海口市流感嗜血桿菌感染流行病學(xué)與病原學(xué)特征分析*

林 翀，蘇應(yīng)仙，吳多榮，王旭明，吳至成，林明冠

(1.海南省農(nóng)墾總醫(yī)院檢驗(yàn)科,海口 570311；2.海南省海口市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 570208；3.海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 570102；4.海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,海口 570311)

流感嗜血桿菌(haemophilus influenza,Hi)除引起腦膜炎外，還常引起兒童中耳炎、會(huì)厭炎、蜂窩組織炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、心包炎、肺炎等疾病。其中b型流感嗜血桿菌(haemophilus influenzae type b,Hib)常引起腦膜炎和部分重癥肺炎[1-2]。Hi也是目前國內(nèi)兒童社區(qū)獲得性呼吸道感染最主要的病原菌之一，有24.7%～29.0%的急性下呼吸道感染由Hi感染所致[3]。近年的研究發(fā)現(xiàn)，Hi肺炎發(fā)生率明顯增加，約占社區(qū)獲得性肺炎的8%～20%[4]。目前，肺炎是中國兒童住院及死亡的首位病因。有報(bào)道Hi還引起成年人上呼吸道感染[4]。根據(jù)其莢膜有無分為2個(gè)類型，其中侵襲人體引起癥狀的多為莢膜型。Hi根據(jù)莢膜多糖抗原的不同可分為6個(gè)獨(dú)特的血清型，分別為a、b、c、d、e、f型。其中b型毒力最大，是兒童化膿性腦膜炎、肺炎、敗血癥、關(guān)節(jié)炎及蜂窩組織炎的主要致病菌，f型次之[5]。發(fā)病最高的年齡段為8～9個(gè)月，大于40%的病例小于1歲，60%～70%的病例發(fā)生在18個(gè)月之前，90%病例在5歲以前。在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國家，患者主要表現(xiàn)為腦膜炎，而在發(fā)展中國家以急性呼吸道感染尤其是肺炎為多見[6]。在Hib疫苗使用之前，美國Hib引起細(xì)菌性腦膜炎的發(fā)病率為47/10萬[7]，在澳大利亞和北美的土著居民中高達(dá)500/10萬～1 000/10萬[8]，而包括中國在內(nèi)的發(fā)展中國家相關(guān)報(bào)道很少。在過去的60多年，很多國家已廣泛開展了對(duì)Hib的研究。目前，國內(nèi)外對(duì)在Hi菌株分型方面所進(jìn)行的研究表明其有多型性和變異性的特點(diǎn)，國內(nèi)多采用生物學(xué)和血清學(xué)方法進(jìn)行分型，但因Hi的上述特點(diǎn)在分辨率上往往得不到滿意的結(jié)果，從而影響相關(guān)方面的研究。氯霉素和四環(huán)素是治療感染的主要抗菌藥物，但因越來越嚴(yán)重的耐藥性的產(chǎn)生以及藥品本身不良反應(yīng)的問題，目前臨床醫(yī)療上已很少使用。氨芐西林被廣泛應(yīng)用到感染性疾病的治療中，隨著氨芐西林長期廣泛的使用導(dǎo)致產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的耐氨芐西林菌株逐漸增多，耐藥程度也逐漸嚴(yán)重[9]。不同地區(qū)在使用抗菌藥物的品種、劑量和方法上的不同，導(dǎo)致細(xì)菌耐藥特征上的不同，耐藥情況在不同地區(qū)、不同時(shí)期也有較大差異。為了解海口市Hi感染的流行病學(xué)與病原學(xué)特征，本文對(duì)海口市各醫(yī)院臨床送檢的238例咽拭子、痰、腦脊液標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)鑒定，對(duì)分離的菌株進(jìn)行血清和生物學(xué)分型、β-內(nèi)酰胺酶和耐藥性檢測，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1標(biāo)本來源 收集海口市各醫(yī)院(海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、海南省人民醫(yī)院、海口市人民醫(yī)院、海南省農(nóng)墾醫(yī)院、海南省婦幼保健醫(yī)院、海南省婦幼保健醫(yī)院等)臨床送檢的咽拭子、痰、腦脊液標(biāo)本238例，其中男103例，女135例；年齡為6個(gè)月至72歲，其中小于或等于14歲者93例，14～30歲者35例，31～50歲者34例，大于或等于50歲者76例。

1.1.2試劑與儀器 流感嗜血桿菌專用巧克力培養(yǎng)基(HAE)、藥敏紙片，E-test試條，V+X、V、X因子診斷紙片，頭孢硝噻吩試劑，流感嗜血桿菌血清型鑒定試劑等均購自英國Oxoid公司。生物分型試劑(吲哚、脲酶和鳥氨酸脫羧酶3種細(xì)菌微量生化反應(yīng)管)等購于杭州微生物試劑有限公司。微生物鑒定儀有VITEK 2-compact型全自動(dòng)細(xì)菌分析系統(tǒng)(法國生物梅里埃公司產(chǎn)品)及美華微生物鑒定藥敏分析系統(tǒng)(MA120)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1Hi菌株分離、鑒定 從臨床送檢的鼻咽拭子、痰、腦脊液等標(biāo)本中分離Hi，培養(yǎng)基用嗜血桿菌專用巧克力培養(yǎng)基(HAE)，置5% CO2、37 ℃培養(yǎng)過夜，培養(yǎng)后挑取平皿上單個(gè)可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，形態(tài)符合者做金黃色葡萄球菌衛(wèi)星試驗(yàn)及Ⅴ、Ⅹ因子試驗(yàn)，結(jié)果完全符合者定為Hi，并用生化反應(yīng)進(jìn)行生物分型，購買流感嗜血桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC?49247ATCC?49766為質(zhì)控菌株。

