郁芝膠囊對大鼠酒精性脂肪肝組織形態的影響

1 材料與方法

1.1 材料清潔級雄性Wistar大鼠，體重 (200±20)g，購自吉林大學白求恩醫學院實驗動物中心，動物許可證編號SCXK2007-0003。動物基礎飼料由吉林大學白求恩醫學院實驗動物中心提供。YZCS為自行研制，臨用前以蒸餾水按所需濃度配制成水溶液，冰箱保存，用時37℃水浴溫育，搖勻，備用;硫普羅辛片，河南省新誼藥業股份有限公司。甲醛、乙醇為國產分析純試劑，購自北京化學試劑公司。儀器：電子天平，沈陽龍騰電子有限公司。光學顯微鏡，奧林巴斯工業有限公司。

1.2 方法

1.2.1 模型建立〔2〕、動物分組及給藥 60只大鼠隨機分為6組，每組10只，即對照組組、模型組、陽性藥硫普羅寧組、YZCS低、中、高組。各組適應性飼養1 w后，對照組大鼠每日灌食生理鹽水0.5 ml/100 g，其余各組大鼠15%、30%酒精誘導模型建立各3 d，之后均每天給予45%酒精、0.5 ml/100 g灌胃。各組大鼠喂食基礎飼料，自由飲水。造模8 w后，第9周開始繼續造模同時按如下方法給藥：模型組給予等體積生理鹽水;硫普羅寧組灌胃給予硫普羅寧40 mg/kg;YZCS低中、高劑量組分別灌胃給予 YZCS 100、200、400 mg/kg，持續給藥 4 w。

1.2.2 檢測方法

1.2.2.1 動物一般狀況在實驗過程中，每天觀察并記錄各組大鼠的飲食、活動、毛色、體重和死亡情況。

1.2.2.2 肝重比第12周末處死大鼠，處死前禁食12 h，以20%烏拉坦溶液0.5 ml/100 g體重腹腔注射，麻醉后處死，迅速取出肝臟，磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液洗凈稱重，計算肝重比(肝重比=肝濕重/體重×100%)。

1.2.2.3 形態學觀察稱重后的肝臟，10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，制成厚度為5 μm的切片，行常規蘇木素-伊紅(HE)染色，光學顯微鏡下觀察各組大鼠肝組織變性情況。

1.3 統計學方法應用SPSS16.0統計軟件進行分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 動物一般狀況對照組大鼠活躍，毛色光滑有光澤，模型組大鼠活動性差，毛色暗淡，YZCS低、中、高劑量組與模型組大鼠相比在活動性和毛色方面均有改善作用。

2.2 郁芝膠囊對大鼠肝重比的影響模型組與對照組相比，肝重比顯著升高(P＜0.01)。YZCS低、中、高劑量組與模型相比，肝重比均有顯著降低，差異有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。見表1。

表1 郁芝膠囊對各組大鼠肝重比的影響(n=10，±s)

與對照組相比：1)P ＜0.01;與模型組相比：2)P ＜0.05，3)P ＜0.01

對照組467.1±2.5 10.66±0.21 2.28±0.05模型組 508.8±4.41) 16.68±0.231) 3.28±0.041)硫普羅寧組 515.3±4.42) 14.99±0.352) 2.91±0.072)郁芝膠囊組100 mg/kg 511.1±4.72) 15.68±0.492) 3.07±0.082)200 mg/kg 512.0±5.82) 14.41±0.342) 2.81±0.062)400 mg/kg 509.7±5.23) 12.68±0.343) 2.49±0.063)

2.3 大鼠肝臟組織形態學觀察見圖1。對照組HE標本可見肝細胞正常，以中央靜脈為中心呈放射狀排列，未見脂滴及炎性浸潤;模型組大鼠肝組織HE染色標本可見肝細胞病變以中重度脂肪變性為主，壞死少見，伴有大量的炎性浸潤，但未見明顯的膠原纖維;硫普羅寧組及YZCS低、中、高劑量組大鼠肝組織切片與模型組相比脂滴明顯減少，僅伴有少量炎細胞浸潤，細胞輪廓清晰，排列較模型組規則。

圖1 肝臟組織切片形態學觀察(×400)

