新型N-取代-2-(2-氯苯基)-2-{6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺的合成及其抗血小板聚集活性

劉 穎， 支 爽， 穆 帥， 成 碟， 劉登科

(1. 天津藥物研究院 天津市新藥設計與發現重點實驗室，天津 300193； 2. 天津工業大學環境與化學工程學院，天津 300160； 3. 天津大學 化工學院，天津 300072)

噻氯匹定(Ⅰ)自1978年上市以來得到了廣泛臨床應用[1]。1998年，法國賽諾菲公司開發的氯吡格雷(Ⅱ)首次在美國上市，因毒副作用較小而在很大程度上取代了Ⅰ[2]。2009年，第一三共和Eli-Lilly共同開發出的普拉格雷(Ⅲ)在英國首次上市，臨床前和臨床試驗研究中發現其抗血栓活性比Ⅱ作用更強，用藥個體差異小，起效也更為快速[3]，但存在患者出血傾向嚴重等缺點。因Ⅰ～Ⅲ均為不同的毒副作用，為此，國內外研究人員設計合成了大量的新化合物[4～10]，以期找到更加優良的候選藥物。

本文在比較分析現有治療藥物及文獻報道新化合物結構特點的基礎上，以Ⅱ為先導化合物，利用生物電子等排原理，把Ⅱ結構中的酯基(-CO2Me)換成酰胺(-COR)基團，設計并合成了一系列新型的N-取代-2-(2-氯苯基)-2-{6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺(4a～4o， Scheme 1),為尋找到更好的先導化合物打下基礎。4的結構經1H NMR和MS表征，并測定了其體內抗血小板聚集活性。

124a～4o

Scheme1

1 實驗部分

1．1 儀器與試劑

Bruker 400型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內標)；VG ZAB-HS型質譜儀；Lab Alliance S1500型高效液相色譜儀。

1[11]和2[8]參考文獻方法合成；薄層層析硅膠板GF-254，青島海洋化工廠；其余所用試劑均為分析純或化學純。

1．2 4的合成(以4a為例)

在反應瓶中加入2 3.1 g(10 mmol)的三氯甲烷(15 mL)溶液和N，N-二甲基-4-氨基吡啶(DMAP)1.5 g，攪拌下于室溫反應約30 min。依次加入甲氧胺(3a)0.47 g(10 mmol)， 1-乙基-3-[3-(二甲氨基)丙基]碳二亞胺(EDC)2.5 g；于25 ℃反應6 h(TLC跟蹤)。用水(3×15 mL)洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉干燥，減壓除溶得淺黃色油狀液體，經硅膠柱層析[洗脫劑：A=V(三氯甲烷) ∶V(甲醇)=10 ∶1]分離得4a。用類似的方法合成4b～4o。

1．3 生物活性測試[12]

選用健康雄性Wistar大鼠(體重200 g～250 g)隨機分組。實驗分兩批進行，每批均設正常和Ⅱ對照組，灌胃給藥，劑量30 mg·kg-1。給藥容積均為10 mL·(kg·bw)-1，正常對照組給予等量0.5%CMC-Na，給藥后2 h腹腔注射40 mg·kg-1戊巴比妥鈉(1 mL·kg-1)麻醉，腹主動脈采血，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝，分別制備富血小板血漿(PRP)和貧血小板血漿(PPP)，在PAM-3型雙通道血小板聚集儀測定ADP(終濃度：1.08 μM)誘導的血小板最大聚集百分率。