1.2.2Hi臨床分離株的血清型鑒定 取上述分離獲得的Hi，用a、b、c、d、e、f型抗血清以玻片凝集法進(jìn)行血清分型，發(fā)生凝集反應(yīng)的為陽性。

1.2.3Hi臨床分離株的β-內(nèi)酰胺酶的檢測 β-內(nèi)酰胺酶測定采用頭孢硝噻吩紙片(Cefinase),實(shí)驗(yàn)步驟按說明書進(jìn)行。

1.2.4Hi臨床分離株的耐藥性檢測 用紙片擴(kuò)散法檢測Hi對(duì)常用抗菌藥物的敏感性，包括氨芐西林、氯霉素、四環(huán)素、復(fù)方新諾明、頭孢唑林、氧氟沙星、阿奇霉素等。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)。采用χ2檢驗(yàn)分析不同性別、年齡、標(biāo)本來源的Hi陽性率情況。上述假設(shè)檢驗(yàn)為雙側(cè)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1Hi分離情況 238例標(biāo)本中Hi的陽性率為26.1%(62/238)，其陽性率與標(biāo)本來源和年齡有關(guān)系(P<0.05)，而與性別不相關(guān)(P>0.05)，見表1。

表1 238例標(biāo)本中Hi的陽性率情況[n(%)]

2.2Hi分型結(jié)果 分離出的62株Hi中有45株(72.6%)為不可分型菌株，其余17株(27.4%)為可分型菌株。在可分型的17株菌株中，以d、e兩種血清型為主，分別為23.5%(4/17)和47.1%(8/17)，見表2。共檢出8個(gè)生物型，以Ⅱ、Ⅲ兩種生物型為主，分別占35.5%(22/62)和30.6%(19/62)，見表3。

表2 62株Hi的血清分型情況

-：表示無數(shù)據(jù)。

表3 62株Hi的生物分型情況

表4 Hi對(duì)常見7種抗菌藥物的耐藥情況[n(%)]

2.3Hi β-內(nèi)酰胺酶和耐藥性檢測 62株Hi對(duì)氨芐西林的耐藥率最高，而對(duì)頭孢唑林和氧氟沙星敏感，見表4。62株Hi的β-內(nèi)酰胺酶陽性率為16.1%(10/62)。

3 討 論

Hi是臨床上一種重要的條件致病菌，其呼吸道致病性已經(jīng)引起醫(yī)務(wù)人員的高度重視。研究表明，Hi已成為兒童呼吸道感染的重要致病菌之一[10]。本研究結(jié)果顯示，Hi在呼吸道感染的咽拭子標(biāo)本中檢出率較高，其陽性率為35.7%，說明咽拭子可以較好地檢測Hi的感染情況，同時(shí)不同年齡組中，以小于或等于14歲的陽性率(48.4%)最高，說明Hi感染常見于兒童。

本研究分離出的62株Hi中有45株為不可分型菌株，其余17株為可分型菌株。說明本地Hi感染無莢膜的不可分型株占重要地位，提示無莢膜Hi也是Hi感染的重要致病菌。國內(nèi)外研究表明Hi感染血清分型以Hib占多數(shù)，本研究結(jié)果以d、e兩種血清型為主，分別為23.5%和47.1%，而Hib沒有發(fā)現(xiàn)，說明Hib不是本地區(qū)目前侵襲性Hi感染的主要血清型。在前蘇聯(lián)和臺(tái)灣，以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ生物型占多數(shù)(80%～85%)[11]，而本研究中則以Ⅱ、Ⅲ兩種生物型為主，分別占35.5%和30.6%。造成這一差異的原因，除可能與地理分布有關(guān)外，很可能與菌株來源有關(guān)。作者在血清學(xué)分型中發(fā)現(xiàn)5個(gè)血清型，8個(gè)生物型；而Zheng和Lu[12]只發(fā)現(xiàn)2個(gè)血清型和4個(gè)生物型。這種差異很可能與作者所用菌株過少(18株)有關(guān)。因而，很有必要收集不同地區(qū)、不同來源的大量菌株做進(jìn)一步的研究。

隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，Hi的耐藥性狀況也越來越受到重視。氨芐西林作為治療Hi感染的常用藥物，在世界范圍內(nèi)其耐藥率也達(dá)到很高水平，2007年國內(nèi)7家綜合性醫(yī)院和2所兒童醫(yī)院的多中心監(jiān)測結(jié)果顯示該菌對(duì)氨芐西林的耐藥率也達(dá)到30.1%[13]。對(duì)于頭孢唑林和氧氟沙星，Hi則顯示高度敏感性；而非β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物，如四環(huán)素、氯霉素，由于不良反應(yīng)較大，目前臨床已很少應(yīng)用。因此，目前臨床用藥還應(yīng)以頭孢類藥物作為首選治療藥物。β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生是Hi耐藥的主要機(jī)制。據(jù)報(bào)道，美國Hi產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的比率為34.5%，法國為29.3%，英國為21.2%，中國香港為20.2%[14]。中國不同地區(qū)Hi的β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)酶率有較大差異，從3.2%～50.0%不等[15]。本資料檢出的62株Hi的β-內(nèi)酰胺酶陽性率為16.1%，介于其中。

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