清胰活血湯、Infliximab單抗治療急性壞死性胰腺炎大鼠的療效觀察

李偉冬 賈林 馬軍 方建志 邱嘉華 黃耀星 潘錦瑤

·論著·

清胰活血湯、Infliximab單抗治療急性壞死性胰腺炎大鼠的療效觀察

李偉冬 賈林 馬軍 方建志 邱嘉華 黃耀星 潘錦瑤

目的比較清胰活血湯和Infliximab單抗治療大鼠急性壞死性胰腺炎(ANP)并發多器官功能衰竭(MODS)的療效。方法采用胰管內逆行注射4.5%牛磺膽酸鈉1 ml/kg體重的方法誘導大鼠ANP模型。按數字表法隨機分為ANP組、清胰活血湯組(Q組)和Infliximab單抗組(I組)。I組于建模后6 h尾靜脈注射Infliximab單抗( 8 mg/kg體重)，ANP組和Q組于建模前4 h和建模后3、9 h分別給予生理鹽水和清胰活血湯灌胃(20 ml/kg體重)。24 h后處死大鼠，檢測血清淀粉酶、總膽紅素(TBil)、肌酐(Cr)、TNF-α、二胺氧化酶(DAO)水平，測腹腔內壓，計算小腸碳末推進率，行胰腺組織病理學檢查。結果ANP組、Q組、I組的胰腺病理評分分別為13.8±0.8、6.1±0.4、3.9±0.6，各組間差異均有統計學意義(P值均<0.05)，血清淀粉酶、TBil、Cr及TNF-α水平亦依次顯著降低。ANP組、Q組、I組血DAO水平分別為(186.3±10.2)、(134.6±14.3)、(149.1±16.3)U/L；小腸碳末推進率為(53±0.1)%、(89±0.1)%、(61±0.1)%；腹內壓為(11.8±1.5)、(4.1±0.8)、(5.8±1.2)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。Q組及I組的DAO和腹內壓均較ANP組顯著降低，而小腸碳末推進率均高于ANP組(P值均<0.05)，且Q組小腸碳末推進率高于I組，腹內壓和DAO濃度低于I組，兩組的差異具有統計學意義(P值均<0.05)。結論清胰活血湯與Infliximab單抗治療ANP并MODS大鼠均具顯效，其中清胰活血湯在促胃腸動力、降腹內壓和改善腸屏障功能方面療效更顯著。

胰腺炎，急性壞死性； 清胰活血湯； Infliximab單抗； 腹腔內壓； 腸屏障功能

TNF-α是重癥急性胰腺炎(SAP)時最先增高的炎癥因子，也是引起SAP快速發展和并發多器官功能衰竭(MODS)的重要因素。前期研究[1]發現，Infliximab單抗作為抗TNF-α單克隆抗體能明顯抑制TNF-α的增高，對急性壞死性胰腺炎(ANP)并發MODS大鼠有顯著療效。本實驗比較清胰活血湯與Infliximab單抗對ANP并MODS大鼠的療效，為中西醫結合治療急性胰腺炎(AP)奠定實驗基礎。

材料與方法

一、實驗動物及分組

健康SD大鼠30只，體重180～200 g，SPF級，購自廣州中醫藥大學實驗動物中心(許可證號：SCXK-粵2008-0020)。采用胰管內逆行注射4.5%牛磺膽酸鈉(Sigma公司)1 ml/kg體重的方法誘導ANP并發MODS大鼠模型[2]。按數字表法隨機分為ANP組、清胰活血湯組(Q組)和Infliximab單抗組(I組)。Q組在建模前4 h和建模后3、9 h予清胰活血湯[生大黃(后下)、黃連、黃岑、丹參、厚樸、柴胡各15 g]灌胃，20 ml/kg體重。ANP組同時點給予等容積生理鹽水灌胃。I組于建模后6 h予尾靜脈注射Infliximab單抗(西安楊森公司)，8 mg/kg體重。建模后24 h處死大鼠，腹腔靜脈采血，離心取血清，置-80℃冰箱保存；取胰腺常規制作病理切片。

二、檢測指標及方法

1．血清指標：血清淀粉酶、總膽紅素(TBil)、肌酐(Cr)采用全自動生化分析儀檢測。血清TNF-α和二胺氧化酶(DAO)采用ELISA法測定，試劑盒購自廣州幫能公司。

2．腹腔內壓：測壓設備為BL-420E+生物機能實驗系統。大鼠麻醉后取平臥位，左下腹穿刺，冠脈擴張球囊導管內充注生理鹽水，將連接球囊導管的硬膜外導管接頭的另一端連接壓力換能器，利用壓力換能器與生物機能實驗儀，以腋中線為“0”點，大鼠呼氣末時換能器所感受的壓力就是球囊內壓和腹內壓。

