藤茶中二氫楊梅素β-環糊精包合物制備工藝研究

粱曉嵐，李云耀，何桂霞*，鄒 茜，劉赫男

（湖南中醫藥大學藥學院中藥現代化省教育廳重點實驗室，湖南 長沙 410208）

藤茶中二氫楊梅素β-環糊精包合物制備工藝研究

粱曉嵐，李云耀，何桂霞*，鄒 茜，劉赫男

（湖南中醫藥大學藥學院中藥現代化省教育廳重點實驗室，湖南 長沙 410208）

目的 研究二氫楊梅素β-環糊精包合的最佳工藝。方法 運用紫外分光光度計，采用正交實驗法，以包合溫度、包合時間、β-環糊精與二氫楊梅素的比例為考察因素，以二氫楊梅素包合率為指標，優選包合的最佳工藝。結果 β-環糊精包合二氫楊梅素的最佳制備工藝為：包合溫度為70℃ ，包合時間為60min，β-環糊精與二氫楊梅素為1∶2.5。結論 優選的β-環糊精包合工藝簡單，方便實用。

藤茶；二氫楊梅素；β-環糊精包合物；制備工藝；正交實驗；紫外分光光度計

二氫楊梅素(Dihydromyricetin，簡稱DMY)為葡萄科蛇葡萄屬植物藤茶Ampelopsis grossedentala(Hand—Mazz)W.T.Wang中主要化學成分， 且含量高達20%多[1-2]。藥理研究表明，二氫楊梅素能對抗去腎上腺素和高K+所致的兔胸主動脈條的收縮反應及顯著擴血管和鈣阻滯作用，具有消炎、抑菌、止咳、鎮痛、消脂及抗脂質過氧化等功效[3-4]。因二氫楊梅素在藤茶中含量高及較明顯的藥用價值成為近年研究的熱點。由于二氫楊梅素常溫下水溶解性差，生物利用度低，且有多酚羥基結構，對光線、溶液的pH值及鐵、鋁等金屬離子敏感，易氧化變質，使其應用受到較大限制[5]。為改善其物理特性，更好地發揮其功效，采用β-環糊精（β-CD）包合技術[6-7]，將二氫楊梅素制成包合物；利用正交實驗設計，對影響包合率的諸多因素進行考察，從而篩選優化得到最佳的包合工藝?，F將方法及結果報道如下。

1 儀器與試藥

K-2501紫外分光檢測器(北京北分瑞利分析儀器(集團)有限責任公司)；FA2104萬分之一電子天平(上海精密科學儀器有限公司天平儀器廠)；KQ-250DE型數控超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）。二氫楊梅素(DMY)對照品為自制，1H-NMR光譜分析鑒定結構，高效液相歸一化方法檢測，含量在99.0%以上；β-環糊精 （中國醫藥集團上?；瘜W試劑公司）；所用化學試劑均為國產分析純。

2 方法與結果

2.1 包合物中二氫楊梅素的含量測定

2.1.1 二氫楊梅素對照品儲備液的配制 精密稱取真空70℃干燥至恒重的二氫楊梅素對照品11.5mg，95%乙醇溶解并定容至25 mL，備用。

2.1.2 吸收波長選擇 分別將二氫楊梅素、β-環糊精及二氫楊梅素β-環糊精包合物的95%乙醇溶液在190～400 nm波長范圍進行紫外掃描，二氫楊梅素溶液在290 nm波長處有最大吸收峰，二氫楊梅素β-環糊精包合物與二氫楊梅素的最大吸收波長一致，而β-環糊精在此無吸收，故選擇290 nm為檢測波長。

2.1.3 標準曲線的制備 精密吸取二氫楊梅素對照品儲 備 液 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL， 分 別置50 mL量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，搖勻，于290 nm下測定吸光度，以濃度C為橫坐標，吸收度A為縱坐標，得回歸方程

2.1.4 精密度試驗 按線性范圍分別配制高、中、低3種濃度的二氫楊梅素乙醇溶液，以95%乙醇為空白，于290 nm處分別1 d內測定5次和5 d內測定5次，按標準曲線法計算濃度。結果日內精密度RSD為0.42%，日間精密度RDS為0.78%。

2.1.5 回收率試驗 取已知含量的二氫楊梅素β-環糊精包合物2mg，精密稱定，共9份分成3組，置50 mL容量瓶中加95%乙醇溶解并定容，再量取該溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，分別加入0.1、0.2、0.4 mL 二氫楊梅素對照品儲備液，按“2.1.3”項下方法測定吸光度，求加樣回收率。平均回收率為97.86%，RSD 為 1.597%(n=9)。

2.1.6 樣品測定 取二氫楊梅素β-環糊精包合物2mg，精密稱定，用95%乙醇定容至250 mL，超聲使之溶解，在290 nm波長處測定吸光度，按下式計算出二氫楊梅素包合率：

2.2 正交實驗設計

2.2.1 因素及水平 經初步試驗，選擇β-環糊精與二氫楊梅素的比例(A)、包合溫度(B)、包合時間(C)為考察因素，利用L9(34)進行正交實驗。包合工藝因素水平見表1。

