雛鴨感染鴨肝炎病毒后糖代謝酶活性的變化

摘要：用鴨肝炎病毒（ＤＨＶ）感染雛鴨，在感染后的第一、二、三、四和五天分別采集對照組和攻毒組肝、腎、肌肉和腦組織，測定各組織的糖代謝酶己糖激酶（ＨＫ）和蘋果酸脫氫酶（ＭＤＨ）的活性。結果表明攻毒組在人工感染ＤＨＶ后５ ｄ內，肝、腎和肌肉組織的ＨＫ和ＭＤＨ活性顯著低于對照組（Ｐ＜０．０５），而腦組織的 ＨＫ和ＭＤＨ活性與對照組相比差異不顯著。說明了鴨肝炎病毒對肝、腎和肌肉組織有損傷作用，影響了糖代謝酶的活性，從而導致了機體內糖代謝發生異常。

關鍵詞：鴨肝炎病毒；己糖激酶；蘋果酸脫氫酶

中圖分類號：Ｓ８５８．３２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）08－1644-03

Ｔｈｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｅｎｚｙｍｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ ａｆｔｅｒ Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｄｕｃｋ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ

ＬＵ Ｗｅｉ－ｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｊｉ－ｐｅｉ，ＣＨＥＮ Ｊｉａｎ－ｈｏｎｇ，ＬＩ Lｉａｎｇ－ｂｉｎ，ＺＨＵ Ｓｈａｏ－ｙｕｅ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｆｏｓｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｈａｉ ５２８２３１，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｌｉｖｅｒ， ｋｉｄｎｅｙ， ｍｕｓｃｌｅ ａｎｄ ｂｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｄａｙ １～５ ａｆｔｅｒ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｕｃｋ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＤＨＶ） ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｏｆ ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ（ＨＫ） ａｎｄ ｍａｌａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＭＤＨ）． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＨＫ ａｎｄ ＭＤＨ ｉｎ ｌｉｖｅｒ， ｋｉｄｎｅｙ ａｎｄ ｍｕｓｃｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ that ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）； ｗｈｉｌｅ ｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｂｒａｉｎ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｕｃｋ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｍｉｇｈｔ ｉｎｊｕｒｅ ｌｉｖｅｒ， ｋｉｄｎｅｙ ａｎｄ ｍｕｓｃｌｅ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓａｃｃｈａｒｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｅｎｚｙｍｅ， ａｎｄ ｒｅｓｕｌｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ａｂｎｏｒｍｉｔｙ ｏｆ ｓａｃｃｈａｒｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｄｕｃｋ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＤＨＶ）； ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ（ＨＫ）； ｍａｌａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＭＤＨ）

鴨病毒性肝炎（Ｄｕｃｋ ｖｉｒｕｓ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ＤＶＨ）是引起小鴨高度致死性，傳播迅速的高度接觸性傳染病。主要感染５周齡以內的雛鴨，以２周齡內雛鴨最易感，是危害養鴨業最為嚴重的疫病之一［１，２］。該病于１９４５年最先發生于美國長島，１９５０年用雞胚分離到病毒。此后在世界各國陸續報道了該病的流行［３］。１９５８年我國初次暴發該病，至今，該病在我國已多次暴發，造成巨大損失［４］。國內外對該病的研究主要是在病原學、流行病學、診斷和防治方面，而很少涉及此病的發病機制［５］。而對ＤＶＨ與糖代謝酶的關系，研究也比較少。糖類代謝是動物體內三大物質代謝之一，主要在肝臟進行。在正常情況下，糖是生物體主要的供能物質。因此，糖代謝的正常與否直接影響到動物機體的能量供應是否正常，從而影響動物機體的各項生理活動。影響糖代謝的酶有葡萄糖激酶、糖元合成酶、檸檬酸合成酶、己糖激酶（ＨＫ）、蘋果酸脫氫酶（ＭＤＨ）等。己糖激酶（ＨＫ）和蘋果酸脫氫酶（ＭＤＨ）是線粒體標志酶，是糖有氧分解的關鍵酶，其活性的高低在糖分解過程中起著重要作用［６，７］。本文旨在對雛鴨接種ＤＨＶ病毒后，比較攻毒組和對照組ＨＫ和ＭＤＨ活性的變化，進一步探討糖代謝酶與ＤＶＨ發生發展的關系，為ＤＶＨ的發病機理和進一步防控提供科學的依據。

