氨茶堿對COPD穩定期患者誘導痰中IL-17、IL-8及中性粒細胞的作用

符丹丹，歐陽瑤

(遵義醫學院附屬醫院，貴州遵義563000)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)發病機制尚不清楚，其炎癥機制在其發病過程中起著重要的作用。研究表明，中性粒細胞的活化和聚集是COPD發病的一個重要環節［1］。IL-17與IL-8在中性粒細胞的活化和聚集中起重要作用。大量的研究發現，IL-17、IL-8及中性粒細胞在COPD炎癥過程中發揮著非常重要的作用，但這些研究都局限于COPD急性加重期。研究證實，COPD緩解期炎癥仍持續存在，因此，對緩解期的治療也日益得到重視。氨茶堿在COPD治療中的作用已經得到證實，主要是基于其對支氣管平滑肌的直接舒張作用，近來發現其在抗炎、免疫調節等方面也起著重要作用［2］。本研究通過觀察IL-17、IL-8及中性粒細胞在COPD患者緩解期口服氨茶堿和常規治療誘導痰中的表達及其相關性，探討IL-17、IL-8及中性粒細胞在COPD患者緩解期中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入我院2010年1月～2011年12月住院患者50例，分為口服氨茶堿組(治療組)和常規治療組。治療組25例，年齡(71.9±8.4)歲，GOLDⅢ～Ⅳ級;常規治療組25例，年齡(72.3 ±7.6)歲，GOLDⅢ～Ⅳ級。另選取我院健康體檢無吸煙者10例為正常對照組，年齡(68.1±7.9)歲。入院當天采集臨床資料。根據2007版慢性阻塞性肺疾病全球倡議(GOLD)評價，對COPD患者按病情嚴重程度進行分級，對患者的病情進行臨床評估。待COPD患者緩解出院后，均給予家庭氧療及肺功能鍛煉，治療組口服加用氨茶堿100 mg，3次/d，30 d后追蹤隨訪，取3組誘導痰測定IL-17、IL-8及中性粒細胞的含量。

1.2 主要試劑 IL-17試劑盒、IL-8試劑盒及中性粒細胞試劑盒為上海西唐生物科技有限公司提供，美國B＆D公司生產。

1.3 標本采集 采用氧氣霧化吸入法收集受試者的誘導痰，采用改良pin法，常用梯度高滲鹽水法，試劑配制:3%、4%、5%高滲鹽水，0.1%二硫蘇糖醇(DTT)等。

1.4 痰液處理及標本測定 痰液稱重，加入2倍體積的0.1%的DTT充分混合，在漩渦振蕩器上混勻;再置于37℃恒溫水浴箱中孵育并震蕩30 min，加入與DTT等體積的D-PBS后繼續水浴并震蕩5 min;將稀釋的痰液經4層無菌紗布過濾，濾液在離心機中以1 000 r/min的速度離心10 min，取上清液，置于－80℃冰箱保存;細胞層(沉淀)用D-PBS重懸，用300目尼龍網過濾，離心機中1 000 r/min離心10 min，離心2次，吸管吸去每次離心后的上清液;沉淀用D-PBS重懸，在倒置顯微鏡下調整細胞數為1× 106/mL;上清液于ELISA實驗前1 d放置密封冷凍干燥機進行樣本濃縮12 h，后取出解凍備用。

1.5 統計學方法 所有數據采用SPSS13.0統計軟件處理，計量資料數據均采用±s表示。兩組間的比較，采用兩獨立樣本t檢驗。兩因素相關分析用直線相關分析。以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同受試組基本資料及肺功能比較 對不同受試組的性別及年齡進行兩兩比較無明顯差異(P＞0.05)，具有可比性。各組肺功能測定結果見表1。

表1 不同受試組肺功能的測定結果(±s)

表1 不同受試組肺功能的測定結果(±s)

注:與正常對照組比較，*P＜0.01

組別 n FEV1% FEV1/FVC正常對照組10 91.43±12.37 82.65±9.14常規治療組 25 33.47±9.25* 45.87±7.36*治療組 25 35.64±7.93* 42.52±6.89*

