麥門冬湯對大鼠肺纖維化形成階段肺及海馬DA、NE、5-HT的干預作用*

楊美鳳，謝忠禮，宋建平

(1.濮陽市中醫院，河南濮陽457000;2.河南中醫學院，河南鄭州450008)

彌漫性肺間質纖維化簡稱肺纖維化，是多種彌漫性肺間質疾病的不良轉歸。目前現代醫學常用糖皮質激素、免疫抑制劑等治療，但有效率低，遠期效果差，若長期大量使用易導致代謝紊亂、免疫抑制、繼發感染等。近年來人們寄希望于中醫藥治療肺纖維化。導師宋建平教授曾觀察了瓜蔞薤白湯、麥門冬湯、腎氣丸和大黃?蟲丸對平陽霉素復制大鼠肺纖維化模型(1～28 d)的影響，結果表明此4個方劑均能減輕肺泡炎及纖維化的程度［1－3］。本課題在有關文獻和以往研究基礎上，觀察比較了益氣養陰的麥門冬湯對肺纖維化模型形成階段(14～28 d)肺和海馬中多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、五羥色胺(5-HT)的影響。報道如下。

1 材料與方法

1.1 動 物

普通級雌性健康Wistar大鼠，體質量(200± 20)g，由河南省動物實驗中心提供，實驗動物質量合格證號:0001432。飼養于河南中醫學院動物實驗中心，室溫(22±2)℃，相對濕度60%，常規飼料喂養，飲水量不限。

1.2 藥品、試劑與儀器

麥門冬湯顆粒劑由各組分的顆粒劑混合而成，均為三九醫藥公司產品。麥冬 3 g/袋(批號0704021)、半夏1 g/袋(批號0706011)、人參1.5 g/袋(批號0705081)、甘草1 g/袋(批號0706011)，均購自河南中醫學院第三附屬醫院。麥冬、制半夏、生甘草、生曬參比例為42∶6∶6∶9，參照動物與人體的體表面積折算系數，計算動物每日用藥量為麥冬6 g/kg、半夏0.84 g/kg、甘草0.54 g/kg、生曬參0.54 g/kg，用蒸餾水配制藥液后按0.015 mL/g體質量灌胃給藥。平陽霉素，8 mg/支，哈爾濱博萊制藥有限公司產品，批號07010203，按3μg/g體質量給藥，使用時用生理鹽水配制成3 g/L，按1μL/g氣管內給藥。DA標準品(批號10097602)、5-HT標準品(批號 10119987)與 NE標準品(批號10131292)，均為阿法埃莎(天津)化學試劑有限公司產品;正丁醇(批號20070406)、正庚烷(批號20050828)與鄰苯二甲醛(批號20060403)，天津化學試劑一廠產品;濃鹽酸，洛陽昊華化學試劑廠產品，批號20060208;水合氯醛，常州化學制藥廠產品，批號 T20050406，用時配成100 g/L的濃度，按3μL/g給予腹腔注射麻醉。F－4500熒光分光光度計，日立公司產品;752N型紫外可見分光光度計，上海精密科學儀器有限公司產品。

1.3 動物分組、模型的建立與給藥方法

實驗大鼠正常飼養3 d后，按體質量隨機分為正常對照組、模型對照組、麥門冬湯組3組，每組13只。除正常對照組正常飼養不作任何處理外，模型對照組及麥門冬湯組按以下方法造模:以水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，取仰臥固定位，常規消毒，行頸正中切口，鈍型分離暴露氣管，經氣管軟骨環間隙向心端穿刺注入平陽霉素生理鹽水溶液1μL/g(平陽霉素3μg/g體質量)，立即將動物直立并行旋轉，使藥液在肺內分布充分、均勻，縫合皮膚，待動物自然清醒后置籠內常規飼養。從造模后第14 d開始，麥門冬湯組灌胃藥液0.015 mL/g體質量，模型對照組灌入等量蒸餾水。1次/d給藥，1周后復查動物體質量調整給藥量，各組于造模后第28 d處死。

