COX-2\\GLUT-1在乳腺癌中的表達及意義

摘 要 目的：探討過氧化酶-2(COX-2)、葡萄糖轉運蛋白-1(GLUT-1)在乳腺癌癌中的表達及意義。方法：采用免疫組織化學S-P法檢測36例乳腺癌，18例導管上皮重度不典型增生，12例導管上皮中度不典型增生，15例導管上皮輕度不典型增生組織中COX-2、GLUT-1的表達情況。結果：COX-2在輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生和乳腺癌組織中的陽性表達率分別為6.7%、25.0%、38.9%和77.8%。乳腺癌組分別與導管上皮輕度不典型增生、中度不典型增生及重度不典型增生組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。GLUT-1在導管上皮輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不不典型增生和乳腺癌組織中的陽性表達率分別為0、8.3%、44.4%和83.3%。乳腺腺癌組分別與輕度不典型增生、中度不典型增生及重度不典型增生組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。乳腺病變組織中COX-2與GLUT-1表達水平間呈正相關(r=0.559，P＜0.01)。結論：COX-2、GLUT-1在乳腺導管上皮輕度增生、中度增生、重度不典型增生及乳腺腺癌中的陽性表達率逐漸增高，說明COX-2及其靶基因GLUT-1可能在乳腺病變由良性到惡性轉變過程及惡性腫瘤的進展中起重要作用。COX-2能提高GLUT-1的表達。

關鍵詞 乳腺腫瘤 COX-2 GLUT-1 免疫組織化學

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2011.27.204

環(huán)氧化酶-2(COX-2)、葡萄糖轉運蛋白-1(GLUT-1)在乳腺腺癌中的表達及與血管形成的報道較少。本研究采用免疫組織化學方法檢測COX-2和GLUT-1在乳腺病變中的表達情況，并分析與乳腺腺癌分期、病理分級間的關系以及在乳腺病變發(fā)生發(fā)展中的作用。

資料與方法

一般資料：2009年12月～2010年12月收集病理科手術切除的乳腺腺癌存檔組織蠟塊36例，年齡35～65歲，平均46歲。其中高分化腺癌9例，中、低分化腺癌27例。手術病理分期(按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟FIGO2003年的標準)，Ⅰ期21例，Ⅱ期及以上15例。術后經(jīng)病理檢查均無腋窩淋巴結轉移。所有患者術前均未接受放療、化療或激光治療。另取同期存檔的重度不典型增生組織蠟塊18例，中度不典型增生組織蠟塊12例，輕度不典型增生組織蠟塊15例作為對照。

試劑與方法：兔抗人GLUT-1多克隆抗體(即用型)、DAB酶底物顯色劑均購自北京中杉生物有限公司；即用型S-P法(非生物素)檢測試劑盒、多聚L-賴氨酸防脫片及蓋玻片均購自北京中杉生物技術有限公司；兔抗人GLUT-1多克隆抗體(即用型)購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。免疫組化步驟按試劑盒說明進行。PBS代替一抗作陰性對照，陽性對照肝癌。

結果判定：①COX-2蛋白陽性表達主要定位于細胞漿或細胞核：根據(jù)陽性細胞所占比例及著色強度綜合制定免疫組化半定量記分標準為計算陽性細胞百分率的方法為先在低倍鏡下尋找最強著色區(qū)，然后選5個高倍視野(×200)，各數(shù)100個細胞。陽性細胞計分，＜1%，0分；1%～10%，1分；11%～50%，2分；51%～80%，3分；＞80%，4分。著色強度記分，弱1分；中2分；強3分。兩個分值相加為最終判定1分(-)；2～3分(+)；4～5分(++)；6～7分(+++)。②GLUT-1蛋白陽性主要定位于細胞膜：免疫組化結果判斷參照Takahashi等方法，以腫瘤細胞胞膜出現(xiàn)棕黃色細顆粒為陽性細胞，陽性細胞數(shù)＜10%為陰性(-)，陽性細胞數(shù)≥10%為陽性(+)。

統(tǒng)計學方法：所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。計數(shù)資料比較根據(jù)具體情況用X2檢驗、秩和檢驗或Fisher確切概率法。相關性用Spearman等級相關分析。

