3種金屬烤瓷冠修復后齦溝液中白細胞介素-8水平動態測定

許衛星 蘇儉生

（1.上海市盧灣區牙病防治所 修復科，上海200020；2.同濟大學口腔醫院 修復科，上海200072）

金屬烤瓷冠（porcelain-fused-to-metal，PFM）兼有金屬的強度和瓷的美觀，在中國已被廣泛應用于臨床，但很多患者在使用一段時間后出現牙齦紅腫、齦緣黑線等牙周損傷現象，嚴重影響了牙冠修復的長期效果[1]。由于烤瓷鑄造合金在口腔內可腐蝕釋放出離子沉積于牙體表面和牙齦[2]，對與其接觸的牙周組織造成一定的刺激，促進牙齦炎癥發展[3]，這是引起修復后牙周損傷的重要因素。白細胞介素-8（interleukin-8，IL-8）是一種中性粒細胞功能調節因子，對牙周炎的發生、發展起到了重要影響。本研究通過觀察不同合金烤瓷冠修復前后齦溝液（gingival crevicular fluid，GCF）總量及GCF中IL-8水平的變化，初步探討不同合金烤瓷冠對牙周組織的影響程度，為臨床合理選擇金屬烤瓷冠提供參考。

1 材料和方法

1.1 病例選擇

臨床隨機選取鎳鉻合金、鈷鉻合金、金合金烤瓷修復的患者共計45例，患牙45顆，每組各15例。研究均選取單冠修復的患者，年齡25～45歲。納入標準：1）牙齒修復前經牙髓電活力檢測均為活髓牙，無根尖周、牙周炎癥狀及影像學改變；2）測試對象無全身急慢性系統病患，無口腔慢性疾患，有良好口腔衛生習慣；3）3個月內未服用抗菌素，未服用免疫抑制劑；4）婦女非妊娠期。由固定臨床醫師和口腔修復技術人員治療，制備牙體時不傷及牙齦組織，烤瓷冠邊緣與齦邊緣齊平。

1.2 材料

鎳鉻合金（Bego公司，德國）成分為Ni 64.5%、Cr 22%、Mo 10%、Si 2.1%、其他1.4%；鈷鉻合金（Bego公司，德國）成分為Co 60.2%、Cr 25%、Mo 4.8%、W 6.2%、Ga 2.9%、其他0.9%；金合金（北京有研億金公司）成分為Au 86.2%、Pt 11.5%、Zn與Mn 2.3%。烤瓷粉、粘接劑（松風株式會社，日本），臨時冠（DMG公司，德國），印模材料（賀利氏公司，德國），石膏粉（上海齒科材料廠），IL-8酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（上海森雄科技實業有限公司）。

1.3 方法

分別在3組金屬烤瓷冠修復前以及修復后1、3、6個月時，使用濾紙吸著法采集每組患牙的齦溝液。將2 mm×20 mm Whatman（沃特曼）3號濾紙條置于干凈容器中待用。用無菌干棉球擦干牙面，以棉花卷隔濕，記錄菌斑指數（plaque index，PLI）。輕吹牙齦，將濾紙條插入烤瓷冠唇和舌（腭）側近、遠中齦溝中，30 s后取出，用游標卡尺測量并記錄浸濕面積，剪去干燥部分，放入含200 μL 0.1%BSA-PBS（pH=7.4）緩沖液的Eppendorf管中，每管放置同一樣本的3條濾紙，4 ℃下10 000 r·min-1離心10 min，取上清液，-80 ℃冷藏待檢。

1.4 GCF的測定

齦溝液成分與正常人血清相似，可根據正常人血清量與濾紙浸濕面積的標準曲線來確定GCF的量。用進樣器分別取正常人血清，以0.5～2.4 μL標準量滴于濾紙條一端，30 s后用游標卡尺測量濾紙浸濕長度，換算為浸濕面積。計算正常人血清量與濾紙浸濕面積相關系數，并行直線相關t檢驗，根據標準曲線、樣本的濾紙面積計算GCF的量。

1.5 IL-8的測定

將-80 ℃冷藏的Eppendorf管取出，室溫解凍，離心取上清液，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定IL-8。反應終止后用酶聯檢測儀測出光密度（optical density，OD）值，IL-8量與OD值成正比，以標準品稀釋后作標準曲線，分別計算出3組金屬烤瓷冠在修復前以及修復后1、3、6個月時齦溝液樣本中IL-8的含量。IL-8總量（pg）=IL-8檢測量×洗提體積，IL-8含量（pg·μL-1）=IL-8總量/GCF量。

1.6 統計學分析

采用SPSS 12.0軟件包對數據進行分析，對組間GCF量、IL-8總量、IL-8含量的比較采用方差分析。

2 結果

2.1 GCF量標準曲線

正常人血清量和濾紙浸濕面積呈直線性相關（圖1），r=0.987，P＜0.001。

圖1 正常人血清量和濾紙浸濕面積的關系Fig 1 Coincidence of paper wetted area and the amount of normal human serum

