藥物流產(chǎn)后孕婦血漿中米非司酮濃度的監(jiān)測Δ

車 敏，林 敏，黃以蘭，劉瓊珊，王 梅（福建省人口和計劃生育科學(xué)技術(shù)研究所，福州 350011）

米非司酮（Mifepristone）配伍米索前列醇終止早孕已為臨床廣泛應(yīng)用[1]，同時也是計劃生育工作中一項簡單、有效的措施。由于其方法成功率高，具簡便、隱私性的特點，也常被一些育齡婦女用來作為私自終止妊娠的手段。采用高效液相色譜（HPLC）法檢測米非司酮的血藥濃度[2，3]，以及考察米非司酮的人體藥動學(xué)均有文獻(xiàn)報道[4]，但尚未見妊娠婦女藥物流產(chǎn)后體內(nèi)米非司酮血藥濃度監(jiān)測的相關(guān)文獻(xiàn)報道。本試驗建立的以正己烷與二氯甲烷萃取血漿中米非司酮的HPLC法，具有操作簡單、靈敏度高、實用性強等特點，適合基層計劃生育部門監(jiān)測妊娠流產(chǎn)后孕婦血漿中米非司酮的濃度情況。

1 材料

1.1 儀器

1100 Series高效液相色譜儀，配置G1314A可變波長檢測器（美國Agilent公司）；XW-80A渦旋混合儀（上海滬西廠）；J2-21高速冷凍離心機（美國Beckman公司）；Sartorius電子天平（德國Sartorius公司）；KL512型氮吹儀（北京康林科技有限責(zé)任公司）。

1.2 試藥

米非司酮（Mifepristone，規(guī)格:每片25 mg，批號:43101104）、米索前列醇（Misoprostol，規(guī)格:每片0.2 mg，批號:43100204）均為北京紫竹藥業(yè)股份有限公司提供；米非司酮標(biāo)準(zhǔn)品（浙江仙居制藥廠，純度:99.8%）。甲醇、乙腈、正己烷、二氯甲烷為色譜純，試驗用水為去離子水。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱:Hypersil ODS（250 mm× 4.6 mm，5μm）；預(yù)柱:Hypersil ODS（1.0 mm×4 mm，5 μm）；流動相:甲醇-乙睛-水（42∶28∶30）；流速:1.0 mL·min－1；紫外檢測波長:302 nm。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配置

準(zhǔn)確稱取米非司酮標(biāo)準(zhǔn)品適量，以甲醇溶解定容制成50 mg·L－1的米非司酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液。臨用時以甲醇稀釋成所需的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 血漿樣品的處理

冷凍血漿在室溫下融化，渦旋混勻。取1.0 mL至離心管中，加入正己烷和二氯甲烷（7∶4）的混合液5 mL，振蕩，離心。吸取上清液，下層重復(fù)處理，合并上清液，用氮氣流吹干，殘渣加100 μL甲醇溶解，50 μL進(jìn)樣。

2.4 受試者的選擇及試驗方案

本所計劃生育門診進(jìn)行藥物流產(chǎn)的健康孕婦28例，年齡22～35歲，無肝、腎、血液方面疾病，無應(yīng)用甾體避孕藥及宮內(nèi)節(jié)育器既史往，月經(jīng)規(guī)則，停經(jīng)＜49 d，經(jīng)妊娠試驗、婦科檢查和B超確診為早孕者，經(jīng)陰道超聲證實為正常妊娠。簽署知情同意書，自愿接受試驗且同意接受觀察者，應(yīng)便于隨訪。受試者口服米非司酮，早8點服2片，晚8點服1片，連服2 d，第3天早晨8點頓服米索前列醇3片，服藥前后禁食1 h。在服用米索前列醇6 h后，未見完整胎囊排出者行人工刮宮。所有受試者均在服藥前和胎囊排出后24、48、72 h時抽取靜脈血5 mL于肝素抗凝管中，靜置離心后分離血漿，冷凍保存待分析。

3 結(jié)果

3.1 專屬性試驗

本試驗條件下，空白血漿、米非司酮標(biāo)準(zhǔn)品血漿以及藥物流產(chǎn)后血漿樣品經(jīng)HPLC法分析，色譜圖見圖1。由圖1可見，米非司酮峰形良好，保留時間為9.901 min，血漿中的雜質(zhì)及米非司酮代謝產(chǎn)物均對其無干擾。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

