胸4～5椎間隙直視下硬膜外頭端置管建立上胸段硬膜外阻滯大鼠模型

馬新宇，李 玄，霍 星

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院 麻醉科，哈爾濱 150040)

早在1966年Otton PE，Wilson EJ．等就報(bào)道過胸段硬膜外阻滯(high thoracic epidural anaesthesia，HTEA)通過降低心率和心肌應(yīng)答改善心臟功能作用［1］。作為一種傳統(tǒng)的方法 HTEA應(yīng)用于多數(shù)胸腹手術(shù)和創(chuàng)傷病人［2］，并提供有效的術(shù)后鎮(zhèn)痛［3-4］。比起單純?nèi)椋榧親TEA能減少心、肺相關(guān)的死亡率［5-6］。近年來，HTEA在外科學(xué)、婦產(chǎn)科、急慢性損傷、癌痛治療等方面得到廣泛應(yīng)用。大量報(bào)道顯示它能提供良好的術(shù)中及術(shù)后鎮(zhèn)痛，加快胃腸功能恢復(fù)，減輕應(yīng)激反應(yīng)及改善術(shù)后心、肺功能。為探尋它的作用機(jī)制及應(yīng)用，HTEA動(dòng)物模型相關(guān)的實(shí)驗(yàn)逐年增多，建立模型的方法各具特色，本模型在前期試驗(yàn)［7］的基礎(chǔ)上，經(jīng) T 4～5向頭端置管建立胸段硬膜外阻滯大鼠模型，主要對(duì)導(dǎo)管制作和固定方法及管理措施加以改進(jìn)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物選擇

清潔級(jí)健康成年雄性Wistar大鼠(250～300)g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(黑)2006-010)。

1.2 材料準(zhǔn)備

剪取經(jīng)拉撕并細(xì)針造孔后的外徑為0.6 mm的臨床用硬膜外導(dǎo)管(由哈醫(yī)大三院麻醉科提供)約8 cm，導(dǎo)管頭端標(biāo)記1.5 cm置入長(zhǎng)度，另一端留取原管外徑長(zhǎng)度1 cm，與臨床用硬膜外導(dǎo)管接頭連接，消毒備用。

1.3 硬膜外導(dǎo)管置入與固定

大鼠腹腔注射10%水合氯醛0.3 mL/100 g麻醉后，俯臥位固定，將胸部用軟墊稍墊起，以T4-6棘突為中心備皮、消毒，縱行切開皮膚約1～1.5 cm，以T2椎體為標(biāo)志，暴露T4-5棘突及其韌帶，用眼科剪刀銳性剪開棘上韌帶、棘間韌帶并暴露黃韌帶，由助手持小鑷子將T4棘突稍向頭側(cè)上方提起，用7號(hào)注射器針頭挑開黃韌帶，因大鼠解剖差異，分離棘突間韌帶時(shí)很容易損傷附近血管，尤其是挑開黃韌帶時(shí)，術(shù)前備黃豆粒大小棉球若干，助手提起胸4椎體棘突良好暴露，可見白色硬膜，導(dǎo)管置入前頭端涂抹少量液體石蠟潤(rùn)滑。導(dǎo)管椎旁肌肉縫扎固定時(shí)，結(jié)扎松緊適度。尾向牽拉皮膚測(cè)量皮下隧道導(dǎo)管緩沖長(zhǎng)度2～3 cm，引出皮膚處固定，松緊適度，并確認(rèn)導(dǎo)管未堵塞。將已備好并處理后的硬膜外導(dǎo)管直視下向頭端緩慢置入硬膜外腔1.5 cm。導(dǎo)管經(jīng)皮下隧道留出2～3 cm緩沖長(zhǎng)度，另一端引出背部，接微量注射泵或注射器。逐層固定后，先抽取0.9%生理鹽水50 μL注入硬膜外導(dǎo)管，確認(rèn)沒有堵塞后吸出管內(nèi)鹽水，并注入加導(dǎo)管容量(平均為 60 μL)的 1% 里多卡因 100 μL/kg，15 min 后大鼠可出現(xiàn)上肢松軟，胸腹部松弛，有的可見眼瞼下垂，蘇醒后大鼠活動(dòng)正常，表明無明顯的脊髓或神經(jīng)損傷，可明確導(dǎo)管位于硬膜外腔，尸檢可見導(dǎo)管頭端位于T1～3，注入等量1%亞甲藍(lán)，其染色范圍在頸段至T5節(jié)段視為模型成功。硬膜外注藥前測(cè)量出接頭及導(dǎo)管的容量，約60 μL。因大鼠較小，故術(shù)野小，手術(shù)操作過程中避免擠壓其胸部，經(jīng)常觀察大鼠呼吸，當(dāng)出現(xiàn)呼吸不暢如痰鳴鼻塞等氣道分泌物增多時(shí)，可用干棉球擦拭鼻部，或用接20 mL注射器的小軟管于大鼠口咽部吸引1～2次，呼吸通暢后繼續(xù)手術(shù)操作。硬膜外注藥期間，如出現(xiàn)導(dǎo)管脫出，感染，堵塞及意外死亡棄之不用。

