芒果苷磷脂復合物的制備工藝研究*

田 慧，王亞靜，孫士真，王艷明，彭淑娟，高 旭

（天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津 300193）

芒果苷磷脂復合物的制備工藝研究*

田 慧，王亞靜，孫士真，王艷明，彭淑娟，高 旭

（天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津 300193）

[目的]研究制備芒果苷磷脂復合物的最佳制備工藝。[方法]以芒果苷與磷脂的復合率為評價標準，采用單因素考察和正交實驗篩選工藝參數。[結果]確定了制備芒果苷磷脂復合物的最佳工藝條件：以甲醇-丙酮為反應溶劑，芒果苷質量濃度為0.25 g/L，物料比摩爾比為1∶1，反應溫度為40℃，反應時間為2 h。[結論]優化工藝可制得復合率較高的芒果苷磷脂復合物，簡單可行。

芒果苷；磷脂復合物；制備工藝

芒果苷（Mangiferin），又名芒果素、知母寧，分子式為C19H18O11，廣泛存在于百合科植物知母，漆樹科芒果葉中。近年來的研究發現，芒果苷具有廣泛的藥理活性，除了傳統意義上的保肝利膽、抗氧化、止咳作用等，隨著研究的不斷深入，其在抗白血病、抗腫瘤、治療糖尿病等[1-3]方面的優勢日益明顯，具有良好的應用前景。由于芒果苷是一種二苯吡喃酮的碳糖苷，屬于碳苷類，溶解度很差，難溶于水，也不溶于有機溶劑，導致生物利用度低，并限制了其臨床應用及新藥的開發[4-5]。據報道，大多數脂水均難溶的藥物與磷脂制成磷脂復合物后，原藥物的親水性和親脂性可得到不同程度的提高，從而增強藥物在胃腸道中的吸收，提高口服生物利用度[6-7]。目前，國內尚未發現有關芒果苷磷脂復合物的報道，為開發芒果苷新制劑，本實驗對芒果苷磷脂復合物的制備工藝進行了研究。

1 儀器與試藥

智能磁力加熱攪拌器SZCL-4B（鞏義予華儀器有限公司）；ALC-1104電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；循環水式真空泵旋轉蒸發RE52C（上海亞榮生化儀器廠）；真空干燥箱DEF-6090（上海新苗醫療器械制造有限公司）；KQ-300B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Jade DSC（美國Perkin-Elmer）。芒果苷原料（廣西昌洲天然產物開發有限公司，批號：090924，90%）；磷脂 PC-98T（上海艾韋特醫藥科技有限公司，批號：EL-10001，供注射用，其中磷脂酰膽堿的含量為98%）；芒果苷對照品（天津中新藥業集團股份有限公司，批號：110505-11純度>98%）；甲醇、二氯甲烷、正己烷、丙酮均為分析純（天津康科德科技有限公司）；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 芒果苷磷脂復合物制備工藝及評價指標的確定 將一定量的芒果苷W1和磷脂在一定條件下反應后，減壓除去反應溶劑；再利用藥物不溶于二氯甲烷，而磷脂和磷脂復合物均易溶于二氯甲烷的特性，再加入適量的二氯甲烷，充分溶解其中的磷脂及復合物，過濾，收集沉淀并稱質量W2。取濾液減壓干燥過夜，即得黃色黏狀固體。計算藥物與磷脂的復合率（C），公式如下：C=（W1-W2）/W1×100%。通過比較復合率確定合適的工藝條件。

2.2 制備工藝的單因素影響實驗

2.2.1 反應溶劑的選擇 芒果苷在有機溶劑中的溶解度測定：取過量的芒果苷，分別加入甲醇、無水乙醇、丙酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、二氯甲烷、水，超聲（40℃，40 KHz）6 h，靜置過夜，取上清液均 1 mL，置10 mL量瓶中，揮干溶劑，用甲醇復溶，測定芒果苷的濃度。結果在各溶劑中的濃度大小順序為：甲醇>無水乙醇>水>四氫呋喃>丙酮>二氯甲烷>乙酸乙酯，所以選擇甲醇作為芒果苷的溶劑。磷脂不溶于極性溶劑，可溶于非極性溶劑，經預實驗選熱丙酮作為磷脂的溶劑。

