GC 法同時(shí)測(cè)定婦科十味片中α-香附酮和藁本內(nèi)酯

王紅，韓曉萍

(青海省食品藥品檢驗(yàn)所，青海西寧810016)

婦科十味片屬于婦科常用藥，具有疏肝理氣、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)之功效，用于血虛肝郁所致月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、月經(jīng)前后諸證［1］。處方中包括香附、川芎、當(dāng)歸、元胡、白術(shù)、甘草、紅棗、白芍、赤芍、熟地黃、碳酸鈣等十一味藥，在現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［2］中，【鑒別】項(xiàng)下僅有當(dāng)歸、川芎，香附和芍藥苷的TLC鑒別;【含量測(cè)定】項(xiàng)下對(duì)白芍和赤芍中的芍藥苷進(jìn)行了HPLC測(cè)定，無法全面有效控制藥品的質(zhì)量。文獻(xiàn)檢索表明，有學(xué)者用HPLC法分別對(duì)其中的延胡素乙素，阿魏酸和α-香附酮進(jìn)行定量測(cè)定研究［3-5］。但此處方中含有大量的揮發(fā)性藥材，如香附、當(dāng)歸、川芎等，其中香附為占總方比重約50%，為方中君藥，生粉投料;而當(dāng)歸和川芎作為臨床常用補(bǔ)血活血之藥對(duì)［6］，處方量約為20%，為部分生粉投料。為了更好地控制這部分物質(zhì)在制劑中的存在情況，本研究采用GC法對(duì)婦科十味片中的α-香附酮和藁本內(nèi)酯進(jìn)行了定量測(cè)定研究，方法可行，質(zhì)量可控。

1 儀器和試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器(美國(guó)珀金埃爾默公司)，Agilent 5973型質(zhì)譜檢測(cè)器;HH-6溫控水浴鍋(國(guó)華電器有限公司);KQ5200型超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

α-香附酮(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供，批號(hào)為A0588，HPLC法分析純度≥98%);藁本內(nèi)酯(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供，批號(hào)為A0219，HPLC法分析純度≥98%);婦科十味片樣品(市售，3個(gè)廠家，分別編號(hào)為S1、S2、S3、)。正己烷、乙酸乙酯均為色譜純，乙醚為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱為hp-5 ms毛細(xì)管柱(60 m×0.32 mm×0.25 μm)，進(jìn)樣口溫度280℃，升溫程序?yàn)?初始溫度45℃，保持2.0 min，再以40℃/min升溫至160℃，保持2.0 min，再以1.0℃/min升溫至180℃，保持2.0 min，再以4.0℃/min升溫至260℃，保持2.0 min，分流比30∶1，載氣(氮?dú)?體積流量:1.5 mL/min。檢測(cè)器溫度300℃，H2流量:45 mL/min，空氣體積流量:450 mL/min，靈敏度倍數(shù)為1［7-9］。

2.2 對(duì)照品溶液的制備稱取α-香附酮、藁本內(nèi)酯各約10 mg，精密稱定分別為10.23 mg、11.58 mg，置于5 mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液(每1 mL含α-香附酮、藁本內(nèi)酯分別為2.046 mg、2.316 mg)。

2.3 樣品溶液制備取本品10片(薄膜衣片除去包衣)，研細(xì)，精密稱取1.5 g，置于索氏提取器中，加入乙醚50 mL，索氏提取3 h，提取液置于蒸發(fā)皿中，并用10 mL乙醚洗滌索氏提取器，合并兩次的乙醚液，低溫?fù)]干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙廪D(zhuǎn)移至2 mL量瓶中，定容，搖勻，過濾即可［10］。

2.4 測(cè)定法分別精密吸取上述溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。測(cè)定色譜圖見圖1，結(jié)果表明，此色譜條件分離良好。

