GATA-4在卵巢性索間質腫瘤中的表達及意義

姚秀娟，尹曉娜，陳祥義，陳國榮，董磊

（溫州醫學院附屬第一醫院 病理科， 浙江 溫州 325000）

卵巢性索間質腫瘤起源于原始性腺中的性索和間質組織，約占卵巢腫瘤的5%～l0%[1]。Laitinen等[2-4]發現轉錄因子GATA-4在大部分顆粒細胞瘤和卵泡膜細胞瘤中表達，認為GATA-4在性索起源的卵巢腫瘤的表型中起作用。本研究采用免疫組織化學PV-6000二步法檢測正常卵巢、卵泡膜細胞瘤、顆粒細胞瘤及支持-間質細胞瘤中GATA-4的表達，分析其臨床病理意義，從而為判斷卵巢性索間質腫瘤的生物學行為、指導其臨床治療以及預測預后提供客觀依據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象：收集2003年4月至2010年8月溫州醫學院附屬第一醫院行手術切除的卵巢性索間質腫瘤石蠟包埋標本80例，病理診斷均再次確認。其中卵泡膜細胞瘤45例，患者平均年齡53.4歲（26～80歲）；顆粒細胞瘤28例，均為成人型，患者平均年齡50.4歲（33～91歲）；支持-間質細胞瘤7例，其中2例呈高分化，5例呈中分化，患者平均年齡39.7歲（21～68歲）。根據2000年FIGO標準將顆粒細胞瘤進行臨床分期：Ia期19例，Ic期8例，III期1例。同時選取20例非卵巢腫瘤性疾病切除的卵巢組織標本作為對照組，患者平均年齡37.2歲（35～42歲）。

1.1.2 試劑：選用的一抗GATA-4（G-4）：sc-25310，由SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY提供，稀釋度為1:300。二抗PV-6000試劑盒及DAB染色試劑盒（ZLI-9019）購自北京中杉金橋生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色：復習患者臨床資料及所有的病理組織學切片，選取其中有代表性的蠟塊進行免疫組織化學染色。采用免疫組織化學PV-6000二步法，按試劑盒提供的說明書進行操作。用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 結果判定：GATA-4陽性表達定位于細胞核，呈棕黃色或者棕黑色。根據文獻[5]，以正常卵巢竇卵泡性索間質細胞的免疫反應水平作為標準，隨機選擇10個高倍視野（400倍），計數500～1000個腫瘤細胞中陽性細胞數，計算出各例標本免疫組化陽性細胞百分比，無陽性細胞為陰性表達（-），陽性細胞數＜20%為低表達（+），20%～80%為中表達（++）；＞80%為高表達（+++）。進行統計學分析時，將GATA-4的免疫組化染色結果分為兩組：①與在正常卵巢中的表達相當或更強（即高表達）；②低于在正常卵巢中的表達（即中、低及陰性表達）。

1.3 統計學處理方法 應用SPSS15.0統計軟件，四格表資料的Chi-square檢驗或者Fisher確切概率法進行分析，檢驗水準a=0.05。

2 結果

2.1 正常卵巢及卵巢性索間質腫瘤中GATA-4的表達情況 GATA-4在正常卵巢組織、卵泡膜細胞瘤、顆粒細胞瘤及支持-間質細胞瘤中的高表達率分別為100%、89%、68%、71%（見圖1）。組間兩兩比較，顆粒細胞瘤組GATA-4的表達率低于卵泡膜細胞瘤組及正常卵巢組，差異均有統計學意義（分別P=0.026，P=0.006），而卵泡膜細胞瘤組與正常卵巢組的表達差異無統計學意義（P=0.313），支持-間質細胞瘤組與正常卵巢組、卵泡膜細胞瘤組、顆粒細胞瘤組的表達差異均無統計學意義（P=0.060，P=0.235，P=1.000），見表1。

