氟康唑莫西沙星眼用即型凝膠的制備及質(zhì)量控制

吳明釵，陳鎮(zhèn)國(guó)，林潔，謝麗曉，黃鵬，易林高，楊樂(lè)樂(lè)（.溫州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院，浙江瑞安3500；.溫州醫(yī)學(xué)院，浙江 溫州 35035）

感染性眼表疾病是眼科最為常見(jiàn)的眼病，主要為角膜和結(jié)膜的感染，由細(xì)菌、真菌、病毒等微生物感染所致[1]，而由細(xì)菌與真菌的混合感染在感染性眼表疾病占據(jù)一定比例[2，3]。局部用藥是治療感染性眼表疾病的首選給藥途徑[1]，但真菌或真菌與細(xì)菌引起的混合感染，可供選擇的藥物目前很少。氟康唑?yàn)槿蝾?lèi)抗真菌藥，抗菌譜較廣，眼內(nèi)通透性高；莫西沙星為第4代氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥，對(duì)革蘭陽(yáng)性和陰性菌皆有抗菌活性。將氟康唑與莫西沙星組合為復(fù)方制劑，兼具抗真菌和抗細(xì)菌作用，可用于治療真菌與細(xì)菌的眼表混合感染。且應(yīng)用復(fù)方制劑可減少給藥次數(shù)，提高患者用藥的依從性，從而提高療效。眼用即型凝膠在體內(nèi)外不同的pH、溫度等生理環(huán)境下發(fā)生相轉(zhuǎn)化，體外以液體形式存在，滴入眼內(nèi)立刻轉(zhuǎn)為凝膠，既可解決普通滴眼劑眼內(nèi)滯留時(shí)間短、生物利用度不高的缺點(diǎn)，也克服了普通眼用凝膠缺乏良好的鋪展性、劑量不易控制的問(wèn)題[4]。在本文中，筆者介紹了以泊洛沙姆407為基質(zhì)制備的氟康唑莫西沙星溫度敏感型眼用即型凝膠的方法及其質(zhì)量控制方法。結(jié)果表明，該制劑處方設(shè)計(jì)合理，制備方法簡(jiǎn)單，質(zhì)量可控。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜（HPLC）儀（美國(guó)貝克曼公司）；TU-1901型雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；AB104-S型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；2 B-3 A型恒溫磁力攪拌器（上海理達(dá)儀器廠）；PHSJ-4型pH計(jì)（上海雷磁儀器廠）。

1.2 試藥

氟康唑?qū)φ掌罚ㄖ袊?guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100314-200503，供含量測(cè)定用）；氟康唑原料藥（批號(hào)：20101104，純度：99.30%）、莫西沙星原料藥及對(duì)照品（鹽酸鹽，批號(hào)：101101，純度：99.19%）均為武漢市合中生化制造有限公司產(chǎn)品；羥苯乙酯原料藥及對(duì)照品（廣州漢普醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：301011，純度：100.20%）；泊洛沙姆407（巴斯夫化學(xué)公司，批號(hào)：WPEF537 B）；氟康唑莫西沙星眼用即型凝膠（瑞安市人民醫(yī)院制劑室，批號(hào)：20110316-1、20110316-2、20110316-3，規(guī)格：每支10 mL，含氟康唑0.3%、莫西沙星0.3%）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 處方與制備

2.1 處方組成及基質(zhì)的篩選

2.1.1 處方的組成[5，6]。氟康唑3g，莫西沙星3g，泊洛沙姆407155g，羥苯乙酯0.3g，氯化鈉2.4g，注射用水加至1000 mL。

2.1.2 凝膠基質(zhì)的篩選。初期試驗(yàn)采用不同濃度泊洛沙姆加卡波姆進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果均不理想。而后單用不同濃度泊洛沙姆進(jìn)行試驗(yàn)，取得預(yù)期結(jié)果。具體試驗(yàn)如下：根據(jù)處方組成制備凝膠，其他成分相同，泊洛沙姆407的含量分別為14%、14.5%、15%、15.5%、16%、16.5%。將凝膠放在帶攪拌子的玻璃小燒杯中，置于恒溫磁力攪拌器上，調(diào)節(jié)攪拌子使之緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)；加熱使凝膠緩慢升溫，密切觀察攪拌子的轉(zhuǎn)速，當(dāng)凝膠達(dá)到膠凝溫度時(shí)，攪拌子會(huì)由于黏度突然增大而轉(zhuǎn)速變慢或停止轉(zhuǎn)動(dòng)，記錄即時(shí)溫度。重復(fù)上述試驗(yàn)，證實(shí)含15.5%泊洛沙姆407的凝膠，在32℃發(fā)生膠凝作用，形成凝膠。故選取泊洛沙姆407處方中含量為15.5%。

2.2 制備

取注射用水約400 mL，將泊洛沙姆407均勻撒于水面上，置于冰箱中冷藏過(guò)夜，完全溶脹后得澄明溶液A。

取約400mL注射用水加熱至90℃左右，分別加入氟康唑、羥苯乙酯，攪拌溶解，稍后加入莫西沙星、氯化鈉，溶解，濾過(guò)，得溶液B。

將溶液B緩慢倒入溶液A中，輕輕攪勻，加水至全量，攪勻，分裝，100℃流通蒸汽滅菌20 min，即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為淡黃色澄明液體。

3.2 鑒別

3.2.1 氟康唑、莫西沙星、羥苯乙酯。取本品和氟康唑、莫西沙星、羥苯乙酯對(duì)照品各適量，分別用流動(dòng)相溶解并稀釋成200、200、20μg·mL－1的供試品溶液和對(duì)照品溶液，照“3.4.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，結(jié)果，供試品溶液主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品一致。

