CK17在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組織中的表達(dá)及意義

王為民 汪建華 侯洪春

細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK)是1種細(xì)胞中間絲蛋白， 具有顯著的分子多樣性，不同的上皮組織和細(xì)胞分化的不同階段表達(dá)不同的CK。正常宮頸組織的各種細(xì)胞分別表達(dá)不同的CK，在正常宮頸組織向?qū)m頸癌和癌前病變轉(zhuǎn)化的過程中，一些CK的表達(dá)會發(fā)生變化，并表現(xiàn)出一定的規(guī)律性，因此CK有望在宮頸癌診斷和預(yù)后判斷中發(fā)揮作用。本研究通過觀察CK17在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組織中的表達(dá)情況，探討其與宮頸組織的關(guān)系及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2008年1月～2009年10月在濟(jì)南市婦幼保健院行宮頸活檢、環(huán)形電切術(shù)、手術(shù)切除宮頸標(biāo)本89例，其中CINⅠ15例，CINⅡ17例，CINⅢ21例，宮頸癌36例。36例宮頸癌中，宮頸鱗癌28例、宮頸腺癌8例。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌的標(biāo)本均經(jīng)病理檢查確診，病理診斷由至少兩名以上資深病理科醫(yī)生確定。選取因子宮肌瘤，子宮腺肌病行子宮全切術(shù)，經(jīng)病理檢查證實(shí)為正常宮頸組織15例標(biāo)本作為對照組。患者年齡28～66歲，中位年齡41歲，所有患者術(shù)前均未做放療、化療，無免疫、代謝性等疾病。

1.2 方法

采用SP免疫組化方法：標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋，4 μm厚切片， CK17單克隆抗體及SP試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。PBS代替一抗作陰性對照。按SP試劑盒說明書操作。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

CK17的陽性表達(dá)部位為細(xì)胞質(zhì)。在400倍光鏡下隨機(jī)選取8個(gè)視野，每個(gè)視野觀察100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，取平均值。按陽性細(xì)胞染色數(shù)量和顯色強(qiáng)度分為4級：陽性細(xì)胞數(shù)為0，不計(jì)分；1%～25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；76%以上為4分；染色強(qiáng)度按無著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計(jì)0～3分；兩項(xiàng)相加，0～1分為“—”，2～3分為“+”，4～5分為“++”，6～7分為“+++”，+～+++為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，F(xiàn)isher確切概率法及相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 CK17在不同宮頸組織中的表達(dá)情況

CK17在正常宮頸組織中無表達(dá)、在CIN和宮頸癌中的陽性表達(dá)率分別為56.6%和83.3%，呈逐漸增高的趨勢。3組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.177，P<0.05)。經(jīng)χ2分割后比較(α’=0.0125)，CIN組陽性率高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.194，P<0.0125)；宮頸癌組陽性率高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.357，P<0.0125)；宮頸癌組陽性率高于CIN組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.973，P<0.0125)。CIN組內(nèi)，從CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ，CK17的陽性表達(dá)率分別為20.0%、64.7%和76.2%，隨著病變級別的升高，陽性表達(dá)率有逐漸增高的趨勢，F(xiàn)isher確切概率法得出，CINⅡ組陽性率高于CINⅠ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016)；CINⅢ組陽性率高于CINⅠ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；CINⅡ組和CINⅢ組陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2 CK17陽性表達(dá)率與宮頸病變程度的關(guān)系

CK17在正常宮頸、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌的陽性表達(dá)率分別為0、20.0%、64.7%、76.2%和83.3%。隨著宮頸病變程度的加重(正常宮頸→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸癌)，CK17的陽性表達(dá)率逐漸增高，其陽性表達(dá)率同宮頸病變程度呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.958，P<0.05)。

表1 CK17在不同宮頸組織中的表達(dá)(例)