圖1 GATA-4在正常卵巢及卵巢性索間質腫瘤中呈高表達的免疫組化染色

表1 正常卵巢及卵巢性索間質腫瘤中GATA-4的表達情況

2.2 不同臨床分期的顆粒細胞瘤中GATA-4的表達情況 臨床上，Ia期與Ic期及以上期別的卵巢顆粒細胞瘤治療方法不同，因此，本實驗分成兩組進行統計學分析：①Ia期組；②Ic及III期組。Ia期組GATA-4的表達率高于Ic及III期組，差異有統計學意義（P=0.013），見表2。

表2 不同臨床分期的顆粒細胞瘤中GATA-4的表達情況

2.3 不同組織學類型的顆粒細胞瘤中GATA-4的表達情況 根據文獻[5]，將成人型顆粒細胞瘤分為兩個亞型組：①分化型：包括小濾泡型、大濾泡型、緞帶型、小梁型、島狀型及這些類型混合型；②彌漫型（即肉瘤樣型）。兩組比較，GATA-4的表達差異無統計學意義（P=1.000），見表3。

表3 不同組織學類型的顆粒細胞瘤中GATA-4的表達情況

3 討論

1993年Arceci等[6]通過篩查小鼠胚胎cDNA文庫首次克隆出小鼠GATA-4 cDNA，1995年Huang等[7]通過篩查人類心臟cDNA文庫首次克隆出GATA-4 cDNA，以后相繼在人類肺臟、肝臟、小腸、睪丸及卵巢等器官中檢測到GATA-4 mRNA和蛋白的表達。GATA-4轉錄因子與生殖系統的關系非常密切，參與了性別分化、類固醇激素的合成與調節、生殖激素的調節，及顆粒細胞分化與凋亡的調節[2-4，8-9]。在人類卵巢的顆粒細胞、卵泡膜細胞和黃體中都檢測到GATA-4 mRNA[10-12]。

卵巢性索間質類腫瘤相對少見，其生物學行為和臨床經過一般呈良性或者低度惡性，其中，顆粒細胞瘤容易遠期復發和轉移，呈低度惡性；中、低分化的支持-間質細胞瘤表現為惡性生物學行為；其他大部分腫瘤均為良性[1]。

本研究中，GATA-4在正常卵巢竇卵泡的性索間質細胞中均呈高表達，與文獻[2-4]報道一致，提示GATA-4的高表達是正常卵巢性索間質細胞分化成熟的一個標記。GATA-4在大部分的卵泡膜細胞瘤、顆粒細胞瘤及支持-間質細胞瘤中呈高表達，顆粒細胞瘤組的表達低于卵泡膜細胞瘤組及正常卵巢組，差異均有統計學意義（P＜0.05），而卵泡膜細胞瘤組與正常卵巢組的表達差異無統計學意義（P＞0.05），表明在分化程度高的腫瘤中GATA-4的表達高于分化程度低的腫瘤，GATA-4的表達可能與腫瘤的生物學行為有關，在腫瘤的分化表型中起作用，GATA-4在顆粒細胞瘤中的表達降低可能代表了腫瘤細胞的分化障礙，結合文獻報道GATA-4在卵泡閉鎖及排卵后表達顯著降低，而在即將排卵前表達達到最高[10-12]，提示GATA-4的表達與顆粒細胞分化能力保持同步，說明部分顆粒細胞瘤瘤細胞有分化障礙，與該腫瘤屬于低度惡性相符合。此外，不同臨床分期，GATA-4的表達差異有統計學意義（P＜0.05），Ia期組高于Ic及III期組，提示腫瘤侵襲行為越高，瘤細胞的分化障礙越顯著。然而有研究表明GATA-4的高表達與Ic及以上期別相關，GATA-4的高表達可作為具有較高侵襲行為的顆粒細胞瘤的一種標記[5]，與本實驗結果相反，考慮可能由于抗體克隆號不同引起。此外，在不同組織學類型的顆粒細胞瘤中，GATA-4的表達差異無統計學意義（P＞0.05)，表明組織學類型不能代表腫瘤細胞的分化程度，與文獻[13]報道一致。本實驗中，支持-間質細胞瘤組GATA-4的表達略低于正常卵巢組及卵泡膜細胞瘤組，略高于顆粒細胞瘤組，但差異均無統計學意義（P＞0.05)。

