新生兒缺氧缺血性腦病患兒T淋巴細胞亞群和D－二聚體及心肌酶水平的變化及意義

劉艷萍，覃紹鵬，黃獻文，金伶

新生兒缺氧缺血性腦病患兒T淋巴細胞亞群和D－二聚體及心肌酶水平的變化及意義

劉艷萍，覃紹鵬，黃獻文，金伶

目的探討新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)T淋巴細胞亞群、D－二聚體及心肌酶水平的變化及意義。方法選取2008年1月—2011年6月我院新生兒科足月HIE患兒65例為研究對象，分為輕度組24例、中度組21例、重度組20例，另隨機選擇同期、健康、足月新生兒30例作為對照組。檢測所有受檢新生兒T淋巴細胞亞群的百分率，血漿D－二聚體、α－羥丁酸脫氫酶(α－HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK－MB)水平，并進行相關性分析。結果4組外周血D－二聚體、α－HBDH、CK、CK－MB水平比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)。其中對照組與輕度組、中度組、重度組外周血D－二聚體、α－HBDH、CK、CK－MB水平比較，差異均有統計學意義(P＜0.05);輕度組與中度組、中度組與重度組、輕度組與重度組百分率、D－二聚體、α－HBDH、CK、CK－MB水平比較，差異均有統計學意義(P＜0.05);輕度組與中度組、重度組百分率比較，差異均有統計學意義(P＜0.05);輕度組、中度組與重度組比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)。Spearman相關分析，HIE患兒外周血與D－二聚體呈負相關(r=－0.46，P＜0.05);與CK－MB呈負相關(r=－0.89，P＜0.05);D－二聚體與CK－MB呈正相關(r=0.43，P＜0.05)。結論新生兒HIE的發生、發展是多因素參與的復雜過程，其中免疫、炎癥反應、血管內皮細胞損傷、凝血/纖溶系統等異常可能是同步發生，并相互關聯。

缺氧缺血，腦;T淋巴細胞;D－二聚體;心肌酶

新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic－ischemic encephalopathy，HIE)是指新生兒因圍生期腦血供和氣體交換障礙所致的一種全腦性損傷，嚴重者可導致新生兒死亡或不可逆性腦損害，如智力低下、腦性癱瘓、生長和發育落后、癲癇等［1］。缺氧缺血性腦損傷發生后，神經元通過分泌細胞因子來激活下丘腦－垂體－腎上腺軸和交感神經系統的活性，進而抑制免疫系統［2］;通過一系列級聯反應進一步激活凝血系統［3］，嚴重者會導致多器官系統的損害，如腦、心、腎、肺、胃腸等器官均有不同程度的損害［4］。基于此，本研究通過檢測HIE患兒外周血T淋巴細胞亞群、D－二聚體及心肌酶的水平，探討三者的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2008年1月—2011年6月我院新生兒科足月HIE患兒65例為研究對象，均符合中華醫學會兒科學分會新生兒學組2005年修訂的診斷標準［5］:(1)有明確可導致胎兒宮內窘迫的異常產科病史以及嚴重胎兒宮內窘迫表現〔胎心＜100次/min，持續5 min以上;和(或)羊水Ⅲ度污染〕，或分娩過程中有明顯窒息史;(2)出生時出現重度窒息，Apgar評分1 min≤3分，并延續至5 min時仍≤5分;或臍動脈血氣pH值≤7.0;(3)出生不久出現神經系統癥狀，并持續24 h以上。依據HIE病情分度標準，分為輕度組24例、中度組21例、重度組20例。另選擇同時期新生兒科出生的健康足月新生兒30例為對照組。所有新生兒排除感染性疾病、先天畸形、溶血性疾病等，母親均無自身免疫性疾病及其他可能影響新生兒免疫功能的疾病，新生兒住院期間均未使用可影響免疫功能的藥物。均已征得新生兒家長知情同意。各組新生兒性別構成、胎齡、日齡、出生體質量比較，差異均無統計學意義(P＞0.05，見表1)，具有可比性。

1.2 檢測方法所有受檢新生兒于入新生兒科次日清晨7:00空腹抽取股靜脈血5 ml，分注3管;應用美國BD Facscalibur流式細胞儀以間接免疫熒光檢測血漿T淋巴細胞亞群的百分率;應用法國STAGO全自動血凝儀檢測血漿D－二聚體;應用日本奧林巴斯AU2700全自動生化分析

儀檢測血清α羥丁酸脫氫酶(α－HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK－MB)。均使用儀器配套試劑，嚴格按儀器規程和試劑盒說明進行操作及判斷結果，試劑均在有效期內使用。

1.3 統計學方法采用SPSS 15.0統計學軟件進行統計處理，計量資料以(±s)表示，多組間比較采用方差分析;兩兩比較采用q檢驗;計數資料采用χ2檢驗;相關性采用Spearman等級相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