3．小腸碳末推進率：于處死前30 min給予大鼠墨水2.5 ml灌胃，處死后用直尺測量小腸全長及墨水推進長度。

4．組織學檢查：取胰腺組織于10%甲醛緩沖液固定，常規脫水、石蠟包埋、切片、HE染色，由專一病理醫師觀察切片，并按照Schemidt等[3]標準進行胰腺組織病理評分。

三、統計學處理

結 果

一、大鼠一般情況

ANP組大鼠有呼吸急促、腹脹、豎毛、精神萎靡、反映遲鈍、無排便等表現，術后死亡3只。Q組及I組大鼠術后一般情況較好，多數有腹瀉表現，排泄物不成形，術后兩組各死亡2只。

二、胰腺病理評分及血清淀粉酶、TNF-α的變化

ANP組胰腺廣泛間質水腫，腺泡壞死，大量出血及血管嚴重炎癥浸潤；Q組和I組胰腺病變均較ANP組有不同程度的減輕，尤以I組減輕明顯。ANP組、Q組、I組的胰腺病理評分分別為13.8±0.8、6.1±0.4、3.9±0.6,各組間差異均有統計意義(P值均<0.05)。血清淀粉酶和TNF-α水平也由ANP組、Q組、I組依次遞減，各組間差異也均有統計學意義(P值均<0.05,表1)。

三、肝、腎功能的變化

建模后24 h，Q組、I組大鼠血清TBil、Cr值明顯低于ANP組(P值均<0.05)。若以TBil≥3倍對照值、肌酐>3倍對照值分別作為肝功能、腎功能障礙的判斷指標[3]，ANP組、Q組、I組肝功能障礙發生率分別為100%(7/7)、25%(2/8)、27.5%(3/8)；腎功能障礙發生率為100%(7/7)、25%(2/8)、25%(2/8)。Q組、I組的肝腎功能障礙發生率較ANP組明顯改善，但Q、I兩組間無顯著差異(P>0.05，表1)。

四、腹腔內壓和腸屏障功能的變化

Q、I兩組小腸碳末推進率均高于ANP組，腹內壓值和DAO濃度均低于ANP組，而Q組的小腸碳末推進率又高于I組，腹內壓值和DAO濃度低于I組(P值均<0.05，表1)。

表1 各組大鼠各項指標的比較

注：與ANP組比較，aP<0.05；與Q組比較，bP<0.05。1 mmHg=0.133 kPa

討 論

多項研究證實，在SAP中存在炎性因子的過度表達，如白介素、TNF-α、干擾素等，說明炎癥因子參與了SAP的全過程，血清中炎癥因子水平的高低和病情嚴重程度有關。Infliximab單抗作為特異性靶向,與體內多種形式的TNF-α有較強結合能力，并將其中和,從而達到抑制TNF-α的生理活性的作用。前期實驗顯示[1]，應用Infliximab單抗可改善ANP大鼠的病理損傷。

本實驗的清胰活血湯中，丹參和厚樸能改善微循環，消除氧自由基，抑制血小板聚集，阻止Ca2+內流，松弛平滑肌[4-5]；柴胡、黃連、黃岑和厚樸都具有廣譜抗菌、抑制炎癥因子釋放的作用[6-7]；生大黃、黃連具有明顯的瀉下作用。大劑量應用該制劑能促進胃腸功能的恢復，促進腸蠕動，改善腸功能，促進腹腔積液的吸收。本結果顯示，應用清胰活血湯后，大鼠血清TNF-α濃度明顯低于ANP組；肝、腎功能較ANP組顯著改善；腸蠕動及腸黏膜屏障功能增強；腹內壓明顯降低。與應用Infliximab單抗組比較，清胰活血湯對ANP大鼠的TNF-α的釋放抑制作用遜于Infliximab單抗，但在促進腸動力、保護腸黏膜屏障功能、降低腹內壓方面則優于Infliximab單抗。

清胰活血湯不足之處在于需要經胃腸道吸收，可能加重胰腺的負擔，吸收率較靜脈注射Infliximab單抗低，作用速度也較其慢。但應用Infliximab單抗

的安全性問題一直備受關注，臨床研究、全球范圍的監測登記以及病例報告等資料的積累加深了對其不良反應的認識[8]。因此，清胰活血湯與Infliximab單抗在SAP并發MODS的治療方面各具優勢，臨床應用尚待進一步研究。

[1] 賈林，邱嘉華，黃耀星，等.抗炎癥介質治療窗使用Infliximab對大鼠ANP并MODS模型的實驗療效.廣州醫藥，2011，42：3-4.

