甲亢性高血壓家兔模型中左心房eNOS基因表達和血漿NO水平變化的意義

張 鳳，金松南，文今福

(泰山醫學院1.動脈粥樣硬化研究所、2.藥學院藥物研究所，山東 泰安 271000)

目前內皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)與心血管疾病的關系倍受關注［1－2］。眾所周知，左心房是體循環的初級泵，在機體的血液循環中發揮關鍵性作用，而其功能異常與多種心血管疾病如高血壓、房顫、心肌缺血等密切相關。近來研究表明［3］，左心房中eNOS基因表達減弱可誘導房顫的發生和發展。然而，甲亢性高血壓病理狀態下左心房中eNOS基因表達和血漿NO水平的動態變化尚不清楚。本研究旨在探討甲亢性高血壓病理狀態下左心房中eNOS基因表達和血漿NO水平變化，為甲亢性高血壓的防治提供新的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物 新西蘭大耳白家兔由山東省濟寧魯抗公司提供，體質量2.2～2.5 kg。家兔隨機分4組，分別為對照組12 d組，L-甲狀腺素(T4)注射12 d組，每組6只。甲亢組皮下注射 T4，其劑量為 0.5 mg·kg－1·d－1，對照組皮下注射等體積的生理鹽水。

1.2 試劑 NO試劑盒(南京建成生物工程研究所);TRIzol(Invitrogen公司)，M-MLV逆轉錄試劑盒(Promega公司)，TaqDNA聚合酶(Solarbio公司)，RT-PCR引物由Invitrogen公司合成。

1.3 血壓和心率檢測 用1%戊巴比妥鈉溶液麻醉家兔，仰臥位固定，頸部正中皮膚做7 cm長縱形切口，行氣管插管，用玻璃分針剝開左側頸動脈鞘，并分離頸總動脈，插入充有肝素的動脈插管，經壓力換能器將血壓和心率變化輸入配有BL-420E系統的電腦進行數據記錄和處理。

1.4 RT-PCR法檢測左心房eNOS基因表達 利用TRIzol試劑提取總RNA，并進行RNA純度和濃度檢測。cDNA的合成參照逆轉錄擴增試劑盒操作程序進行。PCR分析:GAPDH作為內參，靶基因為eNOS，引物序列為5'-TACAGACAGCAGGAGGGTTC-3'和5'-TCTCCGTGCTCATGTACCAG-3'。將PCR產物在2%瓊脂糖凝膠中進行電泳，置于凝膠成像系統成像。以目的基因光密度值與內參基因光密度值的比值作為該樣品中目的基因的相對轉錄量。

1.5 血漿中NO檢測 心臟取血，經離心獲取血漿。硝酸還原酶法測定血漿NO含量，按照試劑盒說明書操作(最大吸收峰550 nm處測定吸光度)，單位為μmol·L－1。

1.6 統計學分析 采用SPSS11.5統計軟件進行分析，數據以ˉ±s表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 T4注射對家兔血壓、心率和左心房質量的影響 與對照組相比，T4注射12d組收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均動脈壓(MAP)和心率(HR)均升高(P＜0.05)(Tab 1)。

Tab 1 Changes in blood pressure and heart rate in sham and T4-treated rabbits(ˉ±s，n=6)

Tab 1 Changes in blood pressure and heart rate in sham and T4-treated rabbits(ˉ±s，n=6)

GroupSBPDBPMAPHR(12 d)/kPa/kPa/kPa/time·min －1 Sham 15.7 ±0.4 11.0 ±0.4 12.6 ±0.5 260.9 ±1.4 T4-treated 20.4 ±0.5＊＊13.1 ±0.6* 15.5 ±0.7* 411.9 ±3.8＊＊

2.2 甲亢性高血壓家兔模型中左心房eNOS mRNA表達水平變化 以GAPDH作為內參照，eNOS mRNA表達量的光密度掃描分析顯示，甲亢組eNOS mRNA水平(0.22±0.01)低于對照組(0.13±0.01)，n=3，P＜0.01。

2.3 甲亢性高血壓家兔模型中血漿NO水平變化 用硝酸還原酶法檢測血漿NO水平結果，甲亢組血漿 NO水平(67.89±13.14)μmol·L－1高于對照組(53.12 ±9.52)μmol·L－1，n=6，P ＜0.01。3 討論

心血管系統是甲狀腺激素作用的重要靶器官，出現甲亢時由于甲狀腺激素過量，交感神經興奮，腎素－血管緊張素系統激活，從而導致心血管功能紊亂［4－5］。本實驗結果顯示，與對照組相比T4注射12 d后收縮壓、舒張壓、平均動脈壓和心率均升高，表明T4注射12 d能誘導甲亢性高血壓模型。

NO是機體內一種作用廣泛的氣體信號分子，具有降血壓、擴血管、抗心肌肥厚和抗炎等多種生物學效應［6－8］。已有研究證實［9］，心室肌eNOS基因表達下調和NO生成減少與自發性高血壓大鼠(SHR)血壓升高關系密切。本實驗中分析左心房eNOS基因表達結果，甲亢組eNOS基因水平明顯低于對照組，提示此變化與左心房功能紊亂密切相關而易產生房顫。本實驗中分析血漿NO水平結果，甲亢組血漿NO水平高于對照組，這可能與甲亢時血流切應力升高而血管內皮釋放的NO增多有關，是機體的一種代償性保護機制。雖然甲亢組血漿NO水平高于對照組，但仍處于嚴重的高血壓狀態，其原因可能是由于高血壓病理狀態下NO的生物利用度降低，此時應有足夠量的NO才能夠逆轉其病情。

綜上所述，本研究觀察到甲亢性高血壓病理狀態下左心房eNOS基因表達下調和血漿NO水平升高現象，提示甲亢性高血壓病理狀態下左心房eNOS基因表達下調與左心房功能紊亂密切相關。

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