表1 因素水平表

2.2.2 β-環糊精包合物制備工藝 精密稱取一定量β-環糊精，加入純化水，超聲使成飽和溶液。另精密稱取一定量二氫楊梅素，用95%乙醇溶解，超聲下將其緩緩滴入β-環糊精飽和溶液中，超聲處理一定時間，放冷至室溫，然后放入冰箱中冷藏12 h，抽濾，固體物先用乙醇洗滌，再用純化水洗滌，抽干，于60℃真空干燥10 h，得二氫楊梅素β-環糊精包合物，稱質量。以二氫楊梅素包合率為評價指標，篩選最佳工藝條件。

2.2.3 正交試驗結果 二氫楊梅素β-環糊精包合工藝條件篩選的正交試驗結果見表2。影響包合的因素排列順序為A>C>B,最佳因素水平為A2B2C3，即最佳包合工藝條件為β-環糊精與二氫楊梅素的分子比為1∶2.5、包合溫度為60℃、包合時間為90min，含藥量為32.24%。方差分析表明，β-環糊精與二氫楊梅素的分子比對，實驗結果有顯著性影響，而包合時間和包合溫度對包合率影響不顯著。見表3。

表2 包合工藝正交試驗結果

表3 以包合率為指標的方差分析

2.3 包合物的鑒定

2.3.1 薄層色譜法 將二氫楊梅素對照品乙醇溶液、二氫楊梅素對照品乙醚溶液、二氫楊梅素β-環糊精包合物乙醇溶液、二氫楊梅素β-環糊精包合物乙醚溶液點于同一硅膠G板上，置展開劑甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)中展開，將層析板取出晾干，噴 3%三氯化鐵乙醇溶液顯色，結果前3個樣品均在Rf值0.6處出現相同的紫色斑點，而二氫楊梅素β-環糊精包合物乙醚溶液樣品色譜中未出現與前三者相同的斑點，說明二氫楊梅素被β-環糊精包合。

2.3.2 紫外光譜法 將二氫楊梅素及二氫楊梅素β-環糊精包合物乙醇溶液在200～400 nm波長范圍進行紫外掃描，結果，二氫楊梅素和二氫楊梅素β-環糊精包合物的吸收圖譜完全一致，說明包合前后二氫楊梅素未發生化學變化，而是通過物理包合作用形成了包合物。

3 討論

近年來β-環糊精包合物在中藥制劑中的應用研究日漸廣泛，β-環糊精包合物可用于改善難溶性藥物的溶解度，可使液體藥物粉末化與防揮發，掩蓋藥物不良臭味和降低刺激性，提高藥物的穩定性等[8]。目前β-環糊精包合技術主要有飽合水溶液法、溶液-攪拌法、研磨法、超聲波等。超聲波是機械振動能量的傳播，可在液體中形成有效的攪動與流動，破壞介質的結構，能達到普通低頻機械攪動達不到的效果，超聲波法制備包合物具有時間短、包合率較高、條件易控制、工藝簡單等優點[9-10]。本論文篩選制備二氫楊梅素β-環糊精包合物的最佳工藝，包合率為86.77%，二氫楊梅素的含量為32.24%，制得的包合物為白色無味的粉末。關于二氫楊梅素β-環糊精包合物的溶出度、穩定性和藥效的觀察有待于進一步研究。

[1]周天達，周雪仙.藤茶中雙氫黃酮醇的分離結構鑒定及藥理活性[J].中國藥學雜志，1996，31(8)：458-460.

[2]何桂霞，裴 剛，楊偉麗，等.HPLC測定藤茶不同采收時期及不同部位的二氫楊酶素含量[J].中成藥，2004，26(3)：210-212.

[3]周雪仙，周天達.二氫楊梅樹皮素對兔胸主動脈條平滑肌收縮反應[J].現代應用藥學，1997，14(2)：43-45.

[4]鐘正賢，覃潔萍，周桂芬，等.廣西瑤族藤茶中雙氫楊梅樹皮素的藥理研究[J].中國民族醫藥雜志，1998，4(3)：42-44.

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[6]徐 勤，陳 霞，王子嵐.正交設計法優選水楊酸β-環糊精的包合工藝[J].實用藥物與臨床，2010，13(4)：264-266.

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[9]翁何霞，王燦嶺.超聲波法制備八角茴香油包合物的工藝考察[J].中國藥師，2006，9（6）：565-566.

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Preparation of inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin from ampelopsis grossedentala

LIANG Xiao-lan,LI Yun-yao,HE Gui-xia,ZOU Qian,LIU He-nan
(Pharmacy College,TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)

ampelopsis grossedentala； dihydromyricetin;complex of β -cyclodextrin；preparation；orthogonal test;UV spectrophotometer

R283.6

B

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.01.012.043.03

〔Absrract〕Objective To study the optimized process for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin β-cyclodextrin.Methods The orthogonal design and ultraviolet spectrophotometer were used,and the including temperature,including time,the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin were studied,and inclusion ratio were used as optimizing index.Results The optimized preparation conditions of dihydromyricetin-β-cyclodextrin included that the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin was 1:2.5,the inclusion temperature 70℃ and the stirring time 60 min.Conclusion The optimizied process is simple, functional and convenient for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin.

2010-03-12

湖南省教育廳科學研究資助項目(07C498)；湖南省教育廳中藥學重點學科和“十一五”校級重點學科中藥化學與分析的項目資助。

梁曉嵐(1988-)，女，湖南益陽人，碩士研究生，從事中藥化學與制劑工藝研究。

* 何桂霞，博士，教授，碩士生導師，E-mail： heguixia65@yahoo.cn。

（本文編輯 徐愛良）