表1 各組新生兒一般資料比較Table 1 Comparison of general data among each group

表2 四組新生兒觀察指標比較(±s)Table 2 Comparison of observation indexes among four groups

表2 四組新生兒觀察指標比較(±s)Table 2 Comparison of observation indexes among four groups

注:α－HBDH=α羥丁酸脫氫酶，CK=肌酸激酶，CK－MB=肌酸激酶同工酶;與對照組比較，*P＜0.05;與輕度組比較，▲P＜0.05;與中度組比較，△P＜0.05

組別例數CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+D－二聚體(mg/L)心肌酶(U/L)α－HBDHCKCK－MB對照組3087±659±827±62.86±1.150.28±0.05118±42137±6614±4輕度組2478±7*51±8*24±5*2.50±1.06*0.86±0.11*273±101*256±120*59±13*中度組2175±9＊▲48±9＊▲22±7＊▲2.34±0.96*2.14±0.29＊▲466±130＊▲845±290＊▲140±60＊▲重度組2071±10＊▲△46±10＊▲20±7＊▲2.01±0.72＊▲△6.25±0.36＊▲△695±206＊▲△1 658±385＊▲△195±75＊▲△F 4.814.424.113.355.127.519.248.20 P值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.01＜0.05＜0.05值

3 討論

腦組織代謝旺盛，其耗氧量約占全身耗氧量一半，在胎兒期因母嬰間血液循環及氣體交換障礙使得血氧濃度降低，引起腦損害疾病包括新生兒HIE，是新生兒科中嚴重的疾病之一，圍生期窒息是其主要的病因［6］。在缺氧情況下，腦組織的能量代謝障礙、通氣功能障礙以及腦微血管通透性增高產生血管源性腦水腫，繼而發生選擇性神經元壞死、基底神經節變性一系列病理改變［7］。

T淋巴細胞是一個具多功能的細胞群體，細胞免疫的過程中，各T淋巴細胞亞群的相互作用和影響，對維持機體的免疫功能穩定發揮極其重要作用［8］。代表總T淋巴細胞，分為調節免疫反應活性的輔助性T細胞亞群，以為細胞標記;還包括抑制性T細胞亞群，以為細胞標記。細胞作用為促進體液免疫，細胞則是抑制其反應，比值水平反映了免疫系統內環境的穩定性［9］。生理狀態下輔助性與抑制性T細胞亞群維持著動態平衡，失調則會導致免疫損傷。本研究結果顯示，HIE患兒細胞數量較正常新生兒均明顯減少，且重度HIE患兒下降更明顯，即患HIE時機體處于免疫抑制狀態，這與卞洪亮等［10］、張向東等［11］研究結論一致。HIE患兒的免疫功能抑制機制可能在于:(1)缺氧缺血時，神經元產生大量細胞因子激活了下丘腦－垂體－腎上腺軸以及交感神經系統活性，從而抑制免疫系統;(2)缺氧缺血時，中樞神經系統自身內分泌功能改變，通過神經內分泌遞質抑制了免疫系統，但是其確切機制尚需進一步的探討。

D－二聚體作為纖溶酶水解交聯纖維蛋白降解后形成的特異性可溶性降解產物，是體內高凝狀態以及纖溶亢進的分子標記物之一［12］。本研究結果顯示，HIE患兒外周血D－二聚體水平明顯升高，其中重度HIE患兒較輕、中度患兒明顯升高，表明機體內纖溶性增高，既有血栓形成傾向又有纖溶亢進，處于一種高水平動態平衡。其原因可能是腦組織缺氧缺血時，體內的血液重新分布、內皮細胞損傷以及組織因子暴露，激活了內、外源凝血系統，導致凝血功能亢進，血液呈現高凝狀態，導致出現彌漫性血管內凝血(DIC)的可能性增加。這與文獻報道HIE患兒D－二聚體水平明顯增高，且與病情呈正相關是一致的［13］。

心肌酶在人體內廣泛分布，同時存在于許多組織器官中，包括心肌、骨骼肌、肝臟、腎臟等重要的組織器官［14］。在機體正常狀態，CK－MB在心肌細胞的含量最高而血清含量極微，心肌細胞受損傷后2～13 h內血清CK－MB活性會急劇上升，上升的程度和心肌壞死面積成正比，因此CK－MB水平對判斷心肌損害具有高度的靈敏性和特異性，是心肌損害的一個很重要的診斷指標。本研究結果顯示，HIE患兒外周血α－HBDH、CK、CK－MB水平均顯著升高，可能與機體免疫反應，細胞因子、炎性遞質導致心肌細胞損傷等有關［15］。

本研究中，HIE患兒包括輕、中、重度各病情程度的患兒，但應排除其他影響血T淋巴細胞、D－二聚體及心肌酶的因素，如本研究中的新生兒排除感染性疾病、先天畸形、溶血性疾病等，母親無自身免疫性疾病及其他可能影響到新生兒免疫功能的疾病，且未使用可影響免疫功能的藥物。本研究因時間所限，所選研究樣本較少，在后續研究中可進一步擴大研究樣本，選取其他有意義的T淋巴細胞亞群或其他血清學指標進行相關研究。

1 Niwa T，Aida N，Shishikura A，et al.Susceptibility－weighted imaging findings of cortical laminar necrosis in pediatric patients［J］．AJNR Am J Neuroradiol，2008，29(2):1795－1798.

