蔞葉提取物的抗氧化與抑菌活性研究

　　摘 要：目的：觀察蔞葉各部分提取物的抗氧化及抗菌實驗效果。方法：采用濾紙片法對6種常見細菌的生長抑制活性進行測定，用DPPH法及連苯三酚紅褪色法進行抗氧化研究。結果：蔞葉提取物對藤黃球菌、大腸桿菌、普通變形桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、佛氏痢疾桿菌均有抑殺作用；蔞葉提取物均具有抗氧化作用。結論：蔞葉果實部分乙醇提取物具有更強的抗菌作用；蔞葉葉子部分乙醇提取物具有較強的抗氧化活性。
　　關鍵詞：蔞葉；抗氧化；抑菌活性
　　中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）05-0057-03
　　
　　蔞葉（Piper betle Linn.）別名蒟醬、青蒟、蘆子、大蘆子、檳榔蒟、檳榔，屬胡椒科胡椒屬植物^［1］。蔞葉在我國古代曾是有名的栽培植物和野生藥用植物，以全株或莖、葉入藥，味辛、微甘，溫。全株及莖葉全年可采為藥用。具有祛風散寒，行氣化痰，消腫止癢的功效。主要用于治療風寒咳嗽，支氣管哮喘，風濕骨痛，胃寒痛，妊娠水腫；外用可治皮膚濕疹，腳癬等皮膚疾病^［2］。因為蔞葉的抗病抗蟲性強，長期咀嚼蔞葉還有護齒作用。研究發現蔞葉的提取物對老鼠的可逆性節育有一定作用^［3］。蔞葉中的主要成分是生物堿、木脂素、黃酮類^［4~5］。本文采用DPPH法及連苯三酚紅法對蔞葉提取物進行了抗氧化活性研究，并分別采用蔞葉的多種提取物對多種菌株進行抑菌了實驗，擬觀察蔞葉體外的抗氧化及抑菌效果，為中藥蔞葉的開發和應用提供基礎理論依據。
　　1 材料與方法
　　1.1 實驗材料
　　1.1.1 材料與試劑 蔞葉（Piper betle Linn.）采自云南保山。標本經云南大學生物系馬紹賓教授鑒定后保存于云南民族大學生物技術實驗室。DPPH（1，1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl二苯代苦味肼基自由基），日本東京化成株式會社生產；連苯三酚紅，LEADMAN公司生產；沒食子酸，實驗室自制；其它試劑均為國產分析純。
　　1.1.2 供試菌種 藤黃球菌（Micrococcus luteus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、普通變形桿菌（Proteus mirabilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、綠膿桿菌（Pseudom onasaeraginosa）、佛氏痢疾桿菌（Valsalva dysentery bacillus）購置于云南大學微生物實驗室以牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基培養^［6］備用。
　　1.2 儀器與設備（只標注主要的） 旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠；循環水式真空水泵，河南鞏義市英峪華儀器廠；7200型分光光度計，上海精密科學儀器有限公司；恒溫箱，上海實驗儀器廠；手提式壓力蒸汽滅菌鍋，廣州市化南醫療器械廠；超凈工作臺，蘇州凈化集團安泰設備公司。
　　1.3 方法
　　1.3.1 蔞葉提取物浸膏的制備 稱取曬干切碎的蔞葉莖、葉和果實各100 g，分別用95%的酒精和70%的丙酮直接回流3 h，重復4次，餾分用旋轉蒸發器減壓濃縮，蒸干溶劑，得膏狀提取物，稱重。置于小瓶子中保存備用。
　　1.3.2 蔞葉提取物的抑菌活性研究 取蔞葉的各種提取物0.1 g，各加入1 mL 95%的乙醇使其完全溶解，得濃度為10%的溶液，再依次稀釋為5%、2.5%的濃度梯度。滅菌后放置備用。利用濾紙片瓊脂擴散法^［7~8］對蔞葉提取物進行抑菌活性測定。