1.4 檢測指標

實驗結束時處死動物，取右肺組織放入液氮中備作勻漿?？焖贁囝^取全腦，在經冰凍處理的玻片上分離出海馬，置于聚丙烯管中于－80℃保存至測定。采用熒光分光光度法檢測肺和海馬NE、DA、5-HT含量測定。操作程序見文獻［4］。

1.5 統計學方法

采用SPSS 13.0統計分析軟件處理，雙側檢驗，對服從正態分布的計量資料數據以均數(x－)±標準差(s)表示，組間差異性判斷采用單因素方差分析，方差齊時用LSD法，方差不齊時用Dunnett T3檢驗。以P＜0.05為差別有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠肺組織NE、DA、5-HT對比

各組肺NE值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，麥門冬湯組與模型對照組對比，差別有統計學意義(P＜0.05)。各組肺DA值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，模型對照組與麥門冬湯、正常對照組對比，差別均有統計學意義(P＜0.05)。各組肺5-HT值由大到小為:模型對照組＞麥門冬湯組＞正常對照組，模型對照組與正常對照組、麥門冬湯組對比，差別均有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 各組大鼠肺組織NE、DA、5-HT對比ng·g－1，±s

表1 各組大鼠肺組織NE、DA、5-HT對比ng·g－1，±s

注:與正常對照組對比，*P＜0.05;與模型對照組對比，#P＜0.05。

?

2.2 各組大鼠海馬NE、DA、5-HT對比

各組海馬NE值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，麥門冬湯組與模型對照組對比，差別有統計學意義(P＜0.05)。各組海馬DA值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，模型對照組與麥門冬湯組對比，差別有統計學意義(P＜0.05)。各組海馬5-HT值由大到小為:模型對照組＞正常對照組＞麥門冬湯組，模型對照組與正常對照組、麥門冬湯組對比，差別均有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 各組大鼠海馬NE、DA、5-HT對比ng·g－1，±s

表2 各組大鼠海馬NE、DA、5-HT對比ng·g－1，±s

注:與正常對照組對比，*P＜0.05;與模型對照組對比，#P＜0.05。

?

3 討論

3.1 肺組織NE、DA、5-HT含量分析

去甲腎上腺素能神經廣泛分布于肺內平滑肌及肺毛細血管，NE主要由腎上腺素能神經末梢釋放，主要與血管平滑肌α受體結合，使血管收縮。肺除主司呼吸外，還有許多其他重要功能。肺部的血管內皮細胞能從血液中攝取生物活性物質，從而影響它們對機體的作用。研究顯示，血中的NE在通過肺循環一次后，活性下降35%。用放射自顯影和熒光顯微鏡技術證明:肺毛細血管和細靜脈的內皮細胞是攝取NE的主要場所，并且可經單胺氧化酶(MAO)和兒茶酚胺甲基轉換酶進行降解［5］。本研究結果表明，模型對照組肺NE升高，這可能是由于肺部病理損害而影響了NE的滅活，麥門冬湯組肺NE顯著低于模型對照組，提示麥門冬湯可能保護肺臟對NE的滅活功能，從而影響腎上腺素能神經;外周組織中的DA能夠作用于交感神經末梢，使交感神經興奮，釋放NE，而NE能夠使肺支氣管血管平滑肌擴張，從而減輕肺水腫，減輕肺炎癥的形成。臨床上，低劑量的多巴胺對支氣管血管平滑肌具有擴張作用，可以改善肺的通氣狀態。本研究顯示，模型對照組肺組織DA升高，用藥組DA降低，這說明DA的升高在肺纖維化的形成過程中可能具有一定作用，麥門冬湯可能影響多巴胺能神經系統而抑制肺纖維化的形成。

