親和離心法檢測甲胎蛋白異質體在肝癌診斷中的臨床應用

邸曉輝，鄭 緋，徐 娟，賈志玲，劉 洋

親和離心法檢測甲胎蛋白異質體在肝癌診斷中的臨床應用

邸曉輝1，鄭 緋2，徐 娟1，賈志玲3，劉 洋4

目的采用親和離心管法檢測甲胎蛋白異質體(alpha Fetoprotein－L3，AFP－L3)，分析甲胎蛋白異質體AFPL3在診斷肝癌的臨床應用價值。方法選擇150例臨床檢測甲胎蛋白AFP陽性者(≥20 ng/ml)，使用親和離心管方法檢測甲胎蛋白異質體AFP－L3，研究檢測甲胎蛋白異質體(AFP－L3)用于臨床鑒別肝癌的作用。結果以甲胎蛋白異質體AFPL3≥10%作為診斷指標，對78例臨床確診為肝癌的患者甲胎蛋白異質體AFP－L3的診斷靈敏度是91.03%(71/78);在72例臨床診斷為其他肝臟疾病的患者甲胎蛋白異質體AFP－L3的診斷特異性達到95.83%(69/72);甲胎蛋白異質體AFP－L3的符合率為93.33%［(71+69)/150］。結論新型親和離心柱法檢測甲胎蛋白異質體AFP－L3對良、惡性肝病的鑒別診斷具有重要臨床價值。

甲胎蛋白異質體;肝癌;親和離心管法

原發性肝癌(primary carcinoma of the liver，PHC)是位列世界第五、我國第三的惡性腫瘤［1，2］，且在世界范圍內發病率逐年上升。目前臨床肝癌確診多屬中、晚期，預后較差，因此早診早治顯得尤為重要。甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)定量結合影像學檢查是目前早期發現肝癌的主要手段，但影像學受諸多因素的限制，對早期肝癌的發現率不高;AFP作為目前應用最廣泛的肝癌血清學標志物，其敏感性為60% ～80%，特異性為70% ～90%，不能滿足臨床需要［1－3］。臨床迫切需要尋找肝癌早期診斷高特異性的指標。隨著近幾十年的研究發現，AFP作為單鏈糖蛋白存在糖鏈異質性，其與植物外源性凝集素的親和力不同，依據親和力的不同可以分為3類:AFP－L1、AFP－L2、AFP－L3。其中 AFP－L1主要存在于良性肝病;AFP－L2來自孕婦，AFP－L3即甲胎蛋白異質體主要由肝癌細胞產生［2，4，5］。AFP － L3 是新一代肝癌生物學高特異性標志物。本研究采用國產AFP－L3親和吸附離心管法分離AFP－L3，并用貝克曼電化學發光免疫分析系統對2010－09至2011－01本院的150例肝癌、肝炎、肝硬化患者的血清進行了檢測，探討甲胎蛋白異質體檢測用于鑒別肝癌的臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取我院門診及住院患者150例，男135例，女15例，年齡27～77歲，平均49.8歲;其中肝癌78例，肝硬化42例，慢性活動型肝炎(慢肝)30例。以上病例均經本院肝病科明確診斷，診斷標準符合2000年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎診斷標準及中華人民共和國衛生部醫政司組織并由全國腫瘤防治辦公室與中國抗癌協會合編的《新編常見惡性腫瘤診治規范》［3，6］中有關原發性肝癌的診斷標準。

1.2 試劑和方法 AFP－L3親和吸附離心管由北京熱景生物技術有限公司提供，甲胎蛋白試劑(AFP)檢測采用貝克曼化學發光免疫分析系統(美國貝克曼庫爾特公司)。所有患者采集血清標本分離后保存在－80℃超低溫冰箱備用。

1.3 統計學處理 應用SPSS 13.0軟件進行統計分析，不同組別間AFP、AFP－L3的比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。濃度分布圖采用GraphPad Prism 5.0統計軟件進行繪制。

2 結 果

2.1 AFP、AFP－L3的水平分布 AFP≥20 ng/ml、AFP－L3≥10%做為判定肝癌陽性的標準。AFP、AFP－L3的陽性率在肝癌組差異無統計學意義，但在肝硬化組和慢肝組差異具有統計學意義(P＜0.01，表1)。

應用GraphPad Prism 5.0統計軟件分析，肝癌、肝硬化和慢肝患者AFP、AFP－L3的分布水平見圖1。

2.2 AFP、AFP－L3對肝癌的診斷價值 AFP－L3的敏感度為91.03%，與AFP敏感度(97.44%)差異無統計學意義;但 AFP－L3特異性(95.83%)與AFP的特異性(51.39%)差異有統計學意義(P＜0.01，表2)。

2.3 AFP－L3在肝癌診斷中的作用分析 AFPL3對良惡性肝病鑒別診斷性能評價見圖2。ROC的曲線下面積(AUC)為0.9760［95%可信限(CI)為0.9540 ～ 0.9979，P ＜ 0.0001］，敏感度為 91.03%(71/78)，特異性為 95.83%(69/72)，準確度為93.33%(140/150)。

