天芎頭風(fēng)顆粒對偏頭痛大鼠的防治作用及其機制

楊子誼 吳紅彥 王紅蕾 (甘肅中醫(yī)學(xué)院 甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點實驗室，甘肅 蘭州 730000)

偏頭痛的發(fā)病機制與血管和神經(jīng)機能障礙有關(guān)。神經(jīng)生化的代謝紊亂是形成偏頭痛發(fā)病惡性循環(huán)的重要因素〔1〕。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，偏頭痛與一氧化氮(NO)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)以及β-內(nèi)啡肽(β-EP)密切相關(guān)。本實驗研究天芎頭風(fēng)顆粒對偏頭痛模型的鎮(zhèn)痛作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康SD大鼠，SPF級別，70只，雌雄各半，體重180～220 g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院SPF實驗室提供，合格證號：SYXK(甘)2011～0001。

1.1.2 藥物與試劑 天芎頭風(fēng)顆粒制劑，由西安新通藥物有限公司生產(chǎn)，每克顆粒含有10.35 g生藥，批號：20110317;硝酸甘油(NTG)注射液，1 ml∶5 mg，北京益民藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：20100522;琥珀酸舒馬普坦片，100 mg/片，天津華津制藥有限公司，批號：186911T;正天丸，三九醫(yī)藥股份有限公司，批號：1108014H。NO測試盒(硝酸還原酶法)，南京建成生物工程研究所，批號：20111103;CGRP放免分析試劑盒，北京華英生物技術(shù)研究所生產(chǎn)，批號：20111201;β-EP放免分析試劑盒，北京華英生物技術(shù)研究所生產(chǎn)，批號：20111203。

1.1.3 實驗器材 HANGPING電子秤，型號：JY4001，上海精科公司天平儀器廠。Biofuge strators高速冷凍離心機，產(chǎn)地美國。UV-2401PC紫外分光光度計，產(chǎn)地美國。γ-911全自動放免計數(shù)儀，中國科技大學(xué)實業(yè)總公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 分組 所有動物在同一條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)，按照隨機性原則分為空白組、模型對照組、舒馬普坦對照組、正天丸對照組及天芎頭風(fēng)高、中、低劑量組，每組10只。

1.2.2 給藥 空白組和模型對照組大鼠每天灌胃蒸餾水10.0 ml/kg;正天丸組每天灌胃正天丸1 339.31 mg/kg;舒馬普坦組每天灌胃琥珀酸舒馬普坦4.44 mg/kg;天芎頭風(fēng)高、中、低組分別按566.426、283.213、141.607 mg/kg(相當(dāng)于60 kg成人日用量的2倍、1倍、1/2倍)，每天固定時間灌胃1次，連續(xù)7 d。給藥過程中測定每只大鼠的體質(zhì)量變化。

1.2.3 造模 連續(xù)灌胃給藥7 d，第7天給藥后30 min造模。參照Cristina等〔2〕研究的方法，按照預(yù)定除空白組給予蒸餾水之外，其余各組分別皮下注射NTG注射劑10 mg/kg，注射區(qū)定位于右肩皮下注射，可復(fù)制出較為理想的偏頭痛模型〔3〕。造模后3 min左右，動物出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁撓頭、爬籠次數(shù)增多、煩躁不安等現(xiàn)象。此現(xiàn)象持續(xù)約3 h，繼而出現(xiàn)蜷臥、活動減少狀態(tài)，表明偏頭痛動物模型復(fù)制成功。

1.2.4 取材與處理 動物皮下注射NTG注射劑4 h后，取腦，在冰盤上分離出腦干，制作腦干勻漿液，4℃下離心15 min(3 000 r/min)，取上清－20℃保存待測。

1.2.5 觀察指標(biāo) NO的測定采用紫外分光光度法，β-EP、CGRP的測定采用放射免疫分析法(測定步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行)，由自動γ計數(shù)儀器直接讀出結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 運用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析，先進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗，結(jié)果以±s表示，各組間進(jìn)行單因素方差分析，并作LDS檢驗。

2 結(jié)果

2.1 天芎頭風(fēng)顆粒對偏頭痛模型大鼠腦組織NO、CGRP含量的影響 見表1。皮下注射NTG注射液后，模型組大鼠組織中NO、CGRP含量升高，與空白組比較顯著差異(P＜0.01);藥物治療后，天芎頭風(fēng)各劑量組和舒馬普坦組、正天丸組NO、CGRP含量降低，與模型對照組比較差異顯著(P＜0.01)，與空白組比較沒有差異(P＞0.05)。見表1。

2.2 天芎頭風(fēng)顆粒對偏頭痛模型組大鼠腦組織β-EP含量的影響 皮下注射NTG后，模型對照組大鼠組織中β-EP含量降低，與空白組比較均有顯著性差異(P＜0.01);經(jīng)過藥物治療后，天芎頭風(fēng)組和舒馬普坦組、正天丸組CGRP含量升高，與模型組比較均差異顯著(P＜0.01)，與空白組比較沒有差異(P＞0.05)。見表1。

表1 各組大鼠腦組織NO、CGRP、β-EP含量的比較(±s)

表1 各組大鼠腦組織NO、CGRP、β-EP含量的比較(±s)