3.2.2 氯化鈉。本品顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)。

3.3 檢查[7]

3.3.1 pH。本品的pH應(yīng)為5.0～6.5，結(jié)果符合規(guī)定。

3.3.2 無(wú)菌。本品照無(wú)菌檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。結(jié)果符合規(guī)定。

3.3.3 其他。其余各項(xiàng)均符合眼用制劑的要求。

3.4 含量測(cè)定

3.4.1 色譜條件。色譜柱為依利特Hypersil ODS（250mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為三乙胺緩沖液（磷酸8 mL，三乙胺14 mL，加水稀釋至1000mL，用三乙胺調(diào)節(jié)pH至3.3，加水500 mL，混勻，即得）-甲醇（61∶39），流速為1.0 mL·min－1，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm，進(jìn)樣量為20 μL。分別制備氟康唑、莫西沙星和羥苯乙酯對(duì)照品溶液，以上述色譜條件進(jìn)樣，確定各成分的保留時(shí)間；取“3.4.2”～“3.4.4”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液及空白樣品溶液和樣品溶液進(jìn)樣，色譜見(jiàn)圖1。

圖1 結(jié)果表明，輔料對(duì)主藥的含量測(cè)定無(wú)干擾。

3.4.2 混合對(duì)照品溶液制備。精密稱(chēng)取氟康唑、莫西沙星和羥苯乙酯對(duì)照品，以純化水溶解，定容，得每1 mL含氟康唑1.0 mg、鹽酸莫西沙星1.0 mg、羥苯乙酯0.1 mg的混合對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

3.4.3 空白樣品溶液制備。按處方制備不含氟康唑、莫西沙星、羥苯乙酯的凝膠溶液，精密量取1.0mL置于10mL量瓶中，純化水稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4.4 樣品溶液制備。按處方制備氟康唑莫西沙星眼用即型凝膠，精密量取1.0mL置于10mL量瓶中，純化水稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4.5 線性關(guān)系考察。精密量取混合對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，加入純化水稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以濃度（c）對(duì)峰面積（A）進(jìn)行線性回歸。得氟康唑、莫西沙星、羥苯乙酯的回歸方程分別為A＝205120 c－130916（r＝0.9999，n＝6）、A＝948463 c－749618（r＝0.9999，n＝6）和 A＝590252 c－454393（r＝0.9998，n＝6），結(jié)果表明，氟康唑、莫西沙星和羥苯乙酯的檢測(cè)濃度線性范圍分別為100～600、100～600、10～60 μg·mL－1。

3.4.6 精密度試驗(yàn)。精密量取“3.4.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液3.0 mL置于10 mL量瓶中，制成含氟康唑、莫西沙星、羥苯乙酯濃度分別為300、300、30 μg·mL－1的對(duì)照品溶液，在0、1、2、4、6、8h進(jìn)行日內(nèi)穩(wěn)定性考察，結(jié)果三者的日內(nèi)RSD分別為1.16%、0.84%、1.58%；于第1、2、3天的早、中、晚連續(xù)測(cè)定，得三者的日間RSD分別為1.39%、1.23%、1.91%。

3.4.7 回收率試驗(yàn)。精密稱(chēng)取氟康唑、莫西沙星及羥苯乙酯對(duì)照品，按處方比例制備含基質(zhì)的低、中、高3種不同濃度的凝膠樣品，照“3.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，每一濃度平行稀釋3次、進(jìn)樣并計(jì)算。結(jié)果，三者的平均回收率分別為99.75%、99.89%、100.10%，RSD分別為1.26%、1.08%、1.72%，詳見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 1 Results of recovery tests（n＝3）

3.4.8 樣品的含量測(cè)定。精密量取3批樣品各1.0 mL置于10 mL量瓶中，用純化水稀釋至刻度、過(guò)濾、進(jìn)樣，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

4 討論

表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果Tab 2 Results of content determination of 3batches of samples

制備凝膠時(shí)，須將氟康唑和羥苯乙酯溶解于熱水中。含氟康唑、莫西沙星的水溶液，須緩慢倒入泊洛沙姆溶液中，邊倒邊緩慢攪拌。因泊洛沙姆為非離子型表面活性劑，劇烈攪拌會(huì)形成大量泡沫，影響定容。

選擇檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，需優(yōu)先考慮紫外吸收相對(duì)較弱的成分。對(duì)混合對(duì)照品溶液在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明，氟康唑在260 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，莫西沙星、羥苯乙酯分別在291、258 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。由于氟康唑的吸光度相對(duì)較弱，在氟康唑的最大吸收波長(zhǎng)260 nm處，莫西沙星和羥苯乙酯均有較強(qiáng)吸收。故選擇260 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，同時(shí)測(cè)定本復(fù)方制劑中3種成分的含量。

氟康唑莫西沙星眼用即型凝膠為新型的眼用制劑，可用于治療真菌與細(xì)菌所致混合感染。該制劑在常溫時(shí)為澄清的液體，滴入眼內(nèi)后，藥液由液態(tài)轉(zhuǎn)相為半固態(tài)，使用方便、分劑量準(zhǔn)確，能夠顯著延長(zhǎng)藥物在眼部的滯留時(shí)間，從而增加療效。本制劑以泊洛沙姆407作為凝膠基質(zhì)，處方設(shè)計(jì)合理，安全性好，制備簡(jiǎn)單，質(zhì)量可控。

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