圖1 藁本內(nèi)酯(A)、α-香附酮(B)、乙酸乙酯空白溶劑(C)和供試品溶液(D)色譜圖Fig.1 Chromatograms of α-cyperone(A)，ligustilid(B)，ethyl acetate(C)and sample(D)

2.5 專屬性試驗(yàn)用GC-MS方法對(duì)上述兩種溶液中的兩個(gè)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行了一致性確認(rèn)。GC參數(shù)同上，MS部分［11］:溶劑延遲2 min，EI源，電子能量70eV，掃描范圍:50～500 m/z，GC-MS結(jié)果確認(rèn)了供試品溶液中的目標(biāo)峰和對(duì)照品溶液的一致性，表明在相應(yīng)檢測(cè)時(shí)間處無雜質(zhì)峰干擾。

2.6 方法學(xué)考察取同一廠家婦科十味片(S1)進(jìn)行分析測(cè)定，對(duì)其進(jìn)行方法學(xué)考察。

2.6.1 線性范圍考察分別精密吸取上述對(duì)照品貯備溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL置于2 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀釋并定容至刻度，制備成一系列的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行分析測(cè)定，以峰面積和進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1，表明各對(duì)照品在進(jìn)樣范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性。

表1 線性考察結(jié)果Tab.1 Results of linearity test

2.6.2 精密度考察取同一對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得α-香附酮、藁本內(nèi)酯的峰面積，計(jì)算得RSD分別為0.84%、0.78%，試驗(yàn)表明該方法精密度良好。

2.6.3 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品5份，按正文擬定的方法進(jìn)行測(cè)定分析，結(jié)果α-香附酮平均含量為0.323 3 mg/片、RSD為0.56%;藁本內(nèi)酯平均含量為0.375 9 mg/片、RSD為0.81%，結(jié)果表明，本方法的重復(fù)性較好。

2.6.4 穩(wěn)定性考察取同一供試品溶液，分別在制備后的0、4、8、14、20、26、32 h進(jìn)樣測(cè)定，分別測(cè)得α-香附酮、藁本內(nèi)酯的峰面積，其RSD依次分別為0.84%、0.68%，試驗(yàn)表明在32 h內(nèi)，α-香附酮和藁本內(nèi)酯的穩(wěn)定性良好。

2.6.5 加樣回收率測(cè)定精密稱取已知含有量的樣品6份，每份約0.75 g，精密稱定，各分別加入一定量的α-香附酮、藁本內(nèi)酯對(duì)照品，按2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2，結(jié)果表明本方法回收良好。

2.7 樣品測(cè)定按上述建立好的方法對(duì)3批市售樣品中的該兩種成分進(jìn)行定量測(cè)定，結(jié)果見表3。

3批樣品的含量均在線性范圍之內(nèi)，試驗(yàn)表明市售不同廠家的婦科十味片中α-香附酮和藁本內(nèi)酯的含有量差異較大，為保證藥品療效，需要進(jìn)一步建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)范。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of recovery test

表3 樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)Tab.3 Results of sample determination(n=3)

3 討論

3.1 對(duì)于所采用的α-香附酮和藁本內(nèi)酯對(duì)照品，標(biāo)示為HPLC級(jí)別，在研究中我們采用進(jìn)行了峰面積歸一化法標(biāo)示，發(fā)現(xiàn)在GC分析中兩者的純度僅為90%左右，因僅為研究性分析，故最終樣品含量未進(jìn)行折算。

3.2 樣品提取方法考察在提取溶劑的考察上，不僅對(duì)正己烷、乙酸乙酯、乙醚等溶劑的單獨(dú)提取情況進(jìn)行了考察，而且也考察了乙醚-正己烷(1∶1)混合溶劑［12］;在提取方法和時(shí)間的考察上分別研究了浸泡、超聲、振蕩和索氏提取法，綜合整個(gè)GC圖譜及方法可操作性，最終選定樣品處理方法為乙醚索氏提取3 h、低溫?fù)]干后，乙酸乙酯定容分析。

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