2 張曉燕，林麗星，王沽，等.缺氧缺血性腦病新生兒自然殺傷細胞與T細胞亞群的變化及其相關因素［J］．實用兒科臨床雜志，2006，21(14):906－907.

3 張玉俠，高麗艷.新生兒缺氧缺血性腦病與血漿D－二聚體含量關系的臨床研究［J］．華北煤炭醫學院學報，2006，8(6):756－757.

4 曹亞敏.新生兒缺氧缺血性腦病合并心肌損害40例臨床診治［J］．陜西醫學雜志，2009，38(11):1535－1536.

5 中華醫學會兒科學分會新生兒學組.新生兒缺氧缺血性腦病診斷標準［J］．中華兒科雜志，2005，43(8):584.

6 李熙鴻.我國新生兒缺氧缺血性腦病的診斷及治療［J］．實用兒科臨床雜志，2010，25(14):1037－1039.

7 陸勤，王健，王薇，等.新生兒缺氧缺血性腦病細胞因子與細胞免疫的變化［J］．小兒急救醫學，2005，12(4):269－271.

8 鄭玉蘭，吳金如，李向陽，等.流式細胞儀檢測惡性胸腔積液中T淋巴細胞亞群變化［J］．現代預防醫學，2010，37(14):2720－2721.

9 劉義紅，熊麗萍，沈紅元.毛細支氣管炎患兒紅細胞免疫及T細胞亞群變化的研究［J］．中國當代兒科雜志，2011，13(3):202－204.

10 卞洪亮，肖志輝，劉偉東，等.新生兒缺氧缺血性腦病與T輔助細胞亞群功能失衡研究［J］．中國新生兒科雜志，2006，21(1):1－4.

11 張向東，紀健玲.新生兒缺氧缺血性腦病輔助性T細胞分化異常的初步研究［J］．南通大學學報:醫學版，2006，26(2):126－128.

12 石海礬，陳益平，狄軍波，等.巨細胞病毒肝炎患兒血漿D二聚體、血管性假血友病因子變化及復方甘草酸苷治療的研究［J］．中國當代兒科雜志，2010，12(4):272－274.

13 Sartori MT，Serena A，Saqqiorato G，et al.Variations in fibrinolytic parameters and inhibin－A in pregnancy:related hypertensive disorders［J］．Thromb Haemost，2008，6(2):352－358.

14 黃建玲，應海燕，楊慶.不同病因危重癥小兒心肌酶譜變化特點［J］．中國當代兒科雜志，2006，8(5):431－432.

15 周明琪，劉蘭.缺氧缺血性腦病患兒心、腎功能損害檢測及意義［J］．山東醫藥，2007，47(25):80.

Correlation of T Lymphocyte， D－dimer and Myocardial Enzymes in Neonates with Hypoxic－ischemic Encephalopathy

LIU Yan－ping，QIN Shao－peng，HUANG Xian－wen，et al.Department of Laboratory Medicine，Liuzhou People's Hospital，Liuzhou 545001，China

ObjectiveTo investigate the levels and correlation of serum T lymphocyte，D－dimer and myocardial enzymes in neonates with hypoxic－is chemic encephalopathy(HIE).Methods65 full－term neonates with HIE admitted to neonates department of our hospital from January 2008 to June 2011 were divided into mild group(24 cases)，moderate group(21 cases)and severe group(20 cases).Meanwhile，30 full－term healthy neonates of the same period were selected as control group.Serum T lymphocyte subsets percentageplasma D－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB were detected and the correlation was analyzed.ResultsThelevels in peripheral blood，D－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB among the four groups all showed statistically significant differences(P＜0.05).The levels ofD－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB in the control group showed statistically significant differences compared with those in the mild group，moderate group and severe group(P＜0.05).TheD－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB all showed statistically significant differences between mild group and moderate group，moderate group and severe group and mild group and severe group(P＜0.05).The levels ofin mild group showed statistically significant differences compared with those in the moderate group and severe group(P＜0.05).Thein mild group and moderate group showed statistically significant difference compared with that in severe group(P＜0.05)．Spearman correlation analysis showed that thein peripheral blood was negatively correlated with D－dimer in HIE neonates(r=－0.46，P＜0.05).Thewas negatively correlated with CK－MB(r=－0.89，P＜0.05).The D－dimer was positively correlated with CK－MB(r=0.43，P＜0.05).ConclusionThe occurrence and development of HIE in neonates is a complicated course involving various factors.Immune，inflammatory reaction，vascular endothelial cell injury and coagulation/fibrinolytic system abnormality may occur simultaneously and relate to each other.

Hypoxic－ischemic，brain;T lymphocyte;D－dimer;Myocardial enzymes

R 722.12

A

1007－9572(2012)11－3842－03

10.3969/j.issn.1007－9572.2012.11.091

545001廣西柳州市人民醫院檢驗科(劉艷萍，覃紹鵬)，兒科(黃獻文，金伶)

劉艷萍，545001廣西柳州市人民醫院檢驗科;E－mail:cdsoft@163.com

2012－03－10;

2012－09－25)(本文編輯:陳素芳)