[2] 邱嘉華,陳奕金,賈林,等. ?；悄懰徕c誘導急性壞死性胰腺炎大鼠模型的理想濃度. 中華胰腺病雜志, 2010, 10:120-122.

[3] Schemidt J, Rattner DW, Lewandrowski K, et al.A better model of acute panereatitis for evaluating therapy. Ann Surg, 1992, 215:44-56.

[4] Pyo MK,Lee Y，Yan-Choi,HS．Anti-platelet efect of the constituents isolated from the barks and fruits of Magnolia obovata．Arch Pharm Res,2002,25:325-328.

[5] Zhang R,Zhang X,Zhang J,et al.Efficacy and mechanism of salvia miltiorrhizae injection in the treatment of rats with severe acute pancreatitis.Inflammation,2009,32:109-119.

[6] Li ZF,Xia XM,Huang C,et al.Emodin and baicalein inhibit pancreaticstromal derived factor-1 expression in rats with acute pancreatitis. Hepatobiliary Pancreat Dis Int,2009,8:201-208.

[7] Xue P,Deng LH,Xiang DK,et al.Effects of Chai-Qin-Cheng-Qi Decoction on cefotaxime in rats with acute necrotizing pancreatitis.World J Gastroenterol,2009,15:4439-4443.

[8] 笑甜，冉志華.英夫利昔單抗治療炎癥性腸病的研究進展.胃腸病學，2009:691-694.

2011-02-23)

(本文編輯：呂芳萍)

EffectsofQingyiHuoxuedecoctionandInfliximabonratswithacutenecrotizingpancreatitis

LIWei-dong,JIALin,MAJun,FANGJian-zhi,QIUJia-hua，HUANGYao-xing,PANJin-yao.

FirstMunicipalPeople′sHospitalofGuangzhou,GuangzhouMedicalCollege，Guangzhou510180，China

Correspondingauthor:JIALin,Email:jialin@medmail.com.cn

ObjectiveTo compare the treatment effects of Qingyi Huoxue decoction and infliximab on acute necrosis pancreatitis (ANP) complicated with MODS in a rat model.Methods4.5% sodium taurocholate was injected into the pancreatic duct to induce the ANP complicated with MODS model. The ANP rats were randomly divided into 3 groups, ANP group (ANP), Qingyi Huoxue decoction treatment group (QG), infliximab treatment group (IG). Rats in infliximab group

infliximab injection at a dose of 8 mg/kg body weight via tail vein 6 h after the ANP induction. The ANP and QG received normal saline and Qingyi Huoxue decoction (20 ml/kg) via gastric lavage 4 h before and 3 h, 9 h after ANP induction. After 24 h, all rats were sacrificed, the serum levels of amylase, total bilirubin, Cr, TNF-α, diamine oxidase (DAO), intra-abdominal pressure (IAP) and the rate of carbon propelling rate in ileum were measured. The pancreas samples were collected for pathological examination. The pathological score of pancreas was calculated.ResultsThe pathological scores in ANP, QG, IG were 13.8±0.8, 6.1±0.4, 3.9±0.6, and the difference was statistically significant (P<0.05). The serum levels of amylase, total bilirubin, Cr, TNF-α were significantly decreased. In ANP, QG, IG the serum levels of DAO were (186.3±10.2), (134.6±14.3), (149.1±16.3) U/L; the carbon propelling rates in ileum were (53±0.1)%, (89±0.1)%, (61±0.1)%; the IAPs were (11.8±1.5), (4.1±0.8), (5.8±1.2) mmHg (1 mmHg=0.133 kPa). The DAO and IAP in AG, IG were significantly decreased when compared with that in ANP group, but the carbon propelling rates in ileum was significantly higher than that in ANP group, and the difference was statistically significant (P<0.05). In addition, the carbon propelling rates in ileum in QG were higher than that in IG, and IAP and DAO levels were lower than that in IG, and the difference was statistically significant (P<0.05).ConclusionsThe Qingyi Huoxue decoction and infliximab were significantly effective in the treatment of ANP rats complicated with MODS. But the effects of Qinyi Huoxue decoction on promoting gastrointestinal motility, reducing the IAP and improving the intestinal barrier function were better than those of the infliximab.

Pancreatitis, acute necrotizing; Qingyi Huoxue decoction; Infliximab; Intra-abdomind pressure; Intestinal barrier function

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2011.03.017

廣東省中醫藥局科研課題(008006)、廣州市中西醫結合科研課題(2008A02)

510180 廣州，廣州醫學院附屬廣州市第一人民醫院消化內科(李偉冬、賈林、邱嘉華、黃耀星)，中醫科(馬軍、方建志、潘錦瑤)

賈林，Email：jialin@medmail.com.cn