袋花忍冬總黃酮的提取工藝優(yōu)化

摘要：采用Ｌ９（３４）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以袋花忍冬總黃酮含量為考察指標(biāo)，考察了乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、乙醇用量、提取次數(shù)４個(gè)因素對提取量的影響。結(jié)果表明，袋花忍冬最佳提取工藝為１０倍量７０％乙醇提取兩次，提取時(shí)間１ ｈ。該工藝經(jīng)重現(xiàn)性好，對進(jìn)一步的工藝開發(fā)有較好的參考價(jià)值。

關(guān)鍵詞：袋花忍冬；總黃酮；正交試驗(yàn)；提取工藝

中圖分類號(hào)：Ｒ２８４．２文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０11）08－1669-02

Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｌｏｎｉｃｅｒａ sａｃｃａｔａ

ＤＡＩ Ｘｉａｎ－ｐｉｎｇ

（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｂｉｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｙａｎｔａｉ ２６４００３， Ｓｈａｎｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｓａｃｃａｔａ Ｒｅｈｄ． ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ Ｌ９（３４）． Ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｒｅｆｌｕｘ ｄｕｒａｔｉｏｎ， ｅｔｈａｎｏｌ ｑｕａｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ． Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ １０－ｆｏｌｄ ７０％ ｅｔｈａｎｏｌ， １ ｈ ｏｆ ｒｅｆｌｕｘ， ａｎｄ ２ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ． Ｔｈｉｓ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｓｔａｂｌｅ， ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｎｄ ｗｏｒｔｈｙ ａ ｔｒｉａｌ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｓａｃｃａｔａ Ｒｅｈｄ.； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

袋花忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｓａｃｃａｔａ Ｒｅｈｄ.）為忍冬科忍冬屬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ Ｌｉｎｎ）植物，落葉灌木，廣泛分布于我國陜西、甘肅、青海、四川、重慶、貴州、云南及西藏等地［１］。其主要活性成分為黃酮類化合物［２，３］，具有抑菌、抗病毒、消炎、降低血壓、抗癌、調(diào)節(jié)免疫等作用［４，５］。長期以來對袋花忍冬黃酮類化合物的提取研究甚少，而采用正交試驗(yàn)對袋花忍冬進(jìn)行黃酮類化合物提取的研究尚未見報(bào)道。因此通過對袋花忍冬總黃酮成分提取工藝的研究，旨在為進(jìn)一步合理開發(fā)袋花忍冬提供參考依據(jù)。

１材料與方法

１．１材料

袋花忍冬采自重慶奉節(jié)縣，由濱洲醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院天然藥物化學(xué)研究室鑒定為忍冬科忍冬屬植物袋花忍冬的干燥全草，蘆丁對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，其他試劑均為分析純。

ＴＵ－１９０１雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），ＲＥ－２０００Ａ旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），ＡＬ１０４電子天平（梅特勒－ 托利多儀器有限公司），Ｂ－２２０型恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠），ＤＺＦ２６０２１型真空干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

１．２方法

１．２．１提取溶劑的選擇

１）水提取法。精密稱取袋花忍冬５ ｇ，加水５０ ｍＬ浸泡３０ ｍｉｎ后，在水浴中加熱回流提取１ ｈ，趁熱過濾，共提取２次，合并濾液至２００ ｍＬ容量瓶中，藥渣用水洗滌２～３次，一并納入濾液，冷卻后用水定容，搖勻，待用。

２）乙醇提取法。精密稱取袋花忍冬５ ｇ，加乙醇５０ ｍＬ浸泡３０ ｍｉｎ后，水浴回流１ ｈ，趁熱過濾，共提取２次，合并濾液至２００ ｍＬ容量瓶中，藥渣用乙醇洗滌２～３次，一并納入濾液，冷卻后乙醇定容，搖勻，待用。

１．２．２正交試驗(yàn)選用乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、乙醇用量及提取次數(shù)４個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)３個(gè)水平，以袋花忍冬中總黃酮提取量為考察指標(biāo)，按Ｌ９（３４）正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，因素與水平設(shè)計(jì)見表１。

