熒光光譜法測(cè)定不同品種鱉中微量元素鋅的含量

摘要：在磷酸鹽緩沖液中，當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為２３０ ｎｍ時(shí)，蘇丹Ⅱ溶液在４６３ ｎｍ處出現(xiàn)一個(gè)弱的熒光峰，Ｚｎ２＋溶液的加入使得該處的峰值增加，其增加值ΔＦ與Ｚｎ２＋濃度在０．９０８ ４～４５．４２２ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，回歸方程為ΔＦ＝１５．９７Ｃ－４．９５８，相關(guān)系數(shù)ｒ?yàn)椋埃梗梗?６，檢測(cè)限為０．５９７ ４ μｇ／ｍＬ。基于此建立了微量元素Ｚｎ２＋濃度測(cè)定的新方法，該法可用于鱉不同部位鋅含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：熒光光譜；鱉；鋅離子

中圖分類號(hào)：Ｏ６５７．３９；Ｓ９１７．４文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０11）11－2328-03

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｉｎｃ in Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｔｕｒｔｌｅｓ ｗｉｔｈ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｔｈｏｄ

ＨＵＡＮＧ Ｇｕｏ－ｘｉａ１，ＣＨＥＮ Ｔｉｅ－ｙｉｎｇ２，ＬＩ Ｊｕｎ－ｓｈｅｎｇ１，ＸＩＥ Ｚｈｉ－ｙａｎｇ３，ＬＩＡＯ Ｙｏｎｇ－ｃｏｎｇ３

（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉｕｚｈｏｕ ５４５００６， Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ；

２．Ｌｉｕｚｈｏｕ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌｉｕｚｈｏｕ 5４５００１，Ｇｕａｎｇｘｉ， Ｃｈｉｎａ；

３．Ｇｕａｎｇｘｉ Ｇｕｉｇａｎｇ Ｆｉｓｈｅｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｇｕｉｇａｎｇ ５３７１００， Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｗｅａｋ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｅａｋ ｅｍｅｒｇｅｄ ａｔ ４６３ ｎｍ ｉｎ ＳｕｄａｎⅡｓｏｌｕｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ ｗａｖｅ ｌｅｎｇｔｈ （Ｅｘ） ｗａｓ ２３０ ｎｍ． Ｔｏ ｔｈｅ ｓｙｓｔｅｍ， Ｚｎ２＋ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．９０８ ４～４５．４２ μｇ／ｍＬ ｗａｓ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ ０．５９７ ４μｇ／ｍＬ． Ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ ΔＦ＝１５．９７Ｃ－４．９５８，r＝０．９９７ ６． Ｔｈｉｓ ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｚｉｎｃ ｉｎ ｔｕｒｔｌｅ’s ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ； ｔｕｒｔｌｅ； ｚｉｎｃ

鋅是人體必需微量元素的一種，能促進(jìn)機(jī)體的性發(fā)育、性功能、生殖細(xì)胞的生成［１］；鋅還與促進(jìn)大腦發(fā)育有關(guān)［２］，缺鋅可致早期孕婦味覺(jué)及嗅覺(jué)異常，造成妊娠劇吐，導(dǎo)致胎兒生長(zhǎng)發(fā)育停頓、早產(chǎn)等；另外還有促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖和活動(dòng)能力的作用，對(duì)維持上皮和黏膜組織正常、防御細(xì)菌、病毒侵入、促進(jìn)傷口愈合、減少痤瘡等皮膚病變等發(fā)揮作用［３］。目前鋅離子含量測(cè)定主要有原子吸收光度法［４，５］、原子熒光光譜法［６］、分光光度法［７，８］、電化學(xué)法等［９，１０］。

廣西黃沙鱉（Ｔｒｉｏｎｙｘ ｓｔｅｉｎｄａｃｈｎｅｒｉ）屬于中華鱉西南品系黃沙鱉，為廣西地區(qū)特有品種，是藥食同源的滋補(bǔ)佳品［１１］。近年來(lái)黃沙鱉的仿生養(yǎng)殖取得了重要成果，但是對(duì)于黃沙鱉中營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的具體評(píng)價(jià)體系尚少見(jiàn)報(bào)道，試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定黃沙鱉中鋅的含量，并與中華鱉相比較，旨在進(jìn)一步構(gòu)建黃沙鱉營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)體系以及加大人們對(duì)黃沙鱉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的認(rèn)識(shí)。

