生姜與胡椒組合物對癌癥放、化療的減毒增效作用*

汪 川 高 昂 李 靜 楊志宏 岳 旺 張繼國

1.青島大學醫學院附屬醫院，山東 青島 2660021；2. 山東科技大學校醫院，山東 泰安 271000；3.青島大學醫學院藥學系，山東 青島 2660021；4.泰山醫學院藥理教研室，山東 泰安 271016

癌癥患者須接受放、化療常規治療，雖有療效，但均有嚴重毒副作用，其中最常見的副作用是惡心、嘔吐等胃腸道的反應，可能造成營養不良、電解質紊亂甚至因劇烈嘔吐放棄治療。目前，臨床常用的止吐藥包括NK1和5-HT3受體拮抗劑、激素等，價格昂貴，使用范圍窄且毒副反應大[1-2]，因此期待天然減毒增效藥物的研制。

中藥姜(zingiber)被譽為“嘔吐圣藥”[3]。姜辣素是從姜中提取的活性成份，本發明人觀察到姜辣素可對抗無機及有機毒物硫酸銅和順鉑所致嘔吐，并抑制腸道嗜鉻細胞釋放致吐因子5-HT和P物質，姜辣素作用于化療嘔吐最相關的NK1和5-HT3等受體[4]，為多靶點、天然低毒止吐藥。胡椒為胡椒科植物胡椒(Pipernigrum L)的成熟果實，味辛、熱；有溫中下氣、和胃止嘔的功效，主要用于治療胃寒嘔吐、腹痛泄瀉等。近年來生姜和白胡椒的抗癌作用已有報道[5]，本實驗經過大量的各配方比例的研究和實驗以及臨床實踐，最后獲得了最佳藥物比例組合物，并證明了其對癌癥放、化療引起的嘔吐等副作用有較好的療效并能同時起到輔助抑制腫瘤的效果。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

(1) 昆明種小鼠，體重20±2 g，由由青島市藥檢所實驗動物中心提供。實驗前自由進食飲水，24 h自然光照射。

(2) 健康成年水貂，體重1.3～1.8kg，雄性，由青島特種養殖動物飼養中心提供，每只動物單獨置于75 cm×50 cm×50 cm的鐵籠中，24 h自然光照射，實驗前自由進食飲水。

1.2 主要試劑

(1) 白胡椒，由青島眾生大藥房購買并由山東中醫藥大學錢秋海教授鑒定為胡椒科植物胡椒(Pipernigrum L)的成熟果實。生姜，購于山東平度，由本學院技術室主任鑒定為姜科植物姜的塊莖。

(2) 順鉑(cisplatin)，山東齊魯制藥廠生產，批號：903005CE。

(3) 鹽酸昂丹司瓊注射液，奧賽康制藥，批號：090102。

(4) 環磷酰胺，江蘇恒瑞醫藥制藥股份有限公司產品。

1.3 實驗方法

1.3.1天然藥物組合物治療嘔吐作用的藥效學研究

將水貂隨機分為7組，每組6只，A組為姜辣素組，B組為白胡椒水提取物組，C組為姜辣素與白胡椒水提取物配伍組(比例為5∶8)，D組為生姜白胡椒水煎濃縮提取物，E組為本發明的天然藥物組合物(生姜白胡椒水煎濃縮提取物、姜辣素、白胡椒水提取物與胡椒堿按3∶5∶8∶9比例混合)，F組為順鉑陽性對照組，G組為昂丹司瓊組。A組先以姜辣素10g·kg-1(相當于含生藥量)ig預處理，30 min給予順鉑7.5 mg·kg-1ip；B組給予白胡椒水提取物10g·kg-1(相當于含生藥量)ig預處理，30 min給予順鉑7.5 mg·kg-1ip；C組給予姜辣素與白胡椒水提取物配伍藥物10g·kg-1(相當于含生藥量)ig預處理，30 min給予順鉑7.5 mg·kg-1ip；D組給予生姜白胡椒水煎濃縮提取物10g·kg-1(相當于含生藥量)ig預處理，30 min給予順鉑7.5 mg·kg-1ip；E組給予本發明的天然藥物組合物10g·kg-1(相當于含生藥量)ig預處理，30 min給予順鉑7.5mg·kg-1ip；F組給予生理鹽水，30 min給予順鉑7.5 mg·kg-1ip；G組先以昂丹司瓊組7.5 g·kg-1預處理，30 min給予順鉑7.5 mg·kg-1ip。為觀察水貂在給藥后6h內的嘔吐反應，記錄其嘔吐潛伏期，干嘔及嘔吐次數。

