密花香薷中總黃酮的含量測定及提取工藝

摘要：通過分光光度法測定不同地區(qū)密花香薷中總黃酮的含量，采用正交試驗優(yōu)化提取密花香薷中總黃酮的提取工藝。結果表明，密花香薷中總黃酮的最佳提取工藝為于８０℃，加入３０倍量６０％乙醇回流提取２ ｈ；密花香薷中總黃酮提取含量為１３．７２％。總黃酮正交提取工藝結果可靠，含量測定方法簡便準確，適合于工業(yè)化生產。

關鍵詞：密花香薷；總黃酮；正交試驗；含量測定

中圖分類號：Ｒ２８４.２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）08－1666-03

Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ ａｎｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ ｄｅｎｓａ

ＢＡＯ Ｊｉｎ－ｙｕａｎ，ＬＩ Ｊｕｎ－ｑｉａｏ，ＺＨＡＮＧ Ｌｕ－ｌｕ

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ and Life Science， Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ， Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００７，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ ｄｅｎｓａ Ｂｅｎｔｈ． ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ； ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ６０％ ｅｔｈａｎｏｌ ａｔ ８０℃， ｔｈｉｒｔｙ－ｆｏｌｄ ｓｏｌｖｅｎｔ， ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｆｏｒ ２ ｈ； ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｒａｔｉｏ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ １３．７２％ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｉｓ ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｗａｙ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｗａｓ ｔｒｕｓｔｗｏｒｔｈｙ； ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃａｂｌｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ ｄｅｎｓａ Ｂｅｎｔｈ.； tｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； oｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｈ； dｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

密花香薷（Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ ｄｅｎｓａ Ｂｅｎｔｈ．）為唇形科（Ｌａｂｉａｔａｅ）香薷屬（Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ）植物，一年生草本植物，別稱咳嗽草、野紫蘇、臭香茹、蟋蟀巴，主要分布在河北、山西、陜西、甘肅、青海、四川、云南、西藏、新疆等地，生于林緣、高山、草甸、林下、河邊及山坡荒地，海拔２ ８００～４ １００ ｍ的范圍內［１］。其作為正品香薷的代用品［２］，全草入藥，具有治療夏季感冒、發(fā)熱無汗、中暑急性胃炎、胸悶、口臭、小便不利之功效［３］，藏醫(yī)用全草治培根病、胃病、梅毒性鼻炎、喉炎及寄生蟲病，并外用治膿瘡及皮膚病［４］。目前關于密花香薷總黃酮的研究基本未見報道，近年來對黃酮類化合物的藥理作用研究較多，發(fā)現其具有抗心腦血管病、抗氧化、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、免疫調節(jié)等作用［５］。為了研究密花香薷中總黃酮的功效，開發(fā)并保護密花香薷植物資源，我們對其總黃酮的提取工藝進行了研究，并測定了不同地區(qū)密花香薷中總黃酮的含量，為其進一步開發(fā)利用提供了科學依據。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１密花香薷密花香薷全草，分別采自青海湟源、海北、海東３個地區(qū)并經青海大學韋梅琴副教授鑒定，晾干后將全草用粉碎機粉碎，過６０目篩備用。提取工藝選取湟源地區(qū)的密花香薷粉末進行試驗。

１．１．２試劑無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等試劑皆為分析純。

１．１．３儀器７２２型分光光度計（上海欣茂儀器有限公司）；ＨＨ－４數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；ＭＥ２３５３型電子天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；蘆丁標準品（國藥集團化學試劑有限公司，批號：Ｆ２００９１２０４）。

１．２密花香薷中總黃酮的測定

１．２．１標準溶液的配制精密稱取烘干至恒重的蘆丁標準品１９ ｍｇ，用６０％乙醇溶液溶解定容至５０ ｍＬ容量瓶中，搖勻，即得濃度為０．３８ ｍｇ／ｍＬ 的蘆丁標準溶液。

１．２．２標準曲線的繪制分別移取上述蘆丁標準液０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．０、４．０、４．５、５．０ ｍＬ至１０個５０ ｍＬ容量瓶中，再依次加入６０％乙醇４．５、４．０、３．５、３．０、２．５、２．０、１．５、１．０、０．５、０ｍＬ，加入５０ ｇ／Ｌ亞硝酸鈉溶液１．５ ｍＬ，搖勻，靜置６ ｍｉｎ；再加入１００ ｇ／Ｌ硝酸鋁溶液１．５ ｍＬ，搖勻，靜置６ ｍｉｎ；再加４０ ｇ／Ｌ氫氧化鈉溶液２０ ｍＬ，用６０％乙醇稀釋至刻度，搖勻。１０ ｍｉｎ后以６０％乙醇調零，在５１０ ｎｍ處測定吸光度。以吸光度（Ａ）為縱坐標，蘆丁濃度（Ｃ）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：＝１．２０４ ８Ｃ－０．００５ ７，ｒ＝０．９９９ ６。在０．０３８～０．３８ ｍｇ／ｍＬ范圍內線性關系良好。

１．２．３精密度試驗精密吸取蘆丁標準品溶液４ ｍＬ，置于５０ ｍＬ容量瓶中，按１．２．２項操作，６０％乙醇調零，５１０ ｎｍ處測定吸光度，６次重復，ＣＶ＝１．６８％，表明儀器精密度良好。