與模型對照組比較：1)P＜0.01;與空白組比較：2)P＜0.01

組別 n NO(μmol/g·prot) CGRP(pg/g) β-EP(pg/g)空白組9 2.52±1.60 127.94±48.88 397.94±32.15模型對照組 8 4.77±3.782) 222.12±40.492)302.61±38.092)正天丸組 8 2.38±0.851) 158.27±18.281)411.90±59.251)舒馬曲坦組 8 2.27±0.621) 134.71±14.461)422.59±42.851)天芎頭風(fēng)低劑量組 7 2.53±0.871) 166.48±48.911)399.63±50.311)天芎頭風(fēng)中劑量組 8 2.45±0.781) 151.10±34.141)404.23±48.551)天芎頭風(fēng)高劑量組 8 2.39±0.712) 146.17±46.241)408.45±45.491)

3 討論

天芎頭風(fēng)顆粒為吳紅彥教授經(jīng)過多年臨床實踐驗證，并結(jié)合現(xiàn)代中藥化學(xué)、中藥藥理學(xué)研究成果，以及相關(guān)藥效學(xué)實驗指標(biāo)，通過拆方分析研究所得，方藥選用天麻、川芎等七味中藥為主要成分。偏頭痛有著病程持久、頑固、反復(fù)的特點。從古至今，各醫(yī)家對偏頭痛的發(fā)病原因皆認(rèn)為主要在感受外邪，情志內(nèi)傷，飲食不節(jié)，久病致瘀的基礎(chǔ)上造成肝、脾、腎等臟腑功能失調(diào)，風(fēng)襲腦絡(luò)，痰濁阻滯，瘀血阻絡(luò)所引起。所以，祛風(fēng)活血定痛法當(dāng)為偏頭痛的主要治法。天芎頭風(fēng)顆粒處方中，川芎入少陽經(jīng)，又能通行十二經(jīng)脈，上行頭目，祛一切風(fēng)，調(diào)一切氣，而止一切頭痛;天麻，入足厥陰肝經(jīng)，息肝風(fēng)，平肝陽，祛風(fēng)通絡(luò)，為治偏頭痛、肝陽頭痛、痰濁頭痛之要藥;二藥相配既增強平肝、潛陽、解痙、通絡(luò)、止痛之效，又可祛風(fēng)散邪、醒腦通竅。

NO作為一種特殊的神經(jīng)遞質(zhì)已引起了人們的廣泛關(guān)注，它兼有神經(jīng)遞質(zhì)和效應(yīng)分子的雙重功效〔4〕。NO在體內(nèi)既直接擴張血管又促使CGRP等血管活性物質(zhì)的釋放，觸發(fā)血管周圍神經(jīng)源性炎癥，直接或間接引起神經(jīng)源性血管擴張，參與偏頭痛的發(fā)作〔5〕。CGRP在疼痛感覺調(diào)控中也發(fā)揮重要作用，CGRP過量釋放和由它產(chǎn)生的神經(jīng)性炎癥被認(rèn)為是偏頭痛疼痛的病理生理基礎(chǔ)〔6〕。β-EP是體內(nèi)鎮(zhèn)痛系統(tǒng)的主要遞質(zhì)，具有嗎啡樣的鎮(zhèn)痛作用。β-EP的減少對腦干藍(lán)斑的抑制減弱，使多種血管活性物質(zhì)釋放，導(dǎo)致腦血管舒縮功能紊亂，進(jìn)而促使偏頭痛發(fā)作〔7〕。本實驗表明天芎頭風(fēng)顆粒可使由NIG誘發(fā)的偏頭痛模型大鼠腦組織中NO、CGRP大量生成水平降低，使β-EP大量減少水平升高，從而降低神經(jīng)性炎癥、升高鎮(zhèn)痛系統(tǒng)的遞質(zhì)含量，使之趨于生理狀態(tài)下的平衡水平，以緩解偏頭痛癥狀。

1 趙永烈，王玉來.芎芷地龍湯對偏頭痛模型動物血液和腦干中β-EP、CGRP 的影響〔J〕.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009;4(7)：473-5.

2 張雙全.偏痛寧片的主要藥效學(xué)實驗研究〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志，2009;15(5)：71-3.

3 Tassorelli C，Creco R，Wang D，et al.Nitroglycerin induces hyperalgesia in rats-a time-course study〔J〕.Eur J Pharmacol，2003;464(2-3)：159.

4 杜艷芬，王紀(jì)佐.偏頭痛發(fā)病機制研究進(jìn)展〔J〕.中國臨床神經(jīng)學(xué)，2002;10(3)：314-7.

5 李佳川，孟憲麗.中藥防治偏頭痛的藥效研究思路探討〔J〕.中藥藥理與臨床，2010;26(5)：165-7.

6 任 旭，牛爭平.降鈣素基因相關(guān)肽在偏頭痛發(fā)病機制中的研究進(jìn)展〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2004;2(4)：229-31.

7 孫紅梅.針刀松解法對第三腰椎橫突綜合征家兔5-HT和β-EP以及局部組織病理學(xué)的影響〔J〕.遼寧中醫(yī)雜志，2011;38(1)：1-3.