1.3.2天然藥物組合物抗腫瘤作用的藥效學研究

(1)對小鼠S180肉瘤生長的抑制實驗

采用傳代5-7天，生長良好的乳白色腹水，以適量無菌生理鹽水稀釋成瘤細胞懸液，細胞數為107/ml，每組12只，每鼠右腋窩皮下接種0.2 ml(含瘤細胞2×106個)。接種次日隨機分組，實驗組將本發明的天然藥物組合物分為(400，200，100 mg·ml-1)三個劑量組，每鼠灌胃0.5 ml；陰性對照組給予0.5 ml蒸餾水；陽性藥物組給予環磷酰胺20 g·kg-1·d-1，連續給藥10天。常規飼養，飲水，食物不限。停藥次日，小鼠全部脫頸椎處死，剝取皮下實體瘤瘤塊，稱重，按下列公式計算腫瘤抑制率(%)：

腫瘤抑制率=〔對照組平均瘤重(C)-實驗組平均瘤重(T)〕/對照組平均瘤重(C)

(2)對小鼠肝癌H22生長的抑制實驗

分組、劑量、給藥方式、實驗時間與S180肉瘤株相同。

(3)對小鼠艾氏腹水瘤(實體瘤)的抑制實驗

分組、劑量、給藥方式、實驗時間與S180肉瘤株相同。

1.3.3天然藥物組合物對于化療藥物抗腫瘤增效作用的藥效學研究

(1)對小鼠S180肉瘤生長的抑制實驗

采用傳代5～7天，生長良好的乳白色腹水，以適量無菌生理鹽水稀釋成瘤細胞懸液，細胞數為107/mL，每組12只，每鼠右腋窩皮下接種0.2 ml(含瘤細胞2×106個)。接種次日隨機分組，實驗組將本發明的天然藥物組合物分為(10，5，2.5g·kg-1)三個劑量組，每鼠灌胃0.5 ml，同時給予環磷酰胺10g·kg-1·d-1；陰性對照組給予0.5 ml蒸餾水；陽性藥物組給予環磷酰胺20 g·kg-1·d-1，連續給藥10天。常規飼養，飲水，食物不限。停藥次日，小鼠全部脫頸椎處死，剝取皮下實體瘤瘤塊，稱重，按下列公式計算腫瘤抑制率(%)：

腫瘤抑制率=〔對照組平均瘤重(C)-實驗組平均瘤重(T)〕/對照組平均瘤重(C)

(2)對小鼠肝癌H22生長的抑制實驗

分組、劑量、給藥方式、實驗時間與S180肉瘤株相同。

(3)對小鼠艾氏腹水瘤(實體瘤)的抑制實驗

分組、劑量、給藥方式、實驗時間與S180肉瘤株相同。

2 結 果

2.1 天然藥物組合物治療嘔吐作用的藥效學研究

與對照組比較，各治療組均能減輕干嘔及嘔吐次數并延長嘔吐潛伏期(P<0.05，P<0.01)。姜辣素組、姜辣素與白胡椒水提取物配伍組，生姜白胡椒水煎濃縮提取物組，及本天然藥物組合物能夠降低致嘔率。其中生姜白胡椒水煎濃縮提取物組與昂丹司瓊組相同；而本天然藥物組合物組致嘔率低于昂丹司瓊組。結果見表1。

表1 天然藥物組合物對順鉑(7.5 mg·kg-1，ip)致嘔作用的影響(n=6，)

注：a相當于含生藥量，與對照組比較，cP<0.01

2.2 天然藥物組合物抗腫瘤作用的藥效學研究

本天然藥物組合物三個劑量組對S180、H22、EAC與陰性對照組比較，均有不同程度抑制作用，尤其以高劑量組對腫瘤的抑制率最高。(如表2、3、4)