2.2 出院30 d后誘導痰中的IL-17、IL-8及中性粒細胞的含量 見表2。

表2 不同受試組痰IL-17、IL-8及中性粒細胞測定結果(pg/mL，±s)

表2 不同受試組痰IL-17、IL-8及中性粒細胞測定結果(pg/mL，±s)

注:與正常對照組比較，*P＜0.01;與常規治療組比較，△P＜0.05

正常對照組26.75±17.16 18.83±3.16 23.48±9.24常規治療組 75.86±38.99* 46.29±12.76* 55.27±13.75*治療組 56.24±17.48＊△31.37±14.51＊△32.36±15.89＊△

2.3 相關性分析 治療組IL-17與IL-8呈正相關(r=0.652，P＜0.05)，IL-17與中性粒細胞呈正相關(r=0.713，P＜0.05)，IL-8與中性粒細胞呈正相關(r=0.649，P＜0.05);常規治療組IL-17與IL-8呈正相關(r=0.749，P＜0.05)，IL-17與中性粒細胞呈正相關(r=0.691，P＜0.05)，IL-8與中性粒細胞呈正相關(r=0.648，P＜0.05)。

3 討論

近幾十年來，COPD發病率呈現快速增長趨勢，我國40歲以上人群發病率已高達8.2%，成為嚴重危害中老年健康的常見疾病之一。慢性持續性氣道炎癥反應是COPD的重要發病機制之一。有研究顯示，在COPD患者支氣管肺泡灌洗液及誘導痰中，中性粒細胞計數明顯增加，且已戒煙的COPD患者中也具有類似現象，這提示COPD患者氣道內存在持續的慢性炎癥改變。

1995年Yao等首次報道，在T細胞誘導的慢性炎癥過程中，可溶性細胞因子IL-17起著非常重要的作用。有研究將經細菌誘導的小鼠模型以酒精處理后，其氣道內中性粒細胞較對照組明顯減少，且與支氣管灌洗液(BALF)中的IL-17水平增加呈正相關［3］。國內沈鋒等［4］發現大鼠COPD模型中BALF和肺組織勻漿中IL-17水平亦顯著增高。其他研究也顯示，COPD急性期患者肺組織中IL-17明顯增加，并與病情嚴重程度相關［5］。本研究發現，在COPD穩定期患者中，IL-17水平亦顯著增加，這支持COPD緩解期患者存在持續的氣道炎癥反應。

IL-8可趨化中性粒細胞在氣道內聚集，誘導炎癥細胞分泌黏液，促進炎癥過程。Pesci等研究發現，COPD患者BALF中IL-8水平明顯高于正常無吸煙人群;進一步研究證實，IL-17可激活NF-κB，并誘導IL-8至炎癥部位，從而發揮IL-8趨化募集中性粒細胞的功能，促進氣道炎癥發展。我們前期研究也顯示，在COPD急性加重期患者血漿中，IL-17與IL-8的水平明顯高于正常無吸煙者，這提示IL-17及IL-8可能共同參與了COPD的發病過程［6，7］。本研究觀察了COPD緩解期患者中使用氨茶堿對IL-17和IL-8水平的影響，結果發現，與常規治療組比較，COPD穩定期患者加用氨茶堿治療，可以顯著降低誘導痰中IL-17、IL-8及中性粒細胞水平;進一步分析發現，氨茶堿治療組IL-17、IL-8和中性粒細胞三者之間均存在顯著的相關，這表明IL-17和IL-8也參與了COPD緩解期的慢性持續炎癥反應，而氨茶堿治療可能通過影響IL-17和IL-8的水平而降低COPD緩解期的氣道慢性炎癥反應，從而發揮顯著的抗炎癥作用。

總之，本研究發現COPD緩解期患者口服氨茶堿能降低誘導痰中IL-17和IL-8的水平，進一步闡明了氨茶堿抗炎癥機制，為COPD緩解期患者長期口服氨茶堿治療提供了新的理論證據。

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