RP－HPLC法測定刺五加片中綠原酸的含量

趙陶鈞，于風平，代秀梅

(1.山東僑聯醫院，山東淄博255086;2.淄博市藥品檢驗所，山東淄博255086)

刺五加片由刺五加浸膏加輔料適量壓制成片，其臨床上主要用于益氣健脾，補腎安神，在治療黃褐斑、低血壓等疾病及緩解海洛因成癮［1］方面療效顯著。《中國藥典》2010年版通過測定刺五加片中紫丁香苷的含量控制其質量，但紫丁香苷的含量與生產過程有關［2］，因此其含量并不能很好地反映原料的投料量。有文獻對刺五加片中的總黃酮［3］、異嗪皮啶［4］的含量進行測定，但是刺五加片中的總黃酮的測定方法準確度低，而刺五加片中的異嗪皮啶的含量較低，這些方法都不能較好的控制刺五加片中刺五加浸膏的投料量。本文建立了刺五加片中綠原酸測定的高效液相色譜方法，為刺五加片的質量控制提供了科學依據。

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 1200 Series;綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號 110753－200413);刺五加片(20070801、20080401、20071105，市售樣品);乙腈為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Zorbax SB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相:0.2%甲酸 －乙腈(94∶6)，流速:1.0 mL· min－1，檢測波長:327 nm，柱溫:30℃，進樣量:20 μL，色譜圖見圖1。

圖1 對照品(A)與樣品(B)色譜圖 1.綠原酸

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液 精密稱取綠原酸對照品(五氧化二磷減壓干燥12 h)13.75 mg，置200 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液 取本品研勻，精密稱取細粉適量(相當于原藥品10片量)，置25 mL量瓶中，加流動相適量，超聲30 min，加流動相至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 對照品溶液 精密量取對照品儲備液4 mL，置25 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得。

2.3 線性關系考察 取對照品儲備液，用流動相分別稀釋成68.75、34.38、17.19、8.594、4.297 μg·mL－1的溶液，按照“2.1色譜條件”進行實驗，記錄綠原酸的峰面積。綠原酸的濃度C(μg·mL－1)為橫坐標，綠原酸的峰面積A為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為A=55.13C－3.521(R2= 0.999 9)。試驗結果表明，綠原酸濃度在4.297～68.75 μg ·mL－1范圍內，峰面積與進樣量線性關系良好。

2.4 精密度試驗 取對照品溶液連續進樣5次，測定，計算。結果綠原酸峰面積RSD為0.2%。表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗 取供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8 h各進樣1次，結果峰面積RSD為0.8%，說明供試品溶液在8 h內穩定。

2.6 加樣回收率試驗 取本品(批號20080401，平均片重: 0.512 8 g，綠原酸含量為0.185 mg/片)研勻，精密稱取細粉適量(相當于原藥品1片量)，置25 mL量瓶中，加流動相適量，分別加對照品儲備液3、4、5 mL超聲30 min，加流動相至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續濾液進行測定。記錄色譜圖，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.7 樣品測定 取樣品3批，按照上述方法制備供試品溶液進行測定，結果見表2。

表2 三批樣品含量測定結果

3 討論

3.1 波長的選擇 通過二極管陣列檢測器對綠原酸對照品溶液在190～400 nm之間進行光譜掃描，選擇327 nm最大吸收波長處作為檢測波長(圖2)。

圖2 綠原酸對照品溶液的紫外光譜圖

3.2 流動相的選擇 作者經試驗發現綠原酸與紫丁香苷的保留行為較為接近，不易完全分離，本文流動相中的有機相比例較小，主要是為了樣品中的綠原酸與紫丁香苷實現完全分離。同時在流動相中加入0.2%的甲酸，能夠明顯改善綠原酸的峰形。

［1］ 黃德彬，劉希林，余昭芬，等.藿香正氣口服液合用刺五加片緩解海洛因成癮戒斷癥狀的療效觀察［J］.中成藥，2004，26(5):382－385.

［2］ 劉建娣，梁瓊麟，羅國安，等.刺五加注射液指紋圖譜的建立及其在質量控制中的應用［J］.中成藥，2006，28 (1):3－5.

［3］ 張正康.分光光度法測定刺五加片中總黃酮含量［J］.時珍國醫國藥，2001，12(1):41－42.

［4］ 張濤.刺五加片質量考察［J］.中藥材，2001，24(8):597－598.