3 討論

脂肪性肝病(FLD)是指各種原因引起的肝細胞內過多的脂肪堆積。臨床上FLD根據是否飲酒及飲酒量分為酒精性肝病(AFLD)和非酒精性脂肪肝(NAFLD)。AFLD是由于長期大量飲酒所致的肝臟疾病，初期通常表現為脂肪肝，進而可發展成酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化，嚴重酗酒時可誘發廣泛肝細胞壞死甚或肝衰竭〔3〕。

正常人肝臟重量1 200～1 500 g，長期、持續大量飲酒時，脂肪代謝紊亂，如脂肪酸的氧化率下降、TG的合成增加、脂肪的輸出減少以及肝外的脂肪動員增加等，導致AFL發生，引起肝臟重量增加〔4〕。脂肪變性是AFL最常見的肝臟病變，肉眼觀，肝大而軟，黃色，肝細胞內含有脂滴，多者可將胞核推向一側，肝細胞腫大變圓;小葉中央區受累明顯，有時伴有不同程度的肝細胞水樣變性。單純的脂肪肝常無癥狀。如病變未發展到纖維化，戒酒可使脂肪肝恢復〔5〕。

本實驗中YZCS能夠有效防治脂肪肝。從ALFD的發病機制上看，AFL的高TG血癥來源于乙醇及其氧化產物與肝內脂質代謝的相互作用，乙醇以及活性氧在線粒體損傷中起主要作用。乙醇毒性的早期靶器官首先為線粒體，其次為微粒體，從而影響脂肪酸的β氧化，阻礙蓄積脂肪酸的清除，最終形成脂肪肝〔6〕。此外，近年來有人提出以氧應激為中心的“二次打擊”假說〔5〕，國內外學者普遍認為 AFL中細胞色素 P450ⅡE1(CYP2E1)在酒精代謝過程中產生的氧自由基是造成AFL損傷的重要環節〔6〕。

實驗中YZCS是將云芝多糖和郁金以一定比例混合而成，組方中的云芝多糖可以抑制脂肪酶的活性，減弱機體對脂肪的消化能力，從而減少脂肪在體內的蓄積，有效防止因攝取過多脂肪而導致的疾病〔7，8〕。郁金化學成分為揮發油、姜黃素、姜黃酮等，其藥理作用為保護肝細胞膜、促進肝細胞再生、去脂、抗自由基、抗炎、抑制肝細胞纖維化和抑制肝細胞凋亡〔9〕。本實驗的前期工作已經證實YZCS能降低血清轉氨酶，改善肝功能，對抗肝臟毒性病變〔1〕。本實驗將YZCS以一定劑量治療AFL大鼠后，不僅使實驗大鼠的肝臟組織結構得到了明顯改善，在一般狀況及肝重比方面也取得了良好的治療效果。由此可見，YZCS可從發病機制上防治AFL，且療效顯著，為YZCS的進一步開發和利用奠定了基礎。

1 李丹，郭春林，王春艷.郁芝膠囊對大鼠酒精性脂肪肝的治療作用〔J〕. 中國老年學雜志，2012;22(6)：1200-2.

2 張勁松，吳鐵，鄒麗宜.小鼠酒精性脂肪肝模型的建立〔J〕.中外健康文摘，2011;8(30)：96-8.

3 田麗艷，陸倫根.2010年美國肝病學會酒精性肝病指南解讀〔CD〕.中國醫學前沿雜志(電子版)，2011;3(1)：14-6.

4 Chan SC，Liu CL，Lo CM，et al.Estimating liver weight of adults by body weight and gender〔J〕.World J Gastroenterol，2006;12(14)：2217-22.

5 Savas MC，Koruk M，Pirim I，et al.Serum ubiquitin levels in patients with nonalcoholic steatohepatitis〔J〕.Hepatogastroenterology，2003;50(51)：738-41.

6 孟祥偉，遲寶榮，高沿航，等.細胞色素P450Ⅱ E1-基因多態性在酒精性肝病發病中的意義〔J〕.吉林大學學報醫學版，2003;29(4)：451-3.

7 孫設宗，唐微，張紅梅，等.云芝多糖對小鼠實驗性肝損傷保護作用的研究〔J〕.中國現代醫學雜志，2008;18(9)：1217-20.

8 莫永炎，姜勇，陳瑗，等.云芝多糖對腦、肝組織的抗氧化作用研究〔J〕. 中國藥理學通報，2001;17(6)：628-31.

9 趙昱，劉蜻蜻，徐艷，等.天然藥物防治非酒精性和酒精性脂肪肝的研究進展〔J〕.國際藥學研究雜志，2010;37(6)：408-25.