大孔樹脂在兩性霉素B原料藥純化工藝中的應用研究

張玉蓮 黃君勤 池王胄 宋庭 馬亦蓉

（上海新先鋒藥業有限公司 上海 201203）

兩性霉素B為多烯類抗真菌藥物，臨床上用于治療深部真菌引起的內臟或全身感染。隨著醫療水平的提高，器官移植和腫瘤切除等重大手術越來越普遍，真菌深部感染的發生率也隨之上升。上海新先鋒藥業有限公司是專業生產兩性霉素B原料藥及其制劑注射用兩性霉素B和注射用兩性霉素B脂質體的企業，其中注射用兩性霉素B脂質體是國內獨家生產品種。為進一步提升產品質量，本研究利用不同極性的樹脂[1]對兩性霉素B原料藥中雜質的選擇吸附性對兩性霉素B進行純化，有效降低了兩性霉素B原料藥中的相關物質含量，同時提高了產品收率。

1 材料和儀器

各型號大孔樹脂[2]；兩性霉素B原料藥（上海新先鋒藥業有限公司生產）；600 mm×50 mm層析柱；高效液相色譜儀（Agilent 1100）；YZ 156恒流泵；磁力攪拌器；恒溫水浴鍋；N, N-二甲基甲酰胺、乙醇、甲醇、丙酮等（均為工業級試劑）。

2 實驗與結果

2.1 單個樹脂篩選

根據兩性霉素B的性質及生產需要進行用于雜質吸附的單個樹脂型號篩選研究：先對文獻報道雜質吸附效果好的樹脂進行靜態篩選，然后用通用方法對初步篩選出的20余種樹脂進行預處理并用常用樹脂柱參數進行過柱實驗（表1），確定了對兩性霉素B原料藥中不同雜質吸附效果好的幾種樹脂型號。

表1 不同型號樹脂對雜質的靜態吸附

從表1可以看出，經過M-1或M-2樹脂吸附后的兩性霉素B原料藥中的總雜質含量均降低了約2%，最大單一雜質含量也明顯下降。因此，用大孔樹脂吸附兩性霉素B原料藥中的雜質可行且效果顯著。

2.2 最佳柱徑比及樹脂倍數確定

2.2.1 柱徑比篩選

選擇柱徑比分別為500 mm：20 mm、500 mm：30 mm、500 mm：40 mm、500 mm：50 mm、500 mm：60 mm和500 mm：70 mm的M-2樹脂柱，在同等樹脂倍數、上樣溫度、pH和過濾速率條件下動態過柱[3]，考察經樹脂吸附后的兩性霉素B原料藥中的總雜質含量下降的百分數，最終擇優選擇的最佳柱徑比為500 mm：60 mm（表2）。

表2 柱徑比對總雜質含量下降的影響

2.2.2 樹脂倍數篩選

同等條件下，分別單獨在吸附效果較好的M-2樹脂柱中加入10、20、30和40倍產品量的大孔樹脂，根據雜質下降的實驗結果選定吸附效果最佳的樹脂倍數，然后用更小的等分法進行同等條件下的實驗，實驗結果見表3和表4。

表3 不同量M-2樹脂對雜質吸附的影響（初篩）

表4 不同量樹脂對雜質吸附的影響（復篩）

從實驗數據可以看出，30倍產品量的樹脂為最佳雜質吸附樹脂倍數。繼續用30倍產品量的樹脂進行4組重現性雜質吸附實驗，實驗結果見表5。

表5 重現性實驗數據

通過數據對比可以看出，30倍產品量的最佳樹脂倍數和500 mm：60 mm的最佳柱徑比的確定能進一步優化樹脂對兩性霉素B原料藥中的雜質吸附效果。

2.3 混合樹脂組合及其比例的篩選

各種實驗結果都表明，樹脂對兩性雜質的吸附效果明顯，但不同型號的樹脂吸附的雜質種類不盡相同。因此，利用不同型號樹脂對兩性霉素B原料藥中雜質的選擇吸附性，用蠕動泵控制樹脂柱中溶液的添加速率，在30倍產品量的混合樹脂和500 mm：60 mm的柱徑比條件下進行混合樹脂對兩性霉素B原料藥中雜質的吸附實驗，結果發現混合樹脂M-1+M-2、M-3+M-4、M-5+M-6的吸附效果較好（表6）。

表6 混合樹脂對雜質吸附的影響

從表6可以看出，M-1+M-2樹脂組合的吸附效果最佳，故在30倍產品量的混合樹脂和500 mm：60 mm的柱徑比條件下進一步研究M-1和M-2兩種樹脂在以不同比例混合時對兩性霉素B原料藥中雜質的吸附效果。實驗結果（表7）表明，在各吸附條件基本恒定的情況下，當樹脂混合比例為M-1：M-2為4：6時，其吸附兩性霉素B原料藥中雜質的效果較優。

表7 樹脂混合比例對雜質吸附的影響（初篩）

繼續在M-1∶M-2為4∶6的比例周圍進行細等分比例實驗，研究吸附兩性霉素B原料藥中雜質效果最優的M-1和M-2兩種樹脂的混合比。實驗結果（表8）表明，在M-1：M-2為3.6：6.4時，混合樹脂對兩性霉素B原料藥中雜質的吸附效果[4]最好，總雜質含量下降3.30%、最大單一雜質含量下降0.82%，較其它比例的混合樹脂的雜質吸附效果都更顯著。

表8 樹脂混合比例對雜質吸附的影響（復篩）

3 結語

本研究依據不同極性的大孔樹脂的選擇吸附性，探討了其在兩性霉素B原料藥純化工藝中的應用效果。經深入研究不同極性樹脂對兩性霉素B原料藥中雜質[5]的特異性吸附作用，將不同型號的樹脂按最佳比例混合，以便有針對性、有選擇性地吸附兩性霉素B原料藥中的雜質。本研究方法可顯著降低兩性霉素B原料藥中的相關物質、進一步提高兩性霉素B原料藥的質量，同時也能避免常規大孔樹脂應用中存在的吸附周期長、中間過程控制麻煩、洗脫難和樹脂重利用率低等問題。

[1] 張英, 李衛民, 賴愛芬. 大孔樹脂型號與規格的規范化探討[J]. 高分子, 2009, 11(11): 44-48.

[2] 李善吉, 伍勝君. 大孔樹脂的應用研究概況[J]. 廣東輕工職業技術學院學報, 2005, 4(2): 11-13.

[3] 王一敏, 任曉蕾. 大孔樹脂的應用研究[J]. 中醫藥信息, 2008, 25(4): 26-28.

[4] 王海燕, 李曉露, 王健, 等. 大孔樹脂法分離純化那他霉素的工藝研究[J]. 中國抗生素雜志, 2005, 35(12): 194-201.

[5] 王雷, 田青平, 謝茵. 兩性霉素B平衡溶解度和表觀油水分配系數的測定[J]. 山西醫科大學學報, 2007, 38(12): 1082-1084.