2.2 3組合金不同時期IL-8總量、GCF量、IL-8含量的比較

按照IL-8標準品的OD值在半對數紙上作圖，畫出標準曲線（圖2）。

圖2 IL-8標準品OD值標準曲線圖Fig 2 The standard curve of OD values of IL-8 standard

根據標準曲線計算得出3組合金不同時期IL-8總量、GCF量、IL-8含量，并與修復前相比較，結果見表1。3組合金在修復后1個月的IL-8總量和GCF量與修復前相比較差異有統計學意義（P＜0.05）。鎳鉻合金在修復后3、6個月IL-8總量和GCF量與修復前相比較差異有統計學意義（P＜0.01）。鈷鉻合金、金合金烤瓷冠在修復后3個月IL-8總量、GCF量回復到修復前水平（P＞0.05）。3組合金的IL-8含量在修復前后差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表1 3組合金不同時期IL-8總量、 GCF量、 IL-8含量的比較Tab 1 Concentrations and amounts of IL-8 and the volume of GCF at different time period among three groups

3 討論

IL-8屬于內源性趨化因子，也是誘導型細胞因子，中性白細胞、巨噬細胞、單核細胞、T淋巴細胞、牙齦成纖維細胞、上皮細胞等均能產生IL-8。IL-8在免疫調節和炎癥過程中發揮雙重作用，可趨化并活化中性粒細胞，促進溶酶體酶的活性和吞噬效應，同時促進中性粒細胞Ⅰ型和Ⅲ型補體受體的表達，參與免疫調節，促進細胞黏附。有學者[4]用放射免疫技術發現：在有牙齦炎和牙周附著喪失的部位齦溝液中，IL-8的檢出率明顯高于在牙周健康部位齦溝液中IL-8的檢出率。另有學者[5]研究發現：牙周致病菌攜帶者齦溝液中IL-8的水平與齦炎指數、牙周袋深度、出血指數顯著相關。齦溝液中IL-8水平變化能較好地早期顯示出牙周組織的炎癥反應，可早于其他臨床指標反映牙周組織健康程度。

金屬基底冠腐蝕和金屬離子析出的臨床可表現為牙齦炎、牙齦出血、口腔異味、齦緣變黑等，若治療不及時將會導致不可逆的牙周破壞[6]。有學者[7]認為：在嚴格保證修復體質量的前提下，內冠材料對牙周組織的影響可以忽略不計。也有學者[2，8]則發現不同的內冠材料可引起不同的牙周損害。本研究結果顯示：3組合金在修復后1個月的IL-8總量和GCF量均較修復前差異有統計學意義（P＜0.05），說明3組合金內冠材料在修復早期均存在對牙周組織的刺激；鎳鉻合金在修復后3、6個月IL-8總量和GCF量較修復前差異有統計學意義（P＜0.01），鈷鉻合金及金合金在修復后3、6個月IL-8總量和GCF量較修復前差異無統計學意義（P＞0.05），說明IL-8水平變化與不同合金烤瓷冠和戴入時間存在著相關性，3組合金在修復后不同時期可引發不同程度的牙周炎性反應，該結果與以往學者[9-10]臨床試驗發現不同金屬基底烤瓷冠戴入后牙周組織會有不同程度的炎性反應的結論相一致。

不同合金析出的金屬離子種類和數量存在差異，PFM浸漬在口腔唾液中，烤瓷合金會發生電化學腐蝕，從而使金屬離子析出[11]。有研究表明金屬離子參與介導了牙周組織細胞免疫反應，造成PFM修復體局部牙周微生態環境變化，引發牙周組織炎癥[12]。在口腔唾液中，合金的腐蝕是選擇性溶解，鎳鉻合金中鎳、鉻等金屬離子析出，具有潛在毒性[13]，鎳離子可以使白細胞、巨噬細胞炎性因子分泌量增加，并改變中性粒細胞的趨化功能，引發組織炎癥反應的炎癥介質的持續分泌。鈷鉻合金可在鈍化膜表面形成Cr-O和Cr-OH結構連續致密氧化膜，增加合金耐腐蝕性能，具有很好的生物相容性。貴金屬合金化學性能更穩定，金屬離子的析出遠低于非貴金屬析出，從而有更好的生物相容性，未發現其有明顯的細胞毒性[14-15]。在伴有咀嚼磨耗下的腐蝕與單純的腐蝕比較，鎳鉻合金較鈷鉻合金、金合金中的金屬離子更容易釋放。綜上分析，3組合金材料理化性質的差異可能是造成鎳鉻合金烤瓷冠在修復后不同時期GCF量、IL-8總量持續高于修復前水平，而鈷鉻合金、金合金烤瓷冠在修復3個月后GCF量、IL-8總量回復到修復前水平的主要原因。

本研究結果顯示，3組合金的IL-8含量在不同時期差異均無統計學意義（P＞0.05）。可能因炎性反應中GCF量和IL-8量均有增加，GCF量的增加產生稀釋作用導致IL-8含量相對穩定。由于稀釋也是GCF早期防御炎癥細胞侵襲牙周組織的方法，提示同步觀測GCF總量、IL-8總量和含量3個參數變化更具參考價值。

本研究通過對GCF中IL-8水平變化周期性動態檢測，說明鈷鉻合金、金合金較鎳鉻合金具有更好的生物相容性，預后效果更好，提示臨床合理選擇修復內冠材料的必要性。3種合金內冠材料是否還存在波動的可能性和規律性有待長期動態檢測和進一步跟蹤研究。

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