緊密連接蛋白Claudin-6和PKCθ在非典型性腦膜瘤組織中的表達

張廣超 金銀華 殷 浩 姜國鋒 (吉化集團公司總醫院，吉林 吉林 132022)

緊密連接蛋白Claudin-6和PKCθ在非典型性腦膜瘤組織中的表達

張廣超 金銀華 殷 浩 姜國鋒 (吉化集團公司總醫院，吉林 吉林 132022)

緊密連接蛋白;非典型性腦膜瘤;Claudin-6;蛋白激酶C

非典型性腦膜瘤占成人腦膜瘤的5% ～8%，其侵襲性行為導致手術后容易復發。作者前期研究表明Claudin-6表達下調可能在腦膜瘤發生和侵襲中起作用〔1〕。蛋白激酶C(PKC)作為細胞增殖、分化和凋亡過程信號轉導中的磷脂依賴型蛋白激酶，在維持緊密連接(TJs)的功能中發揮重要作用。作者前期研究也表明PKCθ在侵襲性腦膜瘤發生發展中起負性調控作用〔2〕。本實驗對非典型性腦膜瘤組織中Claudin-6和PKCθ檢驗水平進行分析，探討Claudin-6和PKCθ表達的相關性。

1 對象與方法

1.1 對象 收集手術后病理證實非典型腦膜瘤標本30例。術前未經過放療或化學治療。年齡28～74歲，平均50.5歲。男性12例，女性18例。標本用10%中性甲醛常溫固定后脫水包埋，制備4μm連續切片，進行免疫組化染色。

1.2 方法 采用免疫組化SP法，檢測Claudin-6和PKCθ在非典型性腦膜瘤組織中的表達。以PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結果判定 陽性表達判定標準:細胞膜與細胞質同時出現棕黃色為陽性，單純細胞質著色、細胞膜著色或細胞無著色為陰性。采用著色細胞計數法評分:選著色良好區域，在200倍顯微鏡下選5個視野，計數陽性細胞數，然后取均數，著色細胞數＜5%判定為陰性，≥5%為陽性。見圖1。

圖1 非典型性腦膜瘤組織中Claudin-6、PKCθ蛋白的表達(S-P，×200)

1.4 統計學方法 采用Spearman等級相關分析進行統計學分析。

2 結果

Claudin-6表達定位于非典型性腦膜瘤細胞的細胞膜和細胞質中，為棕褐色顆粒。30例非典型性腦膜瘤組織中Claudin-6蛋白陽性表達5例(見圖1)，陰性25例，陽性率16.7%。PKCθ蛋白表達定位于腦膜瘤細胞的細胞膜和細胞質中，呈棕褐色顆粒。30例侵襲性腦膜瘤組織中PKCθ蛋白表達陽性10例(見圖1)，陰性20例，陽性率為33.3%。非典型腦膜瘤組織中Claudin-6和PKCθ表達有相關性。用Spearman等級相關分析法進行相關分析，rs=0.443，P=0.014。

3 討論

腦膜瘤是顱內常見的腫瘤，約占所有顱內腫瘤的15%～20%。主要來源于蛛網膜細胞或向蛛網膜細胞分化的細胞。蛛網膜細胞存在細胞間的TJs結構〔3〕。2010年，WHO將非典型性腦膜瘤定義為有較多機會復發和侵襲的一類腦膜瘤，WHO分級Ⅱ級。Claudin-6作為TJs的構成蛋白，通過影響細胞黏附性、凝聚力及侵襲性，可能在抑制腫瘤侵襲過程中發揮一定的重要作用。前期研究顯示〔1〕:Claudin-6在侵襲性腦膜瘤組織中的表達明顯低于非侵襲性腦膜瘤，Claudin-6表達下調可能在腦膜瘤發生和侵襲中起作用，并可作為腦膜瘤侵襲的判斷指標。

PKC是TJs形成和調節的重要因子，PKC同工酶在TJs生理功能的保持、病理條件下的反應中起重要作用。PKCθ是鈣離子非依賴性蛋白激酶，可以調控細胞周期、增殖、分化及凋亡。目前認為，PKCθ活性改變在腫瘤發生發展中起作用主要是與PKCθ調節細胞周期和細胞凋亡的作用有關〔4〕。前期試驗表明〔2〕PKCθ的表達在腦膜瘤的侵襲發生發展中起負性調控作用。

本實驗表明，非典型性腦膜瘤組織Claudin-6和PKCθ蛋白表達存在相關性，Claudin-6和PKCθ協同在非典型性腦膜瘤發生和發展中起作用。非典型性腦膜瘤組織中PKCθ對Claudin-6表達有一定的調節作用。Claudins對細胞連接處選擇滲透性的調節主要是通過PKC途徑實現。PKC作用于Claudins上特定氨基酸靶點使其磷酸化，TJs功能下降，表現為滲透性增加〔5〕。Claudins對細胞連接處選擇滲透性的調節主要是通過PKC途徑實現。

1 張廣超，姜國鋒，楊曉秋，等.緊密連接蛋白claudin-6在腦膜瘤組織中的表達〔J〕.國際腫瘤學雜志，2009;36(12):953-4.

2 張廣超，楊曉秋，姜國鋒，等.蛋白激酶C-θ在腦膜瘤組織中的表達〔J〕.國際腫瘤學雜志，2010;37(3):228-9.

3 Hejin P，Habn MD，Elizabeth A，et al.Immcenhistochemical staining for claudin-1 can help distinguish meningiomas from histologic minics〔J〕.Am JClin Pathol，2006;125:203-8.

4 徐瑞明，金順子，劉 揚，等.蛋白激酶PKCθ的研究進展〔J〕.吉林大學學報:醫學版，2005;31(4):640-4.

5 Banan A，Zhang L，Shaikh M，et al.Theta isoform of PKC is required for alterations in cytoskeletal dynamics and barrier permeability in intestinal epithelium:a novel function for PKC theta〔J〕.Am JPhysiol Cell Physiol，2004;287(1):C218-34.

R739.45

A

1005-9202(2012)03-0592-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.03.071

吉林市科技局科研基金項目(200903022)

殷 浩(1975-)，男，主治醫師，主要從事神經外科基礎與臨床研究。

張廣超(1968-)，男，碩士，主任醫師，主要從事神經外科基礎與臨床研究。

〔2011-03-12收稿 2011-06-13修回〕

(編輯 徐 杰)