2.2.2 反應時間的影響 取芒果苷10 mg，加甲醇20 mL的溶液，超聲（40℃，40 KHz）30 min使其溶解；設定芒果苷與磷脂的投料摩爾比為1∶1（以磷脂平均分子量780計算，折合質量比為1∶1.66），稱取磷脂16.6 mg，加丙酮20 mL，反應溫度為40℃，反應時間為 0.5、1、1.5、2、3 h，復合率分別為 96.02%、97.98%、98.98%、99.00%、99.05%，隨著反應時間的延長，復合率逐漸增大，至2 h時，已接近99%，再延長時間對藥物的復合率的提高影響不大，故反應時間選擇2 h。

2.2.3 反應溫度的影響 其他條件同“2.2.2”，分別于30、40、50、60℃下考察芒果苷與磷脂的復合率，分別為95.37%、94.69%、99.02%、97.54%，反應溫度對藥物的復合率有較大影響，需進一步考察。

2.2.4 反應物濃度的影響 其他條件同“2.2.2”，考察反應物濃度分別（芒果苷：溶劑體積）為0.16、0.25、0.33 g/L時，復合率分別為98.88%、94.08%、91.56%，反應物濃度的大小對復合率有一定影響，隨著反應物濃度的增大，復合率逐漸降低。

2.2.5 芒果苷與磷脂的物料比例對復合率的影響其他條件同“2.2.2”，考察芒果苷與磷脂的不同物料比的復合率，芒果苷：磷脂（mol/mol）分別為 2∶1、1∶1、1∶2、1∶3 時的復合率分別為 92.01%、96.03%、99.00%、99.47%，芒果苷與磷脂的物料比對復合率有較大影響。

2.3 制備工藝的正交設計實驗 通過單因素考察得知，芒果苷磷脂復合物的形成受芒果苷與磷脂的物料比（A）、反應物濃度（B）、反應溫度（C）的影響較為顯著，因此選定以這3個影響因素的3個水平進行正交設計L9（34）見表1，安排實驗見表2，結果與方差分析見表3。

方差分析結果表明，因素A對芒果苷磷脂復合物的復合率有顯著影響，而因素B與因素C影響不明顯。由正交實驗得出制備芒果苷磷脂復合物的最優水平為A2B2C1，即反應物濃度為0.25 g/L，物料比為1∶1，反應溫度為40℃。

2.4 工藝驗證 根據單因素考察和正交實驗設計的結果，確定工藝如下：取芒果苷10 mg，加甲醇20 mL的溶液，超聲（40℃，40 KHz）30 min使其溶解；稱取磷脂16.6 mg，加丙酮20 mL，全溶后滴加至芒果苷甲醇溶液中，于40℃水浴攪拌2 h，蒸發除去溶劑，用正己烷洗滌除去過量的磷脂，即得純度較高的芒果苷磷脂復合物。制備3批樣品，經實驗驗證藥物復合率平均值為99.83%±0.14%。

表1 因素與水平表Tab.1 Factors and levels

表2 正交設計結果Tab.2Result of L9（34）orthogonal test

表3 方差分析表Tab.3 Analysis of ANOVA

2.5 芒果苷磷脂復合物的DSC驗證 測定條件：在氮氣保護下，升溫速率為10℃/min，溫程為30～350℃，三氧化二鋁（Al2O3）為參比。分別測定芒果苷、磷脂、芒果苷磷脂復合物、及物理混合物的相變溫度。結果芒果苷的吸熱峰在272℃，磷脂分別在148.9、157.2、164.3℃出現3個特征吸熱峰。兩者的物理混合物吸熱峰是兩者的疊加，而形成復合物后，芒果苷的熔點峰消失。說明芒果苷與磷脂形成了新的復合物。