肺是5-HT移除和滅活的主要部位。在某些疾病狀態下，可能由于MAO的損傷，肺內皮細胞代謝5-HT的能力降低，5-HT的清除受到抑制，從而導致循環5-HT水平升高，但也有研究表明，5-HT的增高是單胺類遞質代謝障礙或主動運轉機制失調的結果［6－7］。文獻報道，游離于血中的5-HT是強力的支氣管和肺血管收縮劑，而且還可引起靜脈壓、右房壓和肺動脈壓升高，損害心肌，是誘發或加重心肺功能惡化的因素之一［8］。成纖維細胞和膠原纖維過度增生與肺纖維化關系密切，而成纖維細胞合成膠原纖維的速度與5-HT有關［9］。

本研究結果表明，模型對照組肺中5-HT升高，證明5-HT在肺纖維化形成過程中可能具有重要作用;麥門冬湯組肺中5-HT降低(P＜0.05)，提示該方防治肺纖維化的作用機制之一可能是通過抑制肺中5-HT升高。

3.2 海馬組織NE、DA、5-HT含量分析

本研究表明在肺纖維化形成階段，模型對照組海馬組織中NE、DA的含量與正常對照組對比，差別無統計學意義，提示在肺纖維化形成階段，去甲腎上腺素能神經和多巴胺能神經在海馬的活動可能無明顯變化。麥門冬湯組NE、DA含量均低于模型對照組和正常對照組(P＜0.05)，說明麥門冬湯能影響海馬組織中去甲腎上腺素能神經和多巴胺能神經活動，但其在肺纖維化形成和治療中的作用仍需要進一步研究。5-HT在中樞是一種重要神經遞質，在外周又是一種重要的炎性介質。本研究結果表明麥門冬湯能阻止海馬5-HT量的升高，提示海馬區5-HT能神經活動可能參與了肺纖維化的形成，麥門冬湯防治肺纖維化可能與調節海馬5-HT能神經功能狀態有關。

麥門冬湯出于《金匱要略》，其主藥麥冬養陰生津，滋液潤燥;人參、甘草益氣生津，健胃安中;半夏降氣化痰，諸藥合用益氣養陰，治療氣陰兩虛證見咳喘短氣等癥。后世常用于治療肺陰虧虛咳嗽，也是治療肺痿的經典代表方。有文獻［10］報道，麥門冬湯加減治療特發性肺間質纖維化有良效。本實驗說明麥門冬湯在肺纖維化形成階段影響了NE、DA、及5-HT的變化，而肺纖維化模型的中醫證型歸屬及NE、DA、5-HT變化與中醫“證”的關系需進一步研究。在臨床上，面對病機復雜的肺纖維化患者，可以根據病人的具體情況認真辨證分析，在大量的作用相似方藥面前有針對性地選用實驗所用經方，減少很多盲目性，從而大大提高臨床療效。

［1］宋建平，李瑞琴，李偉，等.瓜蔞薤白湯對肺纖維化大鼠肺組織中轉化生長因子β1表達的影響［J］.北京中醫藥大學學報，2005，28(2):40－45.

［2］宋建平，李瑞琴，李偉，等.《金匱要略》不同方藥對肺纖維化模型早期階段的影響［J］.中華中醫藥雜志，2006，21(11):692－693.

［3］宋建平，劉方州，李偉，等.金匱腎氣丸對肺纖維化大鼠肺組織中腫瘤壞死因子 α表達的影響［J］.中成藥，2006，28(1):78－80.

［4］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京:人民衛生出版社，1993:207－208.

［5］周舒，婁艾琳.5－羥色胺的生理和病理生理［M］.北京:人民衛生出版社，1988:52.

［6］Siesjo BK.Calciun in the brain under physiological and pathological conditions［J］.Eur Neurol，1990，30(Suppl 2):3－9.

［7］Canpbell DJ.Tissue rennin angiotoension system:sites of angiotension formation［J］.Cardiowasc Pharmacol，1987，10 (Suppl):1－8.

［8］Hechtman HB.serotonin and the cardiovascular system［M］.New York:Raven Press.1985:213.

［9］孔海云.現代自身免疫病學［M］.北京:人民軍醫出版社，1996:231.

［10］甕恒，曲中平.麥門冬湯加減治療特發性肺間質纖維化32例臨床觀察［J］.國醫論壇，2008，23(1):6－7.