１材料與方法

１．１試驗動物及分組

１００只１日齡健康雛鴨購自佛山科學技術學院科研禽場，飼養１周后，隨機分為對照組和試驗組，每組５０只，在佛山科學技術學院畜牧獸醫研究所的動物實驗室飼養。試驗組雛鴨經翼下肌肉注射ＤＨＶ攻毒株的稀釋液，０．２ ｍＬ／只，對照組按０．２ ｍＬ／只注射生理鹽水。

１．２鴨肝炎病毒毒株

由佛山科學技術學院禽病研究所提供，分離自廣東省部分地區患ＤＨＶ的病雛鴨，經雛鴨半數致死量試驗，確定攻毒株的半數致死量。

１．３組織的提取和處理

在攻毒后第一、二、三、四和五天，從試驗組及對照組各隨機取出５只小鴨，剖取肝、腦、腎和胸部肌肉組織，用組織搗碎機搗碎，生理鹽水配成重１０％（W/V）的勻漿液，-２６℃保存備檢。

１．４ＨＫ活性測定

采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒，測定方法按試劑盒的說明書進行。

１．５ＭＤＨ活性測定

采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒，測定方法按試劑盒的說明書進行。

１．６數據處理

測定結果以平均數和標準差（ｘ±ｓ）表示，用計算機統計軟件Ｅｘｃｅｌ對數據進行方差分析，確定差異顯著性。

２結果與分析

２．１雛鴨人工感染鴨肝炎病毒（ＤＨＶ）后的臨床癥狀和病理變化

雛鴨攻毒１ ｄ后，發病初表現為精神萎頓、廢食、眼半閉呈昏睡狀，以頭觸地，不久即出現神經癥狀，運動失調，身體倒向一側，兩腳痙攣踢動，死前頭向背部扭曲，呈角弓反張狀態，兩腳伸直向后張開呈特殊姿勢。剖檢試驗組的病變主要見于肝臟，表現腫大、質脆、色黯淡或發黃，表面有大小不等的出血點；膽囊腫脹，內充滿膽汁，膽汁呈褐色或淡綠色；脾有的腫脹呈斑駁狀；有的腎腫脹、灰暗色，血管充血。試驗組鴨只在攻毒后第二天開始出現上述癥狀，癥狀持續５ ｄ，對照組無上述癥狀。

２．２雛鴨感染ＤＨＶ后的發病和死亡情況

雛鴨在人工感染ＤＨＶ后１ ｄ，有１０只雛鴨出現鴨病毒性肝炎病征，８只雛鴨死亡；攻毒后２ ｄ，有７只雛鴨出現鴨病毒性肝炎病征，６只雛鴨死亡；攻毒后３ ｄ，有４只雛鴨出現鴨病毒性肝炎病征，３只雛鴨死亡；攻毒后４ ｄ，有２只雛鴨出現鴨病毒性肝炎病征，２只雛鴨死亡；攻毒后５ ｄ，有２只雛鴨出現鴨病毒性肝炎病征，１只雛鴨死亡；在人工感染ＤＨＶ后５ ｄ內，總共有２５只雛鴨出現ＤＨ臨床癥狀，但沒有死亡；另有２０只雛鴨出現ＤＨ臨床癥狀并死亡。

在抽取試驗組鴨解剖并提取組織時，若該天有雛鴨死亡且只數足夠５只，則全部采用死亡雛鴨用于試驗；若該天死亡雛鴨不足５只，則除采用死亡鴨外，在試驗組鴨中隨機抽取發病鴨補足５只用于試驗。對照組是隨機抽取５只用于對照試驗。