2 結果與討論

2．1 實驗結果與表征數據

2和4的實驗結果見表1，光譜數據見表2； 4的抗血小板聚集活性見表3。

表1 2和4的實驗結果Table 1 Experimental results of 2 and 4

a展開劑：V(三氯甲烷) ∶V(甲醇)=10 ∶1;bHPLC;c展開劑:無水乙醇

表2 2和4的1H NMR和EI-MS數據Table 2 1H NMR and EI-MS data of 2 and 4

續表2

Comp1H NMR δ(J/Hz)*EI-MS m/z(%)4h8.13(s, 1H, NH), 7.67(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.45(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.33(m, J=10.8, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.4, 1H, TH), 6.73(d, J=4.4, 1H, TH), 4.68(s, 1H, CH), 4.64(s, 1H, CH), 3.68(s, 1H, OH), 3.48(m, J=52.8, 2H, PH), 3.06(s, 2H, CH2), 2.77(d, J=12.4, 4H, PH), 0.99(s, 3H, CH3)364.1(M+, 1), 262.1(99), 209.1(16), 125.0(36), 45.0(5)4i7.98(s, 1H, NH), 7.69(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.46(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.36(m, J=10.8, 2H, ArH), 7.25(d, J=4.4, 1H, TH), 6.75(d, J=4.4, 1H, TH), 4.71(s, 1H, CH), 3.72(s, 1H, OH), 3.51(t, 2H, CH2), 3.46(m, J=52.8, 2H, PH), 3.08(t, 2H, CH2), 2.75(d, J=12.4, 4H, PH)350.0(M+, 3), 341.1(9), 222.0(5), 70.0(49), 42.0(15)4j8.06(d, J=7.6, 1H, NH), 7.73(d, J=7.6, 1H, ArH), 7.43(d, J=7.6, 1H, ArH), 7.33(m, J=29.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=4.4, 1H, TH), 4.55(s, 1H, CH), 3.88(q, J=20.0, 1H, CH),3.50(s, 2H, PH), 2.76(m, J=11.2, 4H, PH), 1.06(q, J=18.8, 6H, CH3)347.1{[M-1]-, 4}, 264.1(38), 138.1(83), 110.0(16), 43.0(11), 27.0(4)4k8.22(t, J=11.2, 1H, NH), 7.71(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.44(m, J=9.2,1H, ArH), 7.33(m, J=29.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.74(d, J=5.2, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.48(q, J=38.0, 2H, CH2), 3.08(q, J=19.6, 2H, PH), 2.78(d, J=5.2, 2H, PH), 2.72(m, J=14.0, 2H, PH), 1.37(m, J=21.6, 2H, CH2), 1.23(m, J=22.4, 2H, CH2), 0.84(t, J=14.8, 3H, CH3)361.2{[M-1]-, 4}, 262.2(97), 110.0(16), 41.0(8), 29.0(12)4l8.25(t, J=11.2, 1H, NH), 7.71(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.44(m, J=8.8, 1H, ArH), 7.32(m, J=31.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.74(d, J=4.8, 1H, TH), 4.56(s, 1H, CH), 3.48(q, J=38.0, 2H, PH), 3.11(m, J=27.2, 2H, CH2), 2.78(d, J=5.2, 2H, PH), 2.72(m, J=22.8, 2H, PH), 1.01(t, J=14.4, 3H, CH3)333.1{[M-1]-, 3}, 262.1(95), 110.0(19), 45.0(8), 29.0(10)4m8.18(d, J=4.4, 1H, NH), 7.70(d, J=7.2, 1H, ArH), 7.44(d, J=7.6,1H, ArH), 7.33(m, J=24.0, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=5.2, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.48(q, J=42.8, 2H, PH), 2.78(s, 2H, PH), 2.71(d, J=5.2, 2H, PH), 2.62(d, J=4.4, 3H, CH3)321.0{[M+1]+, 9}, 262.1(68), 110.0(41), 58.0(64), 39.0(21)4n7.84(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.54(m, J=15.6, 2H, ArH), 7.22(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.73(d, J=5.2, 1H, TH),4.96(s, 1H, CH), 4.13(t, J=13.2, 2H, PH), 3.96(s, 2H, OH), 3.72(t, J=9.2, 4H, CH2CN), 2.68(m, J=14, 2H, CH2O), 2.48(m, J=8.4, 4H, PH), 2.32(m, J=13.6, 2H, CH2O)394.1(M+, 1), 356.1(13), 307.2(8), 128.1(85), 100.2(57), 45.3(36)4o7.72(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.43(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.32(m, J=32.0, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=4.8, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.54(d, J=7.2, 2H, PH), 2.74(m, J=26.0, 4H, PH),1.67(m, J=26.8, 4H, AH), 1.20(m, J=87.2, 8H, AH)388.1(M+, 3), 375.0(4), 179.0(20), 70.0(49), 36.0(42)

*T=thiophene, P=piperidine

表3 4的抗血小板聚集活性Table 3 Anti-platelet aggregation activities of 4

從表3可見，4a～4o均有一定的抗血小板聚集作用，其中4a， 4l和4m顯現出比其他化合物更強的活性，對血小板聚集的抑制百分率分別為60.3%， 63.0%和65.1%。

2．2 合成

1,3-二環己基碳二亞胺(DCC)是一種縮合劑，與少量催化劑DMAP聯合用于羧酸與醇縮合成酯，與胺縮合生成酰胺是最常用的合成方法[13]。合成本文目標酰胺類衍生物前期實驗中即應用了此法，但在純化過程中遇到了困難。DCC反應后的副產物DCU(二環己基脲)很難完全分離去除。研究發現，DCU在三氯甲烷中的溶解度較小，因此嘗試用氯仿溶解目標產物后過濾，但是濾液仍需多次柱分離才能得到較好純度的產物。隨后采用了水溶性的脫水劑EDC·HCl，通過水洗的方法即可方便除去副產物，極大地方便了后處理過程，得到的產物純度也較好。

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