　　1.3.3 蔞葉提取物的抗氧化活性研究 取蔞葉各種提取物按質量濃度均為1.05 g/L配制成抗氧化劑溶液。按以下方法進行抗氧化活性研究。
　　1.3.3.1 DPPH自由基捕獲分光光度法^［9］ 往10mL 比色管中依次加入4mL pH 6.88 標準磷酸鹽緩沖溶液，4 mL 0.177 7 mmol/L DPPH 溶液，混勻，再加入一定量抗氧劑溶液，蒸餾水補充體積至10mL 刻度，充分混勻，10 min 后在520 nm 處測量吸光度。對DPPH 自由基的清除率的計算
　　KP（%）=［1-（Ai-Aj）/Ac］×100
　　式中：Ai=加抗氧劑反應后DPPH 溶液吸光度；Aj=不加DPPH，只加抗氧劑及水的溶液的吸光度；Ac=未加抗氧劑，只加DPPH 及水的溶液的吸光度。
　　1.3.3.2 連苯三酚紅褪色光度法^［9］ 往10mL 具塞比色管中，依次加入2mL pH 9.1 的NaCO3—NaHCO3緩沖溶液，0.7mL 0.003 8 mol/L EDTA-Fe2 + 溶液，3.5mL 0.0001 mol/L連苯三酚紅溶液，0.7mL 體積分數0.6 % HO溶液，蒸餾水補充至刻度后在25 ℃保溫反應30 min（上面每加一次均需搖勻），測544 nm處的吸光度。設不加HO時的吸光度為A0，加入HO 后的吸光度為Ab，則羥自由基產生量可用ΔA = A0-Ab 來表征。在體系中加HO之前加入一定量的抗氧劑樣品，測定其吸光度As。則抗羥自由基氧化率S的計算
　　SP（%）=（As-Ab）/（A0-Ab）×100
　　2 結果與分析
　　2.1 蔞葉提取物對6種病原菌的抑菌活性 見表1。
　　注：濾紙直徑為1.0 cm
　　由表1可知，萎葉提取物對藤黃球菌，普通變形桿菌的抑菌效果較明顯，而對綠膿桿菌的抑菌效果相對較差；抑菌效果與濃度呈正相關系；不同溶劑提取物對各種病原菌的抑菌程度存在差異，乙醇提取物比丙酮提物的抑菌效果好；蔞葉不同部位的抑菌活性不一樣，蔞葉果實部分的抑菌活性相對較強。
　　2.2 蔞葉提取物抗氧化活性測定
　　2.2.1 DPPH自由基捕獲分光光度法研究 按實驗方法加入不同體積的DPPH（質量濃度均為1.05 g/L），測出 Ai，Aj，Ac，計算出Ai-Aj 值，據此再計算出其相應的自由基清除率K。結果見圖1。
　　2.2.2 連苯三酚紅褪色法對羥自由基的研究 按實驗方法加入不同體積的抗氧劑（質量濃度均為1.05 g/L，測出 As，Ab，A0，計算出（As–Ab）/（A0–Ab）值，據此再計算出其相應的抗羥自由基氧化率。結果見圖2。
　　1.蔞葉葉子95%乙醇提取物；2.沒食子酸；3.蔞葉果實95%
　　乙醇提取物；4.蔞葉葉子70%丙酮提取物；5.蔞葉果實70%
　　丙酮提取物；6.蔞葉莖95%乙醇提取物
　　從圖1、2 可知：隨著抗氧劑用量的增加，其捕獲的DPPH自由基和羥自由基也越多，抑制率上升，逐漸達到飽和狀態。所做的各抗氧化劑樣品捕捉DPPH自由基和羥自由基的能力次序為：蔞葉的葉子提取物>蔞葉果實提取物>蔞葉莖提取物乙醇提取物 >丙酮提取物。
　　蔞葉果實乙醇提取物對DPPH 自由基有很強的清除作用。其IC50比茶葉的抗氧化性略高^［10］。由于身體在生命活動的氧化代謝過程中會不斷產生各種自由基，對人體造成不同程度的損害，導致疾病的發生。而人工合成的抗氧化劑具有一定的毒害作用^［11］，所以研究天然的抗氧化劑已成為必然要求。
　　
　　3 結論
　　采用DPPH自由基捕獲法和聯苯三酚紅褪色法對蔞葉的各種提取物進行了抗氧化研究結果表明蔞葉葉子部分乙醇提取物具有較強的抗氧化活性；采用濾紙片瓊脂擴散法進行抗菌研究，結果表明蔞葉果實部分乙醇提取物具有更強的抗菌作用。蔞葉物質資源豐富，有很大的發展潛力，這對于研究蔞葉提取物在食品及醫藥行業的應用具有重要的意義，有望開發成為天然防腐劑及藥物。
　　
　　參考文獻：
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　　（收稿日期：2010-12-30）