表2 天然藥物組合物對S180小鼠的腫瘤抑制作用(n=12，)

注：與陰性對照組比較，bP<0.05，cP<0.01

表3 天然藥物組合物對H22小鼠的腫瘤抑制作用(n=12，)

注：與陰性對照組比較，cP<0.05

表4 天然藥物組合物對EAC小鼠的腫瘤抑制作用(n=12，)

注：與陰性對照組比較，bP<0.05，cP<0.01

2.3 天然藥物組合物對于化療藥物抗腫瘤增效作用的藥效學研究

在降低環磷酰胺用藥劑量的情況下，本發明天然藥物組合物三個劑量與環磷酰胺聯合用藥組對S180、H22、EAC與陰性對照組比較，均有不同程度抑制作用，尤其以高劑量組對腫瘤的抑制率最高。(如表5、6、7)

表5 天然藥物組合物對S180小鼠的腫瘤抑制作用(n=12，)

注:與陰性對照組比較，bP<0.05，cP<0.01

配伍藥組高：環磷酰胺10 g·kg-1+組合物10 g·kg-1；配伍藥組中：環磷酰胺10g·kg-1+組合物5 g·kg-1；配伍藥組低：環磷酰胺10 g·kg-1+組合物2.5 g·kg-1，下同。

表6 天然藥物組合物對H22小鼠的腫瘤抑制作用(n=12，)

注：與陰性對照組比較，bP<0.05

表7 天然藥物組合物對EAC小鼠的腫瘤抑制作用(n=12)

注：與陰性對照組比較，bP<0.05，cP<0.01

3 討 論

雪貂(mustela pulourius furo)是國際公認的嘔吐模型的實驗動物，水貂與雪貂同屬鼬科家族，價格便宜，易飼養，可制備一種新型的嘔吐模型[6-8]。雌性水貂周期性分泌雌性激素，雌性激素對嘔吐反應有影響。因此，本文選用雄性水貂來驗證組合物的抗嘔吐作用。

腫瘤化療性嘔吐(chemotherapy-induced nausea and vomiting，CINV)是腫瘤患者在化療過程中最常見的不良反應。CINV發生機制復雜，目前大多數研究者認為其發生機制主要包括以下兩個方面。①細胞毒性藥物刺激胃腸道，引起胃腸道內的嗜鉻細胞分泌5-HT，作用于5-HT受體產生神經沖動由迷走傳人神經傳人嘔吐中樞導致嘔吐[9-10]。②化療藥物及其代謝產物刺激嘔吐化學感受器觸發區(Chemorecepor Trigger Zone，CTZ)[11]，CTZ位于腦干的最后區(area postrema)，因其不被血液屏障保護，所以血液內的多種有害物質可作用于此，并將信號傳遞到嘔吐中樞導致嘔吐。CTZ對多種刺激起反應，這些刺激通過一系列受體起作用，主要有5-HT3受體、多巴胺受體、組胺受體、毒蕈堿受體，大多數的鎮吐藥也主要是通過作用于一個或多個受體起作用的。生姜有效成分姜辣素的鎮吐作用機制比較明確，可通過作用于NK1和5-HT3受體發揮作用[3]。胡椒的鎮吐作用雖有文獻報道，但機制不十分明確，本實驗把二者結合起來經過反復試驗確定了二者發揮抗嘔吐作用的最佳比例。

S180、H22、EAC是研究藥物抗腫瘤作用的常用動物模型。本實驗觀察了天然藥物組合物對這三種常見腫瘤的作用。生姜的抗癌作用及機制已有較多的報道，其抗癌作用也被大家認可，胡椒的抗癌作用研究較少，僅有少數文獻[12]報道了它有抗癌作用。本實驗把這兩種藥物組合在一起在三種腫瘤細胞上觀察它們的抗腫瘤作用，同時并具有顯著抗嘔吐作用。

綜上所述，本天然藥物組合物對癌癥放化療具有減毒增效作用，這為進一步研究天然、低毒、多靶點的抗嘔吐的中藥提供了實驗基礎。

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