２．３雛鴨人工感染ＤＨＶ后各組織ＨＫ活性的變化

雛鴨感染ＤＨＶ后各組織ＨＫ活性的變化如表1所示。由表1可見，雛鴨在感染ＤＨＶ后，肝、肌肉、腎各組織的ＨＫ活性都發生明顯變化，肝組織ＨＫ活性極顯著低于對照組，肌肉和腎組織ＨＫ活性都顯著低于對照組；而腦組織ＨＫ活性則沒明顯的變化。說明雛鴨攻毒后，肝、肌肉、腎各組織都受到不同程度的損傷，導致其ＨＫ活性降低。

２．４雛鴨人工感染ＤＨＶ后各組織ＭＤＨ活性的變化

雛鴨感染ＤＨＶ后各組織ＭＤＨ活性的變化如表2所示。由表2可見，雛鴨在感染ＤＨＶ后，肝、肌肉、腎各組織的ＭＤＨ活性都發生明顯變化，肝組織ＭＤＨ活性極顯著低于對照組，肌肉和腎組織ＭＤＨ活性也隨著時間的增加由顯著低于對照組變為極顯著；而腦組織ＭＤＨ活性則沒明顯的變化。說明雛鴨攻毒后，肝、肌肉、腎各組織都受到不同程度的損傷，導致其ＭＤＨ活性降低。

３小結與討論

機體內糖類物質的主要代謝途徑包括葡萄糖的無氧酵解、有氧分解、磷酸戊糖途徑、糖原合成、糖原分解、糖異生以及其他己糖代謝過程等［８］。這些糖代謝過程絕大部分都要在肝臟中完成，肝臟是糖代謝的重要場所，許多糖代謝酶均在肝臟合成并通過肝臟發揮作用， 故肝功能好壞必將影響糖代謝正常與否［９］。在這些糖代謝過程中，有氧分解是一個非常重要的代謝，該代謝可為機體的各項生命活動提供ＡＴＰ，而ＨＫ和ＭＤＨ是有氧分解過程的重要代謝酶。ＨＫ是糖代謝的第一個關鍵酶，也是限速酶，ＨＫ和細胞膜上葡萄糖轉運在蛋白功能上相互偶聯，既決定了細胞內葡萄糖流量，也決定了葡萄糖的代謝過程［１０］。ＭＤＨ是生物組織有氧分解三梭酸循環中的最后一個氧化還原酶，線粒體基質中的ＭＤＨ可促進蘋果酸到草酰乙酸的轉化，而細胞質中的ＭＤＨ可將草酰乙酸還原為蘋果酸，穿梭基質和細胞質之間，維持著酶促反應的動態平衡，因此ＭＤＨ是線粒體基質的標志酶。

鴨肝炎病毒（ＤＨＶ）致病作用主要是侵害雛鴨的肝臟，引起急性壞死性肝炎的過程，出現肝功能障礙［１１］。當雛鴨被人工感染ＤＨＶ后，肝細胞受損發生病變，導致肝組織的一些酶類活性異常，己糖激酶、蘋果酸脫氫酶在肝臟中合成減慢，活性降低，糖分解也會受阻礙，影響葡萄糖的攝取和利用，肝糖原合成減少，糖異生增加，從而導致糖代謝發生異常。在正常情況下，糖是生物體主要的供能物質，體內能量的７０％來自糖的分解。當糖代謝異常時，動物機體所需的能量不足，機體的抵抗力下降，推動了病毒性肝炎的發生發展。

該試驗結果表明，感染ＤＨＶ的雛鴨，在ＤＨＶ的脅迫下，某些組織中如肝、肌肉、腎的ＨＫ和ＭＤＨ酶的活性顯著下降，特別是肝組織，ＨＫ和ＭＤＨ酶的活性都極顯著下降。這表明ＤＨＶ可以造成肝、肌肉、腎組織損傷，特別是肝臟損傷最嚴重，從而引起雛鴨糖代謝發生異常，體內其他物質的代謝也會發生混亂并引起雛鴨發生鴨病毒性肝炎。

參考文獻：

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