苦蕎中總黃酮的含量測定

　　摘要：目的：建立苦蕎中總黃酮的含量測定方法。方法：采用3種紫外分光光度法法測定總黃酮含量，并對蘆丁法進行了方法學評價。結果：蘆丁法更適于苦蕎中總黃酮的含量測定，總黃酮含量為1.66-2.01％，回收率為89.8％(RSD＝5.43％)(n＝6)。結論：該方法簡便、快速、準確，可用于苦蕎的質量控制。
　　關鍵詞：苦蕎；總黃酮；分光光度法
　　中圖分類號：R285.4　文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349(2011)01-0057-02
　　
　　苦蕎又稱韃靼蕎麥(Tartary buckwheat)，為雙子葉蓼科蕎麥屬植物，在我國西南、北方種植廣泛，資源豐富。苦蕎含有黃酮類化合物、多種氨基酸、多糖、不飽和脂肪酸等許多化學成分。藥理和化學成分的研究表明，苦蕎具有較明顯的降血糖、降血脂、增強免疫功能等作用，其有效成分主要是蘆丁、槲皮素等黃酮類化合物。民間亦以食用苦蕎防治糖尿病、高血壓、高血脂等病。
　　目前，蕎麥黃酮的測定方法有分光光度法、高效液相色譜法、毛細管電泳法。本實驗采用蘆丁法直接測定黃酮含量，并與另外兩種顯色后的分光光度法進行比較，期望為苦蕎中總黃酮含量的測定提供參考。
　　
　　1、材料、試劑與儀器
　　
　　1.1材料與試劑材料：苦蕎樣品分別取自會澤火紅、云南大山包、羅平牛街。蘆丁對照品(批號：09072231，上海同田生物技術有限公司)，試劑均為分析純。
　　1.2儀器紫外可見分光光度計(北京普析，TU1810)，超聲提取器(上海儀器制造廠，SK3200H)，電子天平(德國賽多利斯CP-224S)。
　　
　　2、方法與結果
　　
　　2.1對照品和樣品溶液制備
　　2.1.1對照品溶液的配制精密稱取蘆丁對照品9.5mg置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得蘆丁對照品溶液濃度為0.38mg/mL。
　　2.1.2供試品溶液的配制分別取苦蕎粉末(過60目篩)約100mg，精密稱定，置于25mL容量瓶中，加入60％乙醇2mL，在常溫下超聲(59KHz)提取20min，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
　　2.2總黃酮含量測定
　　2.2.1標準曲線的制定
　　2.2.1蘆丁法精密移取2.1.1項下的對照品溶液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5ml于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀釋并定容至刻度后，在360mm波長處進行測定，繪制標準曲線，得到回歸方程為：Y＝0.028X＋0.0172(r＝0.9998)。
　　2.2.1.2氯化鋁法精密移取2.1.1項下的對照品溶液0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL于25mL容量瓶中，加入60％乙醇溶液5mL，5％氯化鋁溶液3mL，100mg/mL乙酸鈉溶液5mL，再用60％乙醇溶液定容至刻度后，放置40min，在420mm波長處進行比色測定，繪制標準曲線，得到回歸方程為：Y＝0.0365X＋0.0278(r＝0.9994)。
　　2.2.1.3硝酸鋁法精密移取2.1.1項下的對照品溶液1.0，1.2，1.5，2.0mL。于25mL容量瓶中，加入60％乙醇溶液5mL，5％亞硝酸鈉溶液0.7mL，5min后，再加入10％硝酸鋁溶液0.7mL，6min后，加入40％氫氧化鈉溶液5mL，60％乙醇溶液定容至刻度后，放置10min，在510nm波長處進行比色測定，繪制標準曲線，得到回歸方程為：Y＝0.0152X-0.016(r＝0.9991)。
　　2.2.1.4樣品含量測定分別準確移取供試品溶液5mL于25mL容量瓶中，分別用以上3種方法進行測定，試劑空白為參比。測定結果見表1。
　　2.3蘆丁法方法學研究
　　2.3.1精密度試驗精密吸取2.1.1項下的蘆丁對照品溶液1.0mL于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀釋并定容至刻度后，在360nm波長處進行測定，連續測定5次，記錄吸光度，計算相對標準偏差(RSD)，結果RSD為0.26％。
　　2.3.2穩定性試驗精密吸取同一供試品溶液5.0mL于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀釋并定容至刻度后，于0、2、4、6、8h分別用360nm波長進行測定，記錄吸光度，計算相對標準偏差(RSD)，結果RSD為2.68％。
　　2.3.3重復性試驗取同一批樣品6份，精密稱定，按
　　2.1.2項下方法制備供試品溶液，分別準確移取5mL于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀釋并定容至刻度后，在360nm波長處進行測定，記錄吸光度，計算相對標準偏差(RSD)，結果RSD為1.74％。
　　2.3.4回收率試驗
　　取已知含量的苦蕎粉末約100mg，精密稱定，共6份，加入蘆丁對照品1.6mg按2.1.2項下方法制備供試品溶液，分別準確移取2mL于25mL容量瓶中，用60％乙醇溶液稀釋并定容至刻度后，在360nm波長處進行測定，記錄吸光度，計算加樣回收率。結果平均加樣回收率為89.8％(RSD＝5.43％)。
　　
　　3、討　論
　　
　　3.1蕎麥黃酮的提取方法目前，蕎麥黃酮的提取方法有熱水提取、有機溶劑提取、堿性水或堿性稀醇提取及酶法。常規的提取方法普遍存在耗時、耗能、提取效率低等問題。有研究表明，利用超聲波可以加速有效成分進入溶劑，從而提高提取率，縮短提取時間，節約溶劑，并且免去了高溫對提取成分的影響，故本實驗采用超聲法提取。
　　3.2.3種分光光度法測定結果的比較由表1數據表明，3種分光光度法中的測定結果蘆丁法較高，并且該方法不需顯色，操作簡便，干擾因素少，結果較準確、可靠。本實驗對蘆丁法進行了驗證，實驗結果表明，該方法穩定性與重復性、精密度均較好，可用于苦養中總黃酮的測定。
　　
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