１．２．３總黃酮含量測定

１）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密稱取在１２０℃干燥至恒重的蘆丁對照品５０ ｍｇ，置５０ ｍＬ容量瓶中，加乙醇約３０ ｍＬ，置水浴中微熱使溶解，冷卻后加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取１０ ｍＬ，置１００ ｍＬ容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每毫升含蘆丁對照品０．１ ｍｇ） 。精密量取對照品溶液０、１．００、２．００、３．００、４．００、５．００ ｍＬ，分別放入１０ ｍＬ容量瓶中，各加水至５ ｍＬ，精密加５％亞硝酸鈉試液０．３ ｍＬ，搖勻，放置６ ｍｉｎ，加１０％硝酸鋁試液０．３ ｍＬ，搖勻，放置６ ｍｉｎ，加４％氫氧化鈉試液２．０ ｍＬ，再加水至刻度，搖勻，放置１５ ｍｉｎ。按照分光光度法［６］，在５１２ ｎｍ波長處測定吸光度，以吸光度（Ａ）為縱坐標(biāo)，濃度（Ｃ）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Ａ ＝０．０６５ ４Ｃ＋０．００２ ３，ｒ＝０．９９９ ８，線性范圍為９．３２７～５０．２３６ ｍｇ／Ｌ。

２）樣品液總黃酮含量測定。精密量取樣品液２ ｍＬ，置１０ ｍＬ容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法進(jìn)行操作，測定吸光度，由回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量。

２結(jié)果與分析

２．１提取溶劑的選擇

由表２結(jié)果可見，乙醇提取法優(yōu)于水提取法。用水作溶劑提取總黃酮雖然存在生產(chǎn)成本低，無溶劑殘留的優(yōu)點(diǎn)，但提取率較低，且提取液存放易腐敗變質(zhì)，后續(xù)的過濾、濃縮等操作困難且費(fèi)時(shí)等。因此選擇乙醇作為提取溶劑。

２．２正交試驗(yàn)結(jié)果分析

以袋花忍冬中總黃酮含量為考核指標(biāo)，正交試驗(yàn)結(jié)果見表３。由表３可知，影響袋花忍冬總黃酮提取量的主次因素依次為乙醇體積分?jǐn)?shù)＞提取次數(shù)＞乙醇用量＞提取時(shí)間，提取的最佳方案為Ａ２Ｂ１Ｃ２Ｄ２，即１０倍量７０％乙醇提取兩次，提取時(shí)間１ ｈ。方差結(jié)果表明，乙醇體積分?jǐn)?shù)對總黃酮提取量有顯著性影響（Ｐ＜０．０５）。

２．３提取工藝的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

為進(jìn)一步考察上述最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性，按該工藝條件進(jìn)行３次重復(fù)性試驗(yàn)，分別測定袋花忍冬總黃酮的含量，結(jié)果分別為４．３５、４．２６、４．２９ ｍｇ／ｇ。測定的結(jié)果較優(yōu)，且重現(xiàn)性好，說明該工藝穩(wěn)定可行。

３結(jié)論

袋花忍冬總黃酮是袋花忍冬的主要成分，經(jīng)正交試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)影響袋花忍冬總黃酮提取量的主次因素依次為乙醇體積分?jǐn)?shù)＞提取次數(shù)＞乙醇用量＞提取時(shí)間，提取的最佳方案為１０倍量７０％乙醇提取兩次， 提取時(shí)間１ ｈ。按此方案提取，所得總黃酮含量最高，而且工藝簡單、操作控制容易、穩(wěn)定性好，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì)． 中國植物志［Ｍ］． 北京： 科學(xué)出版社，１９８８．

［２］ 胡潤淮，袁珂，孫德梅． 忍冬葉中綠原酸和總黃酮分離工藝的研究［Ｊ］． 河南科學(xué)，１９９９，１２ （４）：３８２－３８４．

［３］ 顏承云，谷繼偉． 忍冬果實(shí)黃酮類成分總含量的動(dòng)態(tài)分析［Ｊ］． 中國野生植物資源，２００４，２３（２）：５１－５２．

［４］ ＫＡＫＵＤＡ Ｒ， ＩＭＡＩ Ｍ， ＹＡＯＩＴＡ Ｙ． Ｓｅｃｏｉｒｉｄｏｉｄ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｆｌｏｗｅｒ ｂｕｄｓ ｏｆ Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ［Ｊ］ ． Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，５５（８）：８７９－８８１．

［５］ ＫＵＭＡＲ Ｓ， ＳＡＴＩ Ｏ Ｐ， ＳＥＭＷＡＬ Ｖ Ｄ，ｅｔ ａｌ． Ｉｒｉｄｏｉｄ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｑｕｉｎｑｕｅｌｏｃｕｌａｒｉｓ［Ｊ］． Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，５３（４）：４９９－５０１．

［６］ 國家藥典委員會(huì)． 中國藥典（一部）［M］． 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社，２００５．