乙型肝炎病毒核酸熒光定量及血清標志物與肝功能檢測的臨床意義

彭紅波，劉亞麗，陳旭姿（.廣州市番禺區(qū)何賢紀念醫(yī)院檢驗科 5400；.廣州市民政局精神病院老人區(qū) 5040；.廣西壯族自治區(qū)桂林市75660部隊門診部 5400）

在我國60%的人感染過乙型肝炎病毒（HBV），在現(xiàn)患慢性肝炎患者中約80%以上為慢性乙型肝炎患者，而受HBV慢性感染的人群患原發(fā)性肝癌（HCC）的相對危險性至少增加300倍。所以，對HBV的防治仍然是我國健康與傳染病控制中的首要問題。目前臨床多用HBV血清標志物和HBV DNA的定量檢測來反映HBV的復(fù)制情況，為判斷病情和評價抗病毒藥物療效提供依據(jù)［1］。本文對熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQPCR）檢測HBV DNA，與HBV血清標志物［乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗體（抗－HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗體（抗－HBe）、乙型肝炎病毒核心抗體（抗－HBc）］不同模式及肝功能檢測結(jié)果進行對比分析探討，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 296例 HBV感染者血液標本，來自本院2008年1～6月傳染科門診及住院患者以及無癥狀體檢者。

1.2 試劑與儀器 FQ－PCR檢測試劑盒為上海科華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。乙型肝炎血清標志物檢測試劑盒由英科新創(chuàng)公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒。儀器：BIOERminiOpticon基因擴增儀，MK3酶標分析儀，Beckman全自動生化分析儀。

1.3 方法 HBV血清標志物用ELISA法測定，按試劑盒說明操作，結(jié)果由酶標儀判定。肝功能用Beckman全自動生化分析儀測定。HBV DNA用FQ－PCR檢測。HBV DNA定量以1.00×103copy／mL為判定陽性的標準，＜1.00×103copy／mL判為陰性，＞1.00×103copy／mL判為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用PEMS3.1統(tǒng)計分析軟件處理。計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同血清學(xué)模式HBV DNA檢出結(jié)果 296例標本中，HBsAg陽性238例，HBeAg陽性99例，HBV DNA陽性179例。99例HBeAg陽性標本HBV DNA陽性，平均HBV DNA含量為1.21×107copy／mL，其 HBV DNA檢出率與 HBeAg陰性模式比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝94.759 7，P＜0.01）；HBsAg、HBeAg陽性標本中HBV DNA平均含量與HBsAg、抗HBe、抗－HBc陽性標本中HBV DNA平均含量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t＝27.941 9，P＜0.01）。238例 HBsAg陽性標本中HBV DNA檢出率與HBsAg陰性模式比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝86.622 3，P＜0.01）。HBsAg、抗－HBc陽性標本中HBV DNA平均含量與僅抗－HBc陽性標本中HBV DNA平均含量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t＝340.536 9，P＜0.01），見表1。

表1 不同HBV感染模式與HBV DNA定量結(jié)果比較

2.2 HBV DNA檢出率與肝功能關(guān)系 肝功能正常與異常患者血清標本均可檢出HBV DNA陽性，但兩組檢出率相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝112.015 2，P＜0.01），見表2。58例HBsAg陰性，且肝功能又正常的標本中檢出了4例HBV DNA陽性。