１材料與方法

１．１儀器與試劑

５３０１ＰＣ熒光分光光度計(jì)（日本島津公司）；ＡＬ１０４電子分析天平（梅特勒－托利多）；ＨＨ－８電子恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司）；消化爐（上海洪紀(jì)儀器設(shè)備有限公司）；ｉＣＥ３５００原子吸收分光光度計(jì)（美國(guó)熱電公司）。

８ μｇ／ｍＬ蘇丹Ⅱ溶液，４５４．２２０ μｇ／ｍＬ ＺｎＳＯ４標(biāo)準(zhǔn)溶液，０．０３３ ３ ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＨＰＯ３－ＫＨ２ＰＯ３緩沖液。中華鱉、野生黃沙鱉、養(yǎng)殖黃沙鱉均由廣西貴港市水產(chǎn)技術(shù)推廣站提供；所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為去離子水。

１．２試驗(yàn)方法

在１０ ｍＬ具塞比色管中，依次加入１ ｍＬ Ｎａ２ＨＰＯ３－ＫＨ２ＰＯ３緩沖液（ｐＨ值５．４），１．５ ｍＬ ８ μｇ／ｍＬ蘇丹Ⅱ及適量ＺｎＳＯ４，用去離子水定容至５ ｍＬ， 搖勻，于７０ ℃放置１５ ｍｉｎ，固定激發(fā)波長(zhǎng)Ｅｘ＝２３０ ｎｍ，掃描發(fā)射光譜，記錄４６３ ｎｍ處的熒光強(qiáng)度Ｆ和試劑空白值Ｆ０，計(jì)算ΔＦ＝Ｆ－Ｆ０。

２結(jié)果與分析

２．１蘇丹Ⅱ－Ｚｎ２＋體系的熒光光譜

固定激發(fā)波長(zhǎng)，掃描發(fā)射波長(zhǎng)獲得熒光光譜。當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為２３０ ｎｍ時(shí)，蘇丹Ⅱ－Ｚｎ２＋體系在４６３ ｎｍ處呈現(xiàn)一微弱的熒光峰，且該處的峰值隨著Ｚｎ２＋濃度的增加而線性增加（圖１），據(jù)此可以測(cè)定Ｚｎ２＋含量。

２．２試驗(yàn)條件的優(yōu)化

２．２．１ｐＨ值影響在蘇丹Ⅱ濃度2.4 μｇ／ｍＬ，Zn2+濃度27.250 μｇ／ｍＬ條件下，考察了體系緩沖液ｐＨ值（５．５～８．３）對(duì)ΔＦ的影響，其結(jié)果見(jiàn)圖２，當(dāng)ｐＨ值為６．４時(shí)ΔＦ值最大。另外還考察了緩沖液體積的影響，結(jié)果表明，在０．２～２．５ ｍＬ范圍，當(dāng)緩沖液體積為１ ｍＬ時(shí)，ΔＦ值較大。故選擇ｐＨ值為６．４的緩沖液１ ｍＬ。

２．２．２蘇丹Ⅱ用量影響如圖３所示，在Zn2+濃度27.250 μｇ／ｍＬ，pH值6.4時(shí)，蘇丹Ⅱ用量對(duì)體系有一定的影響，在０．８～４．０ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)體系的ΔＦ值呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)，當(dāng)其濃度為２．４ μｇ／ｍＬ時(shí)，體系的ΔＦ值最大，故選擇蘇丹Ⅱ濃度為２．４ μｇ／ｍＬ。

２．２．３溫度的影響在蘇丹Ⅱ濃度2.4 μｇ／ｍＬ，Zn2+濃度27.250 μｇ／ｍＬ，pH值6.4時(shí)，溫度對(duì)體系的影響見(jiàn)圖４，結(jié)果表明在３０～７０ ℃范圍內(nèi)ΔＦ值相對(duì)較大，而在６０ ℃時(shí)ΔＦ值最大，表明３０～７０ ℃范圍比較適合本體系進(jìn)行反應(yīng)，而在６０ ℃時(shí)效果最佳。故選擇反應(yīng)溫度為６０ ℃。

２．２．４體系穩(wěn)定性在蘇丹Ⅱ濃度2.4 μｇ／ｍＬ，Zn2+濃度27.250 μｇ／ｍＬ，pH值6.4時(shí)，考察了體系的穩(wěn)定性，配制好樣品后于不同時(shí)間對(duì)Ｆ值進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)測(cè)試劑空白，其結(jié)果見(jiàn)圖５，由圖５可知，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間在３０ ｍｉｎ以內(nèi)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，ΔＦ值呈上升趨勢(shì)，此后９０ ｍｉｎ內(nèi)基本保持不變。故選擇在３０ ｍｉｎ時(shí)測(cè)定ΔＦ值。