１．２．３穩(wěn)定性試驗將同一待測密花香薷提取液按１．２．２項操作，分別于０、０．５、１．０、１．５、２．０ ｈ后測定吸光度，ＣＶ＝１．４１％，表明各供試品溶液在２．０ ｈ內能夠保持穩(wěn)定。

１．２．４重復性試驗將同一批密花香薷粉末，按１．２．２項操作，測定吸光度，重復６次，結果CV＝２．１４％，表明該測定方法重復性良好。

１．２．５回收率試驗精密稱取已知含量的密花香薷粉末５份，分別加入精密稱定的蘆丁標準品適量，按１．２．２項操作，測定吸光度，計算回收率，結果平均回收率為１０１．９６％，ＣＶ＝２．４１％，表明該方法準確可靠。

１．２．６密花香薷中總黃酮的含量測定精密稱取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圓底燒瓶中，以不同的條件進行提取。定容后以蘆丁為標樣，按１．２．２項操作，６０％乙醇調零，于５１０ ｎｍ處測吸光度，根據回歸方程測定總黃酮含量，計算提取率。

總黃酮質量（mg）=總黃酮含量×溶液體積

總黃酮提取率（%）=（總黃酮質量/藥粉質量）×100

２結果與分析

２．１單因素試驗結果分析

２．１．１提取溫度對總黃酮提取率的影響精密稱取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圓底燒瓶中，加入６０％乙醇６０ ｍＬ，分別在不同的溫度（２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０℃）下水浴回流１ ｈ，提取１次。過濾提取液，定容后測定總黃酮的含量，計算提取率。結果見圖１。由圖１可知，隨著溫度的升高，提取率也隨之升高，當溫度達到８０℃時，提取率達到最大值，９０℃時，提取率反而下降。

２．１．２乙醇體積分數對總黃酮提取率的影響精密稱取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圓底燒瓶中，分別加入不同體積分數的乙醇（１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％）６０ ｍＬ，６０℃下水浴回流１ ｈ，提取１次。過濾提取液，定容后測定總黃酮的含量，計算提取率，結果見圖２。由圖２可以看出，乙醇體積分數達到６０％時總黃酮提取率最高，隨后則逐漸下降。

２．１．３提取時間對總黃酮提取率的影響精密稱取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圓底燒瓶中，加入６０％乙醇６０ ｍＬ，６０℃下水浴回流提取１次，提取時間分別為１、２、３、４、５ ｈ。過濾提取液，定容后測定總黃酮的含量，計算提取率，結果見圖３。由圖３可以看出，提取時間為２ ｈ時，提取率最高。再增加提取時間并不利于提取率的提高。

２．１．４料液比對總黃酮提取率的影響精密稱取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圓底燒瓶中，分別加入６０％乙醇１５、３０、４５、６０、７５、９０ ｍＬ，６０℃下水浴回流１ ｈ，提取１次。過濾提取液，定容后測定總黃酮的含量，計算提取率，結果見圖４。由圖４可以看出，料液比為１∶２５（W/V，g∶mL，下同）時提取率最高。

２．２正交試驗結果分析

以單因素試驗為基礎，對影響密花香薷中總黃酮提取率的因素：提取溫度、乙醇體積分數、提取時間、料液比進行Ｌ９（３４）正交試驗，因素與水平設計見表１，正交試驗結果見表２。由表２可知，４個因素對總黃酮提取率的影響大小依次為Ａ＞Ｂ＞Ｄ＞Ｃ，４個因素的最佳組合為６０％乙醇，料液比１∶３０，８０℃水浴回流２ ｈ，密花香薷中總黃酮的提取率可達１３．７２％。

２．３驗證試驗結果

根據以上所選擇的最佳提取工藝，提取３個地區(qū)的密花香薷，進行總黃酮的含量測定，結果見表４，結果表明該工藝條件下總黃酮的提取率比較穩(wěn)定。

３結論

通過單因素試驗和正交試驗結果，確定密花香薷中總黃酮的最佳提取工藝參數為提取溫度８０℃，乙醇體積分數６０％，料液比１∶３０，提取時間２ ｈ，此條件下提取率可達１３．７２％；乙醇具有選擇性好、滲透性強、浸出率高、毒性小等優(yōu)點，因此選取乙醇作為密花香薷總黃酮的提取溶劑；曾將回流提取與超聲提取和乙醇冷浸提取進行比較，結果發(fā)現回流提取比另兩種方法較完全徹底，因此選用回流提取作為提取方法。

參考文獻：

［１］ 中國科學院中國植物志編輯委員會．中國植物志（第６６卷）［Ｍ］．北京：科學出版社，１９７７．

［２］ 中國科學院西北高原生物研究所．藏藥志［Ｍ］．西寧：青海人民出版社，１９９１．１１．

［３］ 張繼，王振恒，姚 健，等．密花香薷揮發(fā)油成分的分析研究［Ｊ］．草業(yè)學報，２００５，１４（１）：１１２－１１６．

［４］ 青海省藏醫(yī)藥研究所，青海省藥品檢驗所．中國藏藥［Ｍ］．上海：上海科學技術出版社，１９９６．１０．

［５］ 蔡丹昭，劉華鋼，韋琦．番石榴葉總黃酮提取工藝研究［Ｊ］．時珍國醫(yī)國藥，２００９，２０（１）：４４－４５．