總之，本研究結果表明GATA-4的高表達是正常卵巢性索間質細胞分化成熟的一個標記，且在卵巢性索間質腫瘤的分化表型中起作用，與腫瘤生物學行為可能有關。GATA-4在卵巢顆粒細胞瘤中的表達降低可能代表了腫瘤細胞的分化障礙，且GATA-4的表達與臨床分期有關，而目前臨床分期是指導顆粒細胞瘤治療和預測預后最重要的因素[13]，因此，檢測GATA-4的表達可能有助于判斷卵巢性索間質腫瘤生物學行為，指導卵巢顆粒細胞瘤的治療及預測預后。

[1] Haines M, Jackson I. Granulosa-cell tumor of the ovary[J].J Obstet Gynaecol Br Emp,1950,57(5):737-746.

[2] Laitinen MP, Anttonen M, Ketola I, et al. Transcription factors GATA-4 and GATA-6 and a GATA family cofactor,FOG-2, are expressed in human ovary and sex cord-derived ovarian tumors[J]. J Clin Endocrinol Metab,2000,85(9):3476-3483.

[3] Chu S, Rushdi S, Zumpe ET, et al. FSH-regulated gene expression profiles in ovarian tumours and normal ovaries[J].Mol Hum Reprod,2002,8(5):426-433.

[4] 景彩霞, 楊加周, 艾慶燕,等. GATA 家族與生殖[J]. 中華男科學雜志, 2009,15 (10): 932-936.

[5] Anttonen M, Unkila-Kallio L, Leminen A, et al. High GATA-4 expression associates with aggressive behavior, whereas low anti-Müllerian hormone expression associates with growth potential of ovarian granulosa cell tumors[J]. J Clin Endocrinol Metab,2005,90(12):6529-6535.

[6] Arceci RJ, King AA, Simon MC, et al. Mouse GATA-4:a retinoic acid-inducible GATA-binding transcription factor expressed in endodermally derived tissues and heart[J]. Mol Cell Biol,1993,13(4):2235-2246.

[7] Huang WY, Cukerman E, Liew CC. Identification of a GATA motif in the cardiac α-myosin heavy-chain-encoding gene and isolation of a human GATA-4 cDNA[J]. Gene,1995,155(2): 219-223.

[8] Nishida H, Miyagawa S,Vieux-Rochas M, et al. Positive regulation of steroidogenic acute regulatory protein gene expression through the interaction between Dlx and GATA-4 for testicular steroidogenesis[J]. Endocrinology, 2008,149(5):2090-2097.

[9] Kwintkiewicz J, Cai Z, Stocco C. Follicle-stimulating hormone-induced activation of GATA-4 contributes in the upregulation of Cyp19 expression in rat granulosa cells[J].Mol Endocrinol, 2007, 21(4):933-947.

[10]Silverman E, Eimerl S, Orly J. CCAAT enhancer-binding protein β and GATA-4 binding regions within the promoter of the steroidogenic acute regulatory protein (StAR)gene are required for transcription in rat ovarian cells[J]. J Biol Chem,1999,274:17987-17996.

[11] Vaskivuo TE, Anttonen M, Herva R, et al. Survival of human ovarian follicles from fetal to adult life: apoptosis,apoptosis-related proteins, and transcription factor GATA-4[J]. J Clin Endocrinol Metab, 2001, 86(7):3421-3429.

[12]Gillio-Meina C, Hui YY, LaVoie HA. GATA-4 and GATA-6 transcription factors: expression, immunohistochemical localization, and possible function in the porcine ovary[J].Biol Reprod,2003,68(2):412-422.

[13] Miller BE, Barron BA, Wan JY, et al. Prognostic factors in adult granulosa cell tumor of the ovary[J]. Cancer, 1997, 79(10):1951-1955.