２．３共存離子對(duì)體系ΔＦ值的影響

按照試驗(yàn)方法，考察了共存物質(zhì)對(duì)體系的影響。當(dāng)Ｚｎ２＋濃度為２７．２５0 μｇ／ｍＬ時(shí)，相對(duì)誤差在

±１０％之內(nèi)，８０倍的Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋，１００倍的維生素Ｃ、煙酸、核黃素等對(duì)測(cè)定的干擾不大，故該法選擇性較好。

２．４標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在所選擇的條件下，按照試驗(yàn)方法測(cè)得不同Ｚｎ２＋濃度的ΔＦ值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在０．９０８～４５．４２２ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)，ΔＦ值與Ｚｎ２＋濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其回歸方程為ΔＦ＝１５．９７０Ｃ－４．９５８，相關(guān)系數(shù)ｒ?yàn)椋埃梗梗?６，檢測(cè)限為０．５９７ ４ μｇ／ｍＬ。

２．５樣品處理及測(cè)定

稱取鱉不同組織樣品各５．０ ｇ，置烘箱中于８０ ℃干燥２４ ｈ，粉碎，轉(zhuǎn)至坩堝中，于電爐上加熱碳化后轉(zhuǎn)至馬弗爐中５００～６００ ℃灼燒２～３ ｈ，待樣品灰化完全時(shí)取出，加入１０ ｍL ５ ｍｏｌ／Ｌ硫酸，浸泡過(guò)夜，次日過(guò)濾，定容至１０ ｍＬ，同時(shí)做空白對(duì)照。各樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表１，由表１可知，鋅在不同組織中含量差異較大，各組織鋅含量由大到小為肌肉＞肝臟＞裙邊；同種組織不同品種間也存在差異，肌肉中鋅含量順序?yàn)轲B(yǎng)殖黃沙鱉＞養(yǎng)殖中華鱉＞野生黃沙鱉；肝臟中鋅含量順序?yàn)橐吧S沙鱉＞養(yǎng)殖中華鱉＞養(yǎng)殖黃沙鱉；而裙邊中鋅的含量各品種間差異不大。造成以上差異的原因可能和鱉的生活環(huán)境、飲食習(xí)慣、生活習(xí)性等有關(guān)。

２．６方法比較

試驗(yàn)同時(shí)用原子吸收法對(duì)樣品中鋅含量進(jìn)行了測(cè)定，并與熒光光譜法進(jìn)行了比較。原子吸收法的樣品處理如下：稱取５．０ ｇ樣品于消化管中，加入１０ ｍＬ濃硝酸和２．５ ｍＬ高氯酸，置于消化爐中加熱至黃煙冒盡，溶液呈淡黃色時(shí)停止加熱并取下消化管，冷卻后加水定容至１０ ｍＬ，同時(shí)做試劑空白，待測(cè)。兩方法的比較結(jié)果見(jiàn)表２。由表２可知，本法與原子吸收法的結(jié)果相差不大，說(shuō)明本法可靠性強(qiáng)。

３小結(jié)

在ｐＨ值 ６．４的Ｎａ２ＨＰＯ３－ＫＨ２ＰＯ３緩沖體系中，當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為２３０ ｎｍ時(shí)，蘇丹Ⅱ溶液在４６３ ｎｍ處有一弱的熒光峰，隨著Ｚｎ２＋的加入，該處的峰值線性增加，由此建立了測(cè)定微量元素Ｚｎ２＋的熒光光譜新方法。本法線性范圍寬，檢測(cè)限為０．５９７ ４ μｇ／ｍＬ的Ｚｎ２＋，抗干擾能力也比較強(qiáng)，８０倍的Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋，１００倍的維生素Ｃ、煙酸、核黃素等對(duì)測(cè)定的干擾均不大。該法用于黃沙鱉和中華鱉不同組織中鋅的含量測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同組織中含量差異較大，其中肌肉中鋅含量最多，肝臟次之，裙邊中含量最少，僅為肌肉中的１／３。不同品種鱉的同種組織中鋅元素含量也存在一定差異。

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注：本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請(qǐng)以PDF格式閱讀原文