子宮內膜癌中uPA、P-P38和VEGF的表達及意義

劉向真，商小涓，席 豐*，孫冬霞，李彩紅，楊華英，王 蕾

(1邯鄲市婦幼保健院，河北邯鄲056001;2河北工程大學醫學院;3邯鄲市中醫院)

子宮內膜癌為女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，在我國位于女性惡性腫瘤的第2位。本研究擬用免疫組化SP法檢測正常子宮內膜、子宮內膜癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)、磷酸化的P38(P-P38)和血管內皮生長因子(VEGF)蛋白的表達情況，分析這3種蛋白表達與子宮內膜癌生物學行為的關系，探討它們對子宮內膜癌發生、發展及生物學行為的影響，為臨床治療和預后提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2008年1月～2011年6月河北邯鄲市婦幼保健院婦科子宮內膜癌手術切除子宮標本60例，平均年齡52.22歲，所有子宮內膜癌患者術前均未行放化療及激素治療。取因子宮肌瘤或子宮脫垂而手術切除子宮的正常子宮內膜標本32例為對照，平均年齡48.25歲。按2000年FIGO標準進行臨床病理分期及組織分級:Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例;G1級36例，G2級13例，G3級11例。病灶局限于黏膜層及浸潤＜1/2肌層44例，浸潤＞1/2肌層16例。

1.2 試劑與方法 常規免疫組化SP試劑盒、DAB顯色液及uPA、P-P38、VEGF(北京中杉金橋生物技術有限公司)。采用SP免疫組化法，方法操作按試劑盒說明書進行，取已知切片作為陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷 uPA和P-P38陽性定位于細胞核，VEGF陽性表達主要定位于細胞質，以各種抗體在細胞核或胞質內出現棕黃色顆粒為陽性信號。參照Parenti等［1］的標準，每張切片均隨機觀察5個高倍視野(×400)，陽性細胞數 ＜5%為(－)，5% ～25%為(+)，25% ～50%為(++)，＞50%為(+ ++)。以(+)～(+++)視為陽性表達，(－)視為陰性表達。

1.4 統計學方法 應用SPSS12.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗。相互關系用等級相關分析，以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 uPA、P-P38和VEGF的表達與臨床病理指標的關系 見表1。

2.2 uPA、P-P38和VEGF在子宮內膜癌組織中的相關性分析 在子宮內膜癌組織中uPA、P-P38相關性分析顯示r=0.533，P=0.000;uPA和VEGF相關性分析顯示r=0.509，P=0.000;P-P38和VEGF相關性分析顯示r=0.521，P=0.000。

3 討論

uPA是一種絲氨酸蛋白水解酶，位于10號染色體的長臂上，由10個內含子和11個外顯子構成，成熟的mRNA長度為2.4 kb［2］。uPA能將纖溶酶原激活為纖溶酶，纖溶酶可以降解基質和基底膜等成份，在腫瘤侵襲、轉移過程中發揮重要作用［3］。另外uPA還參與信號轉導通路，促進腫瘤細胞發生、增殖等活動［4］。有報道［5，6］uPA在多種惡性腫瘤中均有過表達。本實驗結果顯示，uPA蛋白陽性表達主要位于細胞核內，在子宮內膜癌組織中呈過度表達，在正常子宮內膜組織中不表達，差異有顯著性; uPA與病理分期及組織學分級有關，提示分化差的惡性腫瘤往往具有高侵襲能力、預后差，這可能與低分化腫瘤中uPA表達水平更高有關;uPA與有無淋巴結轉移及浸潤深度有關，說明其在腫瘤侵襲轉移中發揮重要作用。

表1 uPA、P-P38和VEGF的表達與臨床病理指標的關系(例)

絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)是細胞內廣泛存在的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，活化前的MAPK位于胞質，一旦活化即進入核內，激活靶基因。MAPK通路信號的傳送是通過MAPKKK、MAPKK和MAPK連續的磷酸化作用實現的［7］。已發現4條MAPK信號通路:ERK、JNK、BMK及 P38MAPK。P38MAPK［8］作為MAPK家族中重要的成員傳導通路是由360個氨基酸組成的酪氨酸磷酸化蛋白激酶，其分子量為38 kD，屬于應激激活的蛋白，在多種生長因子、炎癥因子和應激反應作用下激活。P38發生磷酸化進入細胞核后調節轉錄因子，影響基因轉錄、蛋白合成和細胞骨架結構改變，介導細胞增殖、分化、凋亡［9］。本研究采用免疫組織化學方法分析P-P38在子宮內膜癌組織中的表達情況，結果顯示P-P38陽性表達主要位于細胞核內，在子宮內膜癌組織中呈過度表達，而在正常子宮內膜組織中不表達，P-P38與有無淋巴結轉移、病理分期、浸潤深度及組織學分級有關，與腫瘤的病理組織類型無關，提示P-P38的過度表達與子宮內膜癌的侵襲、轉移及不良預后密切相關。

VEGF是一種具有肝素結合活性的生長因子，作用于血管內皮細胞，對血管內皮細胞的促有絲分裂作用十分強烈，被認為是目前已知的最強的直接作用于血管內皮細胞的生長因子。本研究發現，VEGF在子宮內膜癌組織中的表達明顯高于正常內膜組織，VEGF與有無淋巴結轉移、病理分期、浸潤深度及組織學分級有關，與腫瘤的病理組織類型無關，提示其過度表達與子宮內膜癌的侵襲、轉移及不良預后密切相關，說明VEGF在子宮內膜癌的發展及浸潤轉移過程中發揮重要作用。

有研究顯示，p38MAPK通路通過調控uPA的表達來誘導VEGF的人臍靜脈內皮細胞的遷移［10］。VEGF也可以促進內皮細胞分泌和激活uPA來降解基質［11］，uPA可以直接激活VEGF，促使VEGF的釋放［12］。通過三者相關性的分析，我們發現uPA、P-P38和VEGF在子宮內膜癌中呈顯著正相關，本文通過對三者的研究發現其相互作用，形成正反饋調節環，為腫瘤新生血管形成創造有利的微環境，同時也有利于腫瘤細胞脫落進入脈管或向鄰近組織擴散，為腫瘤侵襲、轉移創造條件。

總之，子宮內膜癌組織中uPA、P-P38和VEGF處于過表達狀態，與子宮內膜癌的發生、發展和轉移密切相關，三者聯合檢測有助于指導臨床治療，為子宮內膜癌的防治提供新思路。

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