表2 肝功能與HBV DNA檢出率

3 討 論

研究表明，F(xiàn)Q－PCR測定的HBV DNA的陽性率和含量與HBV標志物的不同血清學(xué)模式和肝功能結(jié)果有關(guān)，但有時并不一致。過去，ELISA檢測HBV血清學(xué)標志物被廣泛地應(yīng)用于診斷HBV的感染狀況［2］。以往的經(jīng)驗以為，血清 HBeAg陽性是HBV復(fù)制活躍、傳染性強的標志，HBeAg的陰轉(zhuǎn)或抗－HBe出現(xiàn)表示HBV感染的緩解或HBV的清除［3］。本研究結(jié)果表明，HBeAg陽性患者血清中HBV DNA陽性率及含量顯著高于其他患者（P＜0.01）；但 HBeAg陰性時，抗－HBe陽性或陰性組也檢出了高水平的HBV DNA。HBeAg陽性組的HBV DNA水平顯著高于其陰性組，證實了HBeAg陽性是病毒在體內(nèi)高度復(fù)制的指標之一。本研究中HBsAg陰性組檢出了4例HBV DNA陽性，也可能是由于HBV新近感染或HBV隱性感染的恢復(fù)期。此種情況往往反映機體免疫力較強，有較好的轉(zhuǎn)歸。另外也說明，HBsAg與HBeAg陰性并不意味著病毒復(fù)制的停止，只能說明病毒復(fù)制水平極低。肝炎患者出現(xiàn)抗－HBs陽性，未必說明病情好轉(zhuǎn)或HBV已被清除。病毒在復(fù)制過程中，同時也表達包裝蛋白，這些異源蛋白激發(fā)機體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。因此，抗原抗體反映了病毒的表達水平，也間接反映了病毒復(fù)制水平。但是由于HBV的表達和機體免疫反應(yīng)的強弱受多種因素的影響［4］，因此免疫學(xué)指標在反映患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況時也有一定局限性。但免疫學(xué)指標與HBV DNA含量相結(jié)合，并結(jié)合臨床資料，將能很好地判斷HBV感染及其階段。

過去常以HBeAg的陰轉(zhuǎn)和肝功能恢復(fù)正常作為乙型肝炎臨床治療結(jié)束的標準［5］。本研究發(fā)現(xiàn)，雖然HBV DNA檢出率的高低與肝功能是否正常有關(guān)，但當肝功能正常時，HBV DNA的檢出率仍達23%，說明HBeAg的陰轉(zhuǎn)和肝功能恢復(fù)正常并不代表體內(nèi)病毒已清除，乙型肝炎已治愈。本研究結(jié)果表明，HBsAg陽性標本的HBV DNA陽性率及含量顯著高于HBsAg陰性標本（P＜0.01）。

綜上所述，在乙型肝炎的診斷方面，單純依靠HBV血清標志物的檢測結(jié)果來進行診斷和判斷病情是不夠的，應(yīng)結(jié)合HBV DNA的檢測和臨床來進行綜合分析，才能準確反映患者體內(nèi)HBV復(fù)制的真實情況，從而為臨床診斷和選擇更合理的治療方案提供可靠依據(jù)［6-7］。HBeAg的陰轉(zhuǎn)和肝功能恢復(fù)正常也不能代表HBV已經(jīng)清除［8］。又由于HBV的表達和機體免疫反應(yīng)的強弱受多種因素的影響，因此在反映患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況時有很大的局限性。FQ－PCR能快速、準確定量測定HBV DNA，HBV DNA能準確地反映HBV在體內(nèi)存在和復(fù)制情況。因此，F(xiàn)Q－PCR測定HBV DNA與HBV血清學(xué)標志物和肝功能檢查相結(jié)合，在乙型肝炎病情診斷和監(jiān)測治療效果及進預(yù)后判斷方面具有重要作用。

［1］童紅莉，田亞平，鄧心新.實時熒光定量PCR檢測乙型肝炎病毒DNA的臨床應(yīng)用［J］.軍醫(yī)進修學(xué)院學(xué)報，2005，26（5）：344－345.

［2］Kwok S，Hignchi R.Avoiding false positives with PCR［J］.Nature，1989，339（6221）：237－238.

［3］朱平.實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)開始用于臨床常規(guī)基因診斷［J］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2005，28（8）：778－778.

［4］吳曉蔓，郭海波，列海濤.HBV－DNA定量和定性聚合酶鏈反應(yīng)及其臨床實用性的探討［J］.臨床肝膽病雜志，2000，16（4）：226－227.

［5］肖艷群，陳慧英，張錦鋒，等.實時熒光定量PCR與PCRELISA在乙型肝炎病毒DNA定量檢測中的應(yīng)用比較［J］.檢驗醫(yī)學(xué)，2005，20（4）：319－320.

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