三七總皂苷對肺纖維化大鼠的Smad 2/3表達的影響

　　摘 要：目的：觀察三七總皂苷對肺纖維化大鼠smad 2/3表達的影響，探討其作用機制。方法：56 只 SD 大鼠隨機分為模型組、對照組、三七總皂苷組、地塞米松組。采用博萊霉素制備肺纖維化大鼠模型，24 h 后給予干預藥物，分別于 14 d、28 d處死動物后觀察其病理變化、肺系數及Smad 2/3的表達。結果：與模型組比較，三七總皂苷組的肺泡炎和肺纖維化明顯減輕，肺組織Smad 2/3表達降低。結論：三七總皂苷抑制博萊霉素誘導的大鼠肺纖維化的機制與其抑制Smad 2/3蛋白有關。
　　關鍵詞：三七總皂苷；Smad 2/3蛋白；博萊霉素；肺纖維化
　　中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）05-0065-02
　　
　　肺纖維化（Pulmonary fibrosis，PF）疾病是各種不同病因肺部疾病的共同結局，包括特發性肺纖維化、結節病、塵肺、過敏性肺炎、藥物和放射線導致的纖維化，與膠原血管病有關的致纖維化肺泡炎等，病因各異，疾病譜廣泛。目前有研究顯示三七總皂苷對肝纖維化有一定干預作用^［1］。本研究采用博萊霉素制備肺纖維化大鼠模型，以Smad2/3為靶點，觀察其肺纖維化組織中的表達，有助于揭示肺纖維化的發病機制以及指導臨床防治。
　　1 材料與方法
　　1.1 動物來源 健康雄性SD大鼠56只，體重 200 ±20 g，購于昆明醫學院實驗動物中心 ，合格證號：0010295。
　　1.2 藥物與試劑 博萊霉素：15mg/支，日本化藥株式會社生產；三七總皂苷（絡泰注射用血塞通）由昆明制藥集團有限公司提供；Smad 2/3試劑盒購自武漢博士德生物有限公司；DAB顯色試劑盒由福州邁新生物技術開發有限公司提供。
　　1.3 動物模型的建立及分組 將大鼠隨機分為模型組（MG）、對照組（CG）、三七總皂苷組（PG）、地塞米松組（DG），每組 14 只。除對照組外，其他3組大鼠均按照文獻報道的方法，經氣管一次性注入博萊霉素A5（5mg/kg體重）復制肺纖維化大鼠模型。對照組以生理鹽水代替博萊霉素。術后置動物于干燥、溫暖條件下喂養，定期消毒喂養場所。模型建立24 h 后腹腔內注射干預藥物，每日1次，PG為三七總皂苷100mg/ kg?d，DG為地塞米松1 mg/ kg?d，MG則為0.9%氯化鈉注射液0.4 mL/d。
　　1.4 標本的采集 各組大鼠分別于手術后第14 d和28 d各處死7只。大鼠稱重后麻醉，剖胸取肺并稱重，取左下肺葉固定于10%的福爾馬林溶液中，供HE染色和免疫組化檢測用。
　　1.5 檢測指標 （1）一般情況觀察。（2）病理組織學檢查：HE染色。（3）smad 2/3蛋白測定：普通光鏡下觀察，每張切片隨機選取5個低倍視野，胞漿呈清晰棕色為陽性。按染色結果分為：0級陰性（-），1級灶狀陽性（+），2級彌漫性弱陽性（++），3級彌漫性中等陽性（+++），4級彌漫性強陽性（++++）。
　　1.6 統計學方法 數據以均數±標準差表示，采用SPSS11.0統計軟件包進行分析，采用t檢驗，P<0.05為有顯著性差異。
　　2 結果
　　2.1 一般狀況觀察 大鼠在術后第1 d，精神萎靡，活動減少，飲食差，第2 d恢復。CG、PG精神、飲食好，毛色潤澤，反應靈敏，體重進行性增加，無死亡。DG造模7 d后死亡3只，均于夜間死亡，死亡原因為互相嘶咬，7 d后大鼠精神、飲食、活動明顯較以上2組差，體重呈下降趨勢。MG 14 d后一般情況變差，體重無明顯增長，其間死亡1只。
　　2.2 病理學觀察 MG第14 d肺泡炎癥，成纖維細胞增生，有膠原沉積及斑片狀的纖維化改變；第28 d炎癥細胞減少，病變范圍彌散，大量肺泡結構萎陷、破壞，大量膠原沉積在新生的毛細血管周圍，肺泡間隔以及部分肺泡腔被膠原和纖維蛋白占據（見圖1）。PG、DG 14 d肺泡炎癥較好轉，少量淋巴細胞浸潤，成纖維細胞少量增生；第28 d肺泡炎癥消退，少量肺泡結構萎陷，肺泡間隔少量膠原沉積（見圖2）。
　　2.3 smad 2/3蛋白測定 CG大鼠肺組織僅見smad 2/3少量表達。MG可見smad 2/3廣泛表達于肺組織細胞胞漿和胞核（見圖3）。14 d和28 d均強陽性表達，有顯著性差異（P<0.05）。 PG、DG smad 2/3蛋白表達趨勢同MG（見圖4），但低于MG，高于CG，差異有顯著性意義（P<0.05）（見表1）。
　　注：與CG比較，*P<0.05；與MG比較，#P<0.05
　　3 討論
　　PF的發病機制極為復雜，細胞因子在其發生發展過程中起著重要作用，它們構成一個復雜的細胞外信號傳導分子的網絡系統和鏈式反應系統，導致以炎細胞浸潤、纖維母細胞增生和間質結締組織沉積為特征的免疫介導的慢性炎癥^［2］。Smad家族蛋白是細胞因子受體的胞內激酶底物，介導了TGF-β1對基因表達的調控^［3］。三七總皂苷具有抗脂質過氧化作用，改善肺部微循環；抑制炎性細胞的滲出與趨化，減少細胞因子的產生和釋放；抑制肺成纖維細胞增殖，減少膠原的合成；增強膠原酶活性，促進已合成的膠原的降解，從而達到抑制肺纖維化的作用^［4］。本實驗結果顯示，經氣管注入博萊霉素造模后，MG一般情況變差，病理呈肺纖維化改變，smad 2/3廣泛表達于肺組織細胞胞漿和胞核，14 d和28 d均強陽性表達。PG、DG大鼠肺組織炎癥及肺纖維化程度均好于MG，但低于CG。而smad 2/3蛋白表達趨勢同MG，但低于MG，高于CG。說明三七總皂苷和地塞米松對肺纖維化有一定干預作用，能延緩肺纖維化發生，但不能治愈。但DG，死亡率高，副作用大，不宜于長期使用。
　　綜上所述，三七總皂苷可在一定程度上干預肺纖維化進程，其干預博萊霉素誘導的大鼠肺纖維化機制與抑制Smad 2/3蛋白表達有關。Smad 2/3是肺纖維化發生發展的關鍵性因子。因此，Smad 2/3及其家族作為抗纖維化機制中的重要靶點，可進一步研究。
　　
　　參考文獻：
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