的分別有112例和68例；LCT和HPV均為陰性的6 325例中有2 000人自愿行病理檢查，其中1人病理檢查結(jié)果為陽性(1/2 000)，即2196名(196+2 000)接受病理檢查者共檢出陽性147例(146+1)，見表2～4。

2LCT和高危HPV-DNA檢測診斷宮頸癌前病變的靈敏度和特異度

根據(jù)表2～4的數(shù)據(jù)算出2 196名接受病理檢查者中LCT、高危HPV-DNA檢測及兩者聯(lián)合的靈敏度、特異度、陽性似然比和陰性似然比，結(jié)果見表5。高危HPV-DNA檢測的陽性似然比大于LCT，說明其確診疾病的能力更強(qiáng)；但其陰性似然比也大于LCT，則排除疾病的能力遜于LCT。2種方法聯(lián)合診斷，陽性似然比大大提高而陰性似然比大大降低，說明無論是確診還是排除疾病的能力均比單用更強(qiáng)。

表2 病理活檢確認(rèn)LCT診斷宮頸癌前病變結(jié)果

表3 病理活檢確認(rèn)高危HPV-DNA檢測診斷宮頸癌前病變結(jié)果

表4 病理活檢確認(rèn)LCT和HPV-DNA檢測聯(lián)合診斷宮頸癌前病變結(jié)果

表5 LCT、高危HPV-DNA檢測及兩者聯(lián)合診斷宮頸癌前病變的靈敏度、特異度、陽性似然比和陰性似然比

討 論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤。而細(xì)胞學(xué)檢查則為最簡單的宮頸鱗狀皮內(nèi)瘤變的輔助檢測方法，因其檢測無創(chuàng)、取材方便的特點，以及LCT技術(shù)制作的薄片，因其細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚、背景清晰可明顯提高涂片滿意度，且宮頸異常細(xì)胞檢出率較高的獨(dú)特優(yōu)勢，已成為宮頸病變篩查的重要手段，對開展宮頸腫瘤的普查具有重要意義[8]。近40年以來由于宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的廣泛應(yīng)用，使得宮頸癌和宮頸癌前病變得以早發(fā)現(xiàn)及診療，使宮頸癌的發(fā)病率及病死率已明顯下降。本次研究中，LCT檢測具有較高的檢出率，與病理組織學(xué)對照診斷符合率亦較高，能較準(zhǔn)確反映宮頸癌及宮頸癌前病變，是一種高效的宮頸癌前病變的篩查方法，但作為一種普查手段，其單項檢測的靈敏度相對較低，漏診率較高。

接近90%CIN有HPV感染，約20%有性生活婦女感染HPV，但其HPV感染多不能持久，常可自然消退而不伴臨床癥狀。若HPV感染持續(xù)存在，在吸煙、性傳播疾病等因素作用下可誘發(fā)宮頸上皮內(nèi)瘤變。高危型HPV病毒可從感染到癌變的全過程中均能檢出，本次研究中顯示，高危HPV-DNA技術(shù)單項檢測的靈敏度較低，漏診率較高，不適宜單獨(dú)應(yīng)用于宮頸癌前病變的篩查。

國內(nèi)外研究報道顯示，細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸癌前病變規(guī)范化治療的第一步，但其假陰性率較高。LCT和高危HPV-DNA檢測的聯(lián)合應(yīng)用優(yōu)于單項技術(shù)檢測，對于宮頸癌前病變的篩檢具有重要意義。 在此基礎(chǔ)上結(jié)合行陰道鏡下宮頸活組織檢查的診斷構(gòu)成了宮頸病變系統(tǒng)的有效診斷模式，值得推廣應(yīng)用。

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Diagnosticvalidityofcervicalprecancerouslesionsbyliquid-basedcytologytechniquecombinedwithhigh-riskHPV-DNAdetection

WANG Ze-man1, CHEN Yu2, ZHENG Jian-peng3

(1DepartmentofGynecologicalExamination,2DepartmentofPreventionandHealthCare,3DepartmentofLaboratoryMedicine,TheSecondPeople’sHospitalofZhuhaiCity,Zhuhai519020,China.E-mail:kellyw@tom.com)

AIM: To investigate liquid-based cytology technique (LCT) combined with high-risk human papilloma virus DNA (HPV-DNA) detection for diagnosis of cervical precancerous lesions.METHODSScreening of cervical cancer was performed by LCT combined with HPV-DNA detection in 6 521 women at the age of 19～65 in our hospital for physical examination from December 2007 to December 2010. Eighteen high-risk HPV isoform genes were detected by HPV typing gene chip detection system. The women with positive detection underwent colposcopic cervical biopsies. The women with negative detection also underwent colposcopic cervical biopsies if the operation was of their own accord.RESULTSThe LCT positive results (≥ASCUS) were observed in 152 cases and HPV positive results were obtained in 86 cases. The women with both 2 positive results were found in 42 cases. The women with both LCT and HPV negative results were determined in 6 325 cases. In 152 cases of LCT positive and 86 cases of HPV positive women, the positive results of pathological biopsy (≥CINI) were 112 and 68 cases, respectively. Thirty-four cases in the 42 cases of both LCT and HPV positive women were conformed by pathological biopsy. In 6 325 women with negative results of LCT and HPV detection, 2 000 were perform pathological biopsy according to their own accord and only 1 had positive result. The diagnostic sensitivity of LCT for cervical precancerous lesions was 76.19% with the specificity of 98.05%. The diagnostic sensitivity of HPV detection for precancerous lesions of uterine cervix was 46.26% with the specificity of 99.12%. Combination of the 2 methods to diagnose cervical precancerous lesions made the sensitivity increase to 99.32% with the specificity of 99.61%.CONCLUSIONLiquid-based cytology technique combined with high-risk HPV-DNA detection is better than each of the single technique for screening precancerous lesion of cervical carcinoma.

Liquid-based cytology technique; HPV-DNA detection; Precancerous lesions of uterine cervix; Validity

1000-4718(2011)12-2414-03

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2011.12.035

2011-07-22

2011-10-17

△通訊作者 Tel: 0756-8136363; E-mail: kellyw@tom.com