3 討論

宮頸癌的致病因素現(xiàn)在已非常明確，即HPV感染。但HPV感染正常宮頸組織后，究竟如何促使正常組織向惡性轉(zhuǎn)變，目前尚不清楚。隨著研究的深入，宮頸儲備細(xì)胞在宮頸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用日益受到人們的重視。研究顯示，儲備細(xì)胞為宮頸干細(xì)胞，是HPV感染的靶細(xì)胞[1]。當(dāng)受到激素的過度刺激或某些化學(xué)毒性物質(zhì)的影響，同時(shí)合并HPV的感染，這些細(xì)胞化生的過程就會受到影響，從而向癌前病變轉(zhuǎn)化，并進(jìn)一步向鱗癌、鱗腺癌和腺癌轉(zhuǎn)化。由此可見，儲備細(xì)胞在宮頸癌的形成中發(fā)揮著重要作用。而CK17為儲備細(xì)胞的分子標(biāo)志物[1,2]，因此研究CK17在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達(dá)無論是對于疾病的診斷還是對于疾病的進(jìn)展的預(yù)測都有著重要意義。

Carrilho等[3]研究了64例患者，其中正常10例，CINⅢ10例，宮頸浸潤癌44例，結(jié)果CK17在其中的陽性表達(dá)率分別為0%、40%、73.2%，說明隨著病變進(jìn)展，CK17的表達(dá)增高，認(rèn)為CK17是宮頸惡性轉(zhuǎn)變的特異標(biāo)志物。Ikeda等[2]研究了134例患者，其中CINⅠ 39例，CINⅡ 31例，CINⅢ 43例，浸潤癌21例，結(jié)果CK17的陽性表達(dá)率分別為33.3%、58.1%、 81.4%和 95.2%，CK17陽性同CIN級別的增高相關(guān)聯(lián)，CINⅠ

雖然多數(shù)研究支持CK17的表達(dá)同CIN級別的增高有關(guān)聯(lián)，但也有研究認(rèn)為CK17的表達(dá)同CIN的級別無關(guān)[6]，甚至有研究顯示CK17在CIN中較少表達(dá)[7]。之所以研究結(jié)果有如此大的差異，有作者認(rèn)為是抗體選擇的不同和免疫組化研究方法的不同造成的[2，3]。

我們的研究結(jié)果顯示，從正常宮頸→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸癌，隨著病變程度的逐漸加重， CK17的陽性表達(dá)率逐漸增高，通過相關(guān)性分析，兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.958，P<0.05)，即宮頸病變程度越重， CK17的陽性表達(dá)率越高。由此可以認(rèn)為，通過CK17的表達(dá)情況，可以預(yù)測宮頸病變未來的發(fā)展趨勢，即表達(dá)CK17的宮頸病變，將來很有可能進(jìn)一步發(fā)展，相反，不表達(dá)CK17的宮頸病變，將來進(jìn)一步發(fā)展的可能性很小。

因此，我們認(rèn)為CK17可作為高級別CIN和宮頸癌診斷及預(yù)測病變進(jìn)展趨勢的標(biāo)志物。

[1] Martens JE,Arends J,Van der Linden PJ，et al.Cytokeratin 17 and p63 are markers of the HPV target cell，the cervical stem cell 〔J〕.Anticancer Res,2004,24(2):771.

[2] Ikeda K,Tate G,Suzuki T,et al.Coordinate expression of cytokeratin 8 and cytokeratin 17 immunohistochemical staining in cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous cell carcinoma:An immunohistochemical analysis and review of the litera- ture 〔J〕.Gynecologic Oncology,2008,108(3):598.

[3] Carrilho C,Alberto M,Buane L，et al.Keratins 8，10，13，and 17 are useful markers in the diagnosis of human cervix carcinomas 〔J〕.Hum Pathol,2004,35(5):546.

[4] Smedts F， Ramaekers FC,Vooijs PG.The dynamics of keratin expression in malign- nant transformation of cervical epithelium:a review 〔J〕.Obsetet Gynecol，1993,82(3):465.

[5] Smedts F， Ramaekers F， Link M， et al.Detection of keratin subtypes in routinely processed cervical tissue:implications for tumour classification and the study of cervix cancer aetiology 〔J〕.Virchows Archiv,1994,425(2):145.

[6] Maddox P， Sasieni P， Szarewski A， et al.Differential expression of keratins 10，17，and 19 in normal cervical epithelium,cervical intraepithelial neoplasia，and cervical carcinoma 〔J〕.J Clin Pathol，1999,52(1):41.

[7] Regauer S,Reich O.CK17 and p16 expression patterns distinguish (atypical) immature squamous metaplasia from high-grade cervical intraepithelial neoplasia (CINⅢ) 〔J〕.Histopathology,2007,50(5):629.