2 結(jié)果

試驗(yàn)終止共用大鼠120只，2例在導(dǎo)管置入后注藥3 min呼吸心跳驟停，后解剖發(fā)現(xiàn)導(dǎo)管置入硬膜下，明確為全脊髓麻醉所致;4例在操作過程中呼吸抑制致意外死亡;2例在硬膜外給藥后出現(xiàn)痙攣抽搐后呼吸心跳驟停死亡;6例導(dǎo)管脫出;3例導(dǎo)管堵塞;103只成功，成功率85.8%，硬膜外腔感染率為0，導(dǎo)管脫出率5%。

3 討論

上胸段硬膜外阻滯可能的作用機(jī)制是通過阻滯相應(yīng)節(jié)段軀體神經(jīng)和交感神經(jīng)傳入和傳出纖維的興奮傳導(dǎo)，產(chǎn)生阻滯區(qū)域感覺、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)麻痹和交感神經(jīng)功能障礙。近年來，應(yīng)用動(dòng)物試驗(yàn)建立硬膜外阻滯模型逐漸豐富起來，并且成功與否直接影響與其相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究，細(xì)致的操作充分的準(zhǔn)備是關(guān)鍵。其中豬，狗，家兔等費(fèi)用較高，可能造成資源浪費(fèi)，或因某些特殊研究需較大樣本量而局限。大鼠模型操作簡(jiǎn)便，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。目前大鼠胸段硬膜外置管的 方 法 有:T6-7［8］，L3-4［9］頭 端 置 管、寰 枕 關(guān)節(jié)［10］及寰樞關(guān)節(jié)尾端置管［11］等。T6-7方法在實(shí)際操作中暴露硬膜困難，置管后導(dǎo)管固定不牢靠，易脫出，導(dǎo)管置入深度較長(zhǎng)約3 cm，硬膜損傷幾率增加。L3-4置管到T6椎體距離長(zhǎng)，損傷脊髓及神經(jīng)或置入蛛網(wǎng)膜下腔的幾率大大增加，后兩種方法可因大鼠解剖差異而使得阻滯范圍偏向胸中段或下段。活體大鼠在硬膜外持續(xù)治療期間，硬膜外導(dǎo)管穩(wěn)定性是持續(xù)硬膜外模型的另一關(guān)鍵，本模型采用硬膜外導(dǎo)管置入點(diǎn)肌肉和皮膚的雙重固定，皮下留出緩沖長(zhǎng)度，以及單籠飼養(yǎng)等方法基本保證治療期間的導(dǎo)管穩(wěn)定性，適量抗生素及無菌操作技術(shù)的應(yīng)用確保了治療期間的低感染率。通過活體硬膜外腔注入100 μL/kg美藍(lán)，尸檢染色范圍在頸段至T5節(jié)段之間表明硬膜外劑量與阻滯范圍。

本試驗(yàn)通過胸4～5間隙頭端置管并特殊導(dǎo)管固定方法建立大鼠的胸段硬膜外阻滯模型證實(shí)了此模型的可行性，并具有損傷小，穩(wěn)定性好，成功率高，費(fèi)用低、周期短等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)也顯示了模型大鼠的術(shù)后管理措施及試驗(yàn)治療的可行性，對(duì)于從事HTEA動(dòng)物實(shí)驗(yàn)工作者有借鑒意義，使HTEA的作用機(jī)制及對(duì)各系統(tǒng)疾病作用的深入研究成為可能。

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