3 討論

據文獻報道，磷脂易溶于脂肪族和芳香族碳氫化合物及鹵代烴或植物油等非極性溶劑[8]。根據化學反應一般在溶液狀態下較易進行的原則，實驗曾采用二氯甲烷溶解磷脂，但該法制備復合率較低。二氯甲烷沸點較低（39.8℃），易揮發需要回流，有研究認為回流期間易帶入水分可能是致其復合率偏低的原因[9]。經過篩選發現磷脂在丙酮中加熱時溶解較快，且芒果苷在甲醇-丙酮組成的溶劑體系中不析出，復合率較高，所以選擇甲醇-丙酮作為反應溶劑。由正交實驗結果顯示，芒果苷與磷脂的物料比及反應物濃度是制備工藝中的主要影響因素，隨著磷脂比例的提高，藥物的復合率逐漸增大，也說明一般反應中加大一方反應物的量，可促進反應向正方向進行[10]。但磷脂用量過大，生成的芒果苷磷脂復合物黏性越大，最終確定物料比為1∶1，與文獻報道一致[11]。

[1] 姚奕斌，彭志剛，劉振芳，等.芒果苷對白血病HL-60細胞周期及 CDC2/CyclinB1 表達的影響[J].中藥材，2010，33（1）：81－85.

[2]Rajendran P,Ekambaram G,Sakthisekaran D.Cytoprotective effect of mangiferin on benzopyrene-induced lung carcinogenesis in Swiss albino mice[J].Basic&Clinical Pharmacology&Toxicology,2008,103(2):137-142.

[3] IchikiH,M iura T,KuboM,et al.New antidiabetic compounds,mangiferin and its glucoside[J].Biol Pharm Bull,1998,21(12):1389-1390.

[4]袁葉飛,鄧家剛.芒果苷單鈉鹽的制備工藝[J].中國醫院藥學雜志，2008，28（3）：181－183.

[5] 廖洪利,吳秋業,胡宏崗,等.芒果苷的結構修飾[J].華西藥學雜志,2008，23（4）：385-387.

[6] 韓玉梅，鄢 丹，袁海龍.苦參素磷脂復合物在大鼠體內的生物利用度研究[J].中國中藥雜志，2007，32（23）：2508－2510.

[7] 肖衍宇,宋赟梅,陳志鵬,等.水飛薊賓磷脂復合物的制備與大鼠生物利用度的研究[J].藥學學報，2005，40（7）：611-617.

[8]齊文娟，岳紅衛，王 偉.大豆磷脂的理化特性及其開發與應用[J].中國油脂，2005，30（8）：35－37.

[9] 顧艷麗,王東凱.紅景天提取物磷脂復合物的制備[J].中國中藥雜志，2008，33（14）：1759－1760.

[10]竇志英，李迎春，鄭蓓蓓.醋烘制川楝子炮制工藝的探討[J].天津中醫藥，2011，28（4）：338-340.

[11]廉 潔,王伯初.藥物磷脂復合物工藝評價標準及應用研究進展[J].生物技術通訊，2006，17（5）：830－833.

Study on preparation method of mangiferin phospholipid complex

TIAN Hui,WANG Ya-jing,SUN Shi-zhen,WANG Yan-ming,PENG Shu-juan,GAO Xu
（Tianjin University of TCM,Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To determine the best technology for preparing Mangiferin phospholipids complex.[Methods]The compounding rate of mangiferin and phospholipid was investigated with mono-agent investigation and orthogonal design test to analyze the technological parameters.[Results]The best conditions for preparing mangiferin phospholipid complex were as follows:methanol and acetone were used as reaction solvent,concentration of mangiferin in solvent was 0.25 g/L,molar ratio of mangiferin and phospholipid was 1∶1,react was performed for 2.0 hr at 40℃.[Conclusion]The optimized preparing technology can get mangiferin phospholipid complex with a high compounding rate.The technology is easy and feasible.

mangiferin;phospholipid complex;preparation method

R283.3

A

1672-1519（2012）01-0083-03

天津市高等學校科技發展基金計劃項目（20100211）。

田 慧（1982-），女，碩士研究生，研究方向為中藥新劑型及新技術。

王亞靜。

2011-12-07）