表1 AFP、AFP－L3的陽性檢出率比較 (n;%)

圖1 肝癌、肝硬化及慢性活動性肝炎患者AFP、AFP－L3水平分布(A)及AFP－L3百分率(B)特征相似

圖2 AFP－L3診斷肝癌的ROC曲線ROC曲線下面積0.9760

表2 AFP、AFP－L3檢測對肝癌的診斷價值 (%)

3 討 論

我國發現的肝癌絕大部分與慢性肝炎、肝硬化有關。在這些高危人群中進行跟蹤隨訪，早期發現肝癌并及時治療可以提高5年生存率［2］。肝癌的早期診斷是基于對長期患有慢性肝臟疾病的高危人群的跟蹤篩查，目前臨床主要通過腹部超聲和血清AFP的檢測對肝癌進行早期篩查。有研究顯示，血清AFP對肝癌的陽性預測值達32%，腹部超聲的陽性預測值達54%，可以看出目前臨床所用方法對PHC的預測率不足。而AFP－L3對于肝癌的預測已經是一個非常有效的指標，其特異性達95%以上。FDA已于2005年批準檢測該指標應用于肝癌診斷［7，8］。

本研究表明，僅以AFP水平作為肝癌診斷指標時，大量的肝硬化和慢性肝炎患者會出現假陽性結果，而以AFP－L3為診斷指標時，肝癌和肝硬化、慢性活動性肝炎可以得到有效區分(P＜0.01)。AFP－L3鑒別良惡性肝病的ROC曲線下面積為0.9760，敏感度為 91.03%，特異性為 95.83%。說明以AFP－L3≥10%為鑒別診斷指標時，肝癌和良性肝病可以得到明顯區分。

目前，AFP－L3檢測常用的方法有植物凝集素免疫交叉電泳技術，該方法技術要求高、操作繁瑣、試劑昂貴，限制了AFP－L3檢測在臨床的應用。本研究采用親和離心管法檢測AFP－L3，原理為采用親和離心柱技術分離出AFP－L3，然后再定量測定樣本中AFP和AFP－L3含量，兩者相比較即可得到患者血清中AFP－L3的比例，用于診斷肝癌。該方法實驗室配套儀器只需要常溫低速離心機即可，方法簡便，操作簡單，標本處理時間約為1 h，比原來電泳方法大大縮短了時間。標本處理后可以用多種AFP定量檢測試劑檢測，成本較低，同時結果準確，適合臨床應用［9，10］。

總之，對肝癌的準確診斷是提高患者生存率和生活質量的重要前提。本研究利用親和離心柱法檢測AFP－L3，操作簡便且節約了成本，用于肝癌的診斷有較好的敏感性和特異性。

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The detection of alpha－fetoprotein isoforms using with centrifugal column method in diagnosis of hepatocelluar carcinoma

DI Xiaohui1，ZHENG Fei2，XU Juan1，JIA Zhiling3，and LIU Yang4.1.Department of Pharmacology，Beijing Military Command General Hospital，BeiJing 100700，China;2.Department of pharmacy，No 302 Hospital of PLA，Beijing 100024，China;3.Department of oncology laboratory，Beijing Military Command General Hospital，BeiJing 100700，China;4.Department of Pharmacy，the General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces，Beijing 100039，China

ObjectiveTo explore the clinical significance of alpha－fetoprotein－L3%(AFP－L3)with centrifugal column method in the diagnosis of hepatocelluar carcinoma.Methods The serum samples of 150 patients with elevated AFP level(≥20 ng/ml)were detected by chemiluminescence immunoassay for AFP and centrifugal column method for AFP －L3，and the clinical value of AFP－L3 were studied in the differentiation diagnosis of hepatocelluar cancer.Results Taking AFP－L3≥10 ng/ml as the diagnositic criteria，the sensitivity of AFP － L3 was 91.03%(71/78)in 78 hepatocellular carcinoma patients and the specificity of AFP － L3 was 95.83%(69/72)in 72 other liver diseases patients.The diagnostic accuracy was 93.33% ［(71+69)/150］.Conclusion Detection of AFP －L3 seemed be of clinical value in benign or malignant liver disease.

alpha－fetoprotein isoforms;hepatocelluar;carcinoma;centrifugal column method

R446.112

邸曉輝，女，1961年出生。本科學歷，副主任藥師。主要從事新藥臨床研究工作。

1.100700 北京，北京軍區總醫院藥理科;2.100024 北京，解放軍302醫院藥學部;3.100700 北京，北京軍區總醫院腫瘤科實驗室;4.100039 北京，武警總醫院藥劑科

劉 洋，E－mail:c2205@yahoo.cn

(2012－03－11收稿 2012－08－16修回)

(責任編輯 梁秋野)