自制糖化血紅蛋白質控品及其性能評價

袁學進，李全雙，鄧演超（.江蘇省海安縣中醫院檢驗科 6600；.江蘇省徐州市醫學科學研究所 006）

目前臨床上測定糖化血紅蛋白（Hb Alc）的方法有很多，其中乳膠增強免疫比濁法可以在全自動生化分析儀上簡便、快速操作，準確性和精密度良好，受干擾因素少，與參考方法高效液相色譜法（HPLC）進行結果比對的相關性良好，能滿足臨床應用，該法已被很多醫院檢驗科使用［1-5］。但是由于不同生產廠家試劑質量不一，且開瓶后試劑的穩定性不一，因此可靠的檢驗結果必須有嚴格的室內質量控制作為基礎［6］。然而目前國內并未有統一的質控品生產銷售，而進口的質控品價格昂貴，不利于臨床工作的開展［7］。為了保證檢驗質量，降低運行成本，本實驗室自制溶血液作為Hb Alc室內質控品，對其性能進行評價。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器 試劑盒和定標液均購自浙江東甌診斷產品有限公司，生產批號201008004。HbA1c質控品購自Roche公司。儀器為HITACHI－7180全自動生化分析儀。

1.2 檢測方法 肝素抗凝標本1 000 r／min離心，吸取紅細胞層10μL與溶血液1 000μL按1∶100比例制備待測溶血液。檢測原理是用抗原抗體反應直接測定Hb Alc的百分含量。按照試劑盒說明書操作，多點定標曲線，由SPLINE處理，以測定管ΔA的變化值求得Hb Alc含量。

1.3 方法

1.3.1 低值、高值兩個水平溶血液的制備［8］

1.3.1.1 低值溶血液的制備 選 HbA1c在5.0%～6.0%的1份糖尿病患者肝素抗凝全血2 mL，無細菌污染，乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒陰性，無溶血、黃疸、脂濁，按試劑操作說明書比例制備測定用溶血液50 mL，充分溶解后，用一次性0.5 mL帶蓋塑料離心管分裝，每支約0.30 mL溶血液，標注批號為當天日期20110103，置－20℃存貯備用。

1.3.1.2 高值溶血液的制備 參照1.3.1.1制備方法，選HbA1c在9.0～10.0的1份糖尿病患者肝素抗凝血2 mL。

1.3.2 溶血液的使用方法 取出低值和高值兩個水平溶血液各1支放置37℃水浴中，溶解后輕輕搖動，然后和當天標本一起檢測，用后丟棄。

1.3.3 性能評價方法 測試均是在儀器維護保養后，質控品質控良好情況下測定HbA1c。

1.3.3.1 不精密度測定 批內不精密度測定：在1 d內，對兩個水平的溶血液連續測定20次，分別計算平均值（）、標準差（s）、變異系數（CV）。批內天間不精密度測定：對兩水平的溶血液每天各測定1次，連續測定20 d，分別計算、s、CV。

1.3.3.2 穩定性試驗 每個工作日測定溶血液1次，連續測定3個月，分別統計每個月的、s。

1.3.3.3 瓶間差異處理 隨機各取兩水平溶血液10支，每支檢測3次，分別計算、s、CV。

1.4 統計學分析 采用SPSS 13.0統計軟件包進行分析。多組比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

溶血液低值為5.73%±0.10%，高值為9.45%±0.15%，低、高值兩個標本批內不精密度分別是1.75%、1.59%，均小于2.5%。溶血液天間低值為 5.75%±0.25%，高值為9.47%±0.40%，天間批內不精密度分別是4.35%、4.22%，均小于5%，符合檢驗要求。－20℃保存穩定期可以達到3個月，每個月之間差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。溶血液瓶間低值為5.70%±0.09%，高值為9.47%±0.14%，瓶間變異系數較小，分別為1.58%和1.48%，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 溶血液保存3個月的穩定性分析（，%）

表1 溶血液保存3個月的穩定性分析（，%）

保存時間 低值 高值第1個月5.68±0.23 9.48±0.38第2個月 5.72±0.26 9.47±0.41第3個月5.70±0.24 9.51±0.39

3 討 論

Hb Alc是國際公認的糖尿病監控“金標準”，能反映糖尿病患者2～3個月內糖代謝狀況，不受飲食、抽血時間、胰島素使用等因素影響。目前，我國糖尿病的發病率逐年升高，HbA1c的檢測質量在糖尿病的診治中起著舉足輕重的作用，而我國Hb Alc檢測工作還處于起步階段［9］。有資料顯示，同一方法實驗室間的變異系數在10%甚至20%以上，距離國際上5%的標準還有很大的差距，使得Hb Alc作為糖尿病篩選、診斷、血糖控制、療效檢測及預防慢性并發癥的絕對指標大打折扣［10］。2007年上海地區第1次調查結果顯示臨床實驗室HbA1c的檢測，情況令人擔憂［11］。HbA1c的檢測質量對于糖尿病的管理有重要影響，故HbA1c的實驗室室內質量控制顯得尤為重要，而好的室內質控需要質優價廉的質控品。好的Hb Alc質控品應滿足：（1）消除質控品的基質效應問題選擇近似人血基質的樣本；（2）至少有正常和異常2個水平的濃度；（3）為消除瓶間差，盡量選擇液體質控品，也方便操作者使用；（4）質控品的穩定期要較長；（5）無傳染性［9］。

實驗室應用膠乳增強免疫比濁法測定Hb Alc時，須將標本紅細胞做預處理，即加溶血劑使紅細胞徹底溶解，制成要求比例的溶血液，再上機檢測。本文探討用臨床標本自制溶血液作為該法的室內質控品；評價低值和高值兩個水平溶血液的不精密度、穩定性及瓶間差異。低、高值兩個水批內不精密度分別是1.75%、1.59%，均小于2.5%，天間批內不精密度分別是4.35%、4.22%，均小于5%，符合檢驗要求［12］。－20 ℃保存穩定期可以達到3個月（P＞0.05）。同時本研究結果還顯示，瓶間變異系數較小，差異無統計學意義。自制兩個水平值的溶血液作為Hb Alc的室內質控品是可行的，能夠滿足實驗室的室內質控要求。另外，自制溶血液也可以應用于使用該檢測方法的實驗室室間現場質量監測。

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［11］居漪.糖化血紅蛋白檢測技術和質量控制［J］.檢驗醫學，2010，25（11）：914－917.

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