結 果

COX-2、GLUT-1在各組中的表達：COX-2、GLUT-1在輕度不典型增生、重度不典型增生、重度不典型增生和乳腺癌中的陽性表達率逐漸升高，在癌組織中的表達明顯高于其他三組。COX-2在輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生和癌組織中的陽性表達率分別為6.7%(1/15)、25.0%(3/12)、38.9%(7/18)和77.8%(28/36)，在輕度不典型增生與中度不典型增生之間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞005)；而重度不典型增生與乳腺癌比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。GLUT-1在輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生和癌組織中的陽性表達率分別為0、8.3%(1/12)、44.4%(8/18)和83.3%(30/36)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

COX-2、GLUT-1表達與乳腺癌臨床病理學特征的關系：COX-2在病理分級G1中的陽性表達率［444%(4/9)］低于G2期及以上的表達［88.9%(24/27)］；在手術病理分期Ⅰ期中的陽性表達率［76.2%(16/21)］低于在Ⅱ期及以上中的［80.0%(12/15)］，GLUT-1在G1中的陽性表達率為66.7%(6/9)，在G2及以上的陽性表達率為88.9%(24/27)；在Ⅰ期中的陽性表達率［81.0%(17/21)］低于Ⅱ期及以上中的［86.7%(13/15)］；COX-2和GLUT-1隨著病理分級、手術病理分期及浸潤深度的增加陽性表達率逐漸升高，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

COX-2、GLUT-1兩者相關性分析：經(jīng)Sperman等級相關分析發(fā)現(xiàn)，COX-2的表達與GLUT-1呈正相關(r=0.559，P＜0.01)，COX-2可能與GLUT-1基因上特定位點結合，促進GLUT-1轉錄，進而提高細胞代謝率。

討 論

COX-2是一個近年來發(fā)現(xiàn)和漸受重視的腫瘤學指標，腫瘤缺氧使COX-2的表達增加，過量的COX-2可激活多種靶基因的轉錄，以提高葡萄糖轉運、糖酵解及血管生成，使腫瘤適應這一缺氧環(huán)境而繼續(xù)增殖、浸潤和轉移等［1］。

本研究結果顯示，乳腺癌中COX-2的表達率為77.8%，與輕度不典型增生、中度不典型增生及重度不典型增生組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示細胞缺氧出現(xiàn)在癌變發(fā)生之前，并持續(xù)腫瘤發(fā)生的全過程。COX-2異常表達可能是癌變過程的早期行為，在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

GLUT-1屬單糖轉運蛋白質類，是哺乳動物細胞轉運葡萄糖的載體，廣泛存在人體各組織，對攝取葡萄糖并參與機體能量謝具有重要的調節(jié)作用。與正常組織相比，惡性腫瘤細胞對葡萄糖的代謝率增高，而糖代謝率的增高與GLUT-1的異常表達有關。本研究結果表明GLUT-1在乳腺導管上皮輕度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生及乳腺癌組織中的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明其在乳腺癌形成發(fā)展過程中起重要作用。Ashton-Saqer等［1］研究發(fā)現(xiàn)，GLUT-1在中度增生伴重度不典型增生組織和乳腺癌組織中陽性表達率分別為71%和90%，有望成為區(qū)分乳腺良惡性病變的標記物。本研究中良惡性乳腺病變GLUT-1的表達情況與Goldman等［2］的研究結論相一致，GLUT-1有望成為乳腺癌具有前景的腫瘤標記物。本研究還表明乳腺癌中COX-2和GLUT-1的表達呈正相關(r=0.559，P＜0.01)，28例COX-2陽性者中有27例GLUT-1陽性，COX-2和GLUT-1在腫瘤組織中表達的這種相關性進一步支持了GLUT-1受COX-2調節(jié)的學說，提示在腫瘤組織處于缺氧狀態(tài)時，COX-2對調節(jié)腫瘤組織參與糖代謝的相關蛋白基因表達有重要作用。

參考文獻

1 Ashton-Saqer A，Paulino AF，Afifv AM.GLUT-1 is preferentially expressed in atypical endometrial hyperplasia and endometrial adenocarcinoma［J］.Appl Immunohistochem Mol Morphol，2006，14(2):187-192.

2 Goldman NA，Katz EB，Glenn AS，et al.GLUT1 and GLUT8 in endometrium and endometrial adenocarcinoma［J］.Mod Pathol，2006，19(11):1429-1436.