3.2 線性關(guān)系及檢測限考察

精密吸取米非司酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，加入空白血漿1.0 mL，配制成濃度為5 000、2 000、1 000、500、100、50、20 μg·L－1的系列標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液。按“2.3”項下方法處理并測定，記錄色譜。以樣品的色譜峰面積為定量依據(jù)，以待測樣品峰面積（A）為縱坐標(biāo)，樣品濃度（c）為橫坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線性回歸計算（權(quán)重系數(shù)為1/c2），求得線性回歸方程為A＝6.067 3+0.558 2c（r＝0.998 3）。結(jié)果表明，米非司酮血藥濃度在20～5 000 μg·L－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。血漿中米非司酮的最低檢測限為10.0 μg·L－1（S/N＝3）。

3.3 回收率試驗

配制含米非司酮低、中、高質(zhì)量濃度分別為50、500、2 000 μg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液，按“2.3”項下方法操作及分析，將峰面積值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算實測濃度，以實測量與加入量之比求算回收率，結(jié)果分別為（98.23±2.77）%、（102.25±3.46）%和（95.69±3.10）%。

3.4 精密度試驗

配制含米非司酮低、中、高質(zhì)量濃度分別為50、500、2 000 μg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液，按“2.3”項下方法操作，每種濃度各做5份樣品。將峰面積值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度，并求得日內(nèi)和日間RSD，結(jié)果見表1。

表1 精密度及回收率試驗結(jié)果（n＝5）Tab 1 Results of precision and recovery test（n＝5）

3.5 受試者血藥濃度監(jiān)測

受試者在胎囊排出后24、48、72 h時，所監(jiān)測到的血漿中米非司酮濃度分別為（606.68±123.61）、（243.86±50.16）、（92.70±34.21）μg·L－1，藥-時曲線見圖2。服用米非司酮藥物流產(chǎn)前受試孕婦血漿中均未監(jiān)測到米非司酮。

圖2 受試者胎囊排除后血漿中米非司酮藥-時曲線Fig 2 Plasma concentration-time curves of mifepristone in subject after discharging pregnant sac

4 討論

關(guān)于米非司酮的血藥濃度測定，國內(nèi)文獻(xiàn)報道較多；血漿藥物萃取方法大都采用乙醚萃取、水層低溫凍結(jié)的方法[4]，操作具有一定的危險性和局限性。本試驗選擇正己烷和二氯甲烷的混合液萃取血漿中的米非司酮，方法簡便、迅速，定量分析線性關(guān)系良好，并能獲得較高的提取率。試驗過程選擇色譜級的正己烷和二氯甲烷，可使得樣品峰干凈無干擾。本研究建立的血漿中測定米非司酮的檢測方法，可監(jiān)測到正常早孕婦女使用藥物流產(chǎn)，在胎囊排出72 h后血漿中米非司酮的量（（92.70±34.21）μg·L－1）。該方法專屬性好，適合基層計劃生育部門對非法使用米非司酮藥物流產(chǎn)后血漿中藥物濃度的監(jiān)測。

在給予相同劑量米非司酮的前提下，代謝情況不同的早孕婦女可能會表現(xiàn)出不同的抗早孕效果。可能是由于血中的α-酸性糖蛋白水平的個體差異所引起的。因為米非司酮進(jìn)入體內(nèi)后大部分與α-酸性糖蛋白結(jié)合，在體內(nèi)重新分布或存儲于組織中，或釋放游離的米非司酮。只有游離的米非司酮才通過細(xì)胞膜發(fā)揮生物效應(yīng)，因而顯示有明顯的個體間藥效學(xué)和血藥濃度差異[5]。

臨床上終止妊娠首選米非司酮配伍米索前列醇法。由于受到傳統(tǒng)的重男輕女思想的影響以及性別鑒定技術(shù)的不斷提高，非法進(jìn)行胎兒性別鑒定、濫用米非司酮類藥物及人為造成點滴出血流產(chǎn)現(xiàn)象、胎死腹中等情況要求流產(chǎn)、引產(chǎn)的事件時有發(fā)生，也給計劃生育執(zhí)法工作造成困難。本研究擬建立一種較簡便、安全的血樣提取方法和HPLC條件，對基層計劃生育工作中一些疑似使用米非司酮成分的孕產(chǎn)婦要求終止妊娠或生產(chǎn)死胎的情況，對其血樣進(jìn)行色譜判斷、定性分析，提供科學(xué)的診斷依據(jù)。

[1]宋淑華.米非司酮在婦產(chǎn)科的應(yīng)用[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，24（3）:175.

[2]高 晨，趙志剛，王 越，等.晚期妊娠引產(chǎn)產(chǎn)婦及其新生兒血漿中的米非司酮濃度測定[J].藥物分析雜志，2000，20（20）:119.

[3]Stith C，Hussian MD.Determination of mifepristone levels in wild canid serum using liquid chromatography[J].J Chromatography B，2003，794（1）:9.

[4]韋 陽，張美云，王恪申，等.中國健康女性口服低劑量米非司酮片劑的人體藥代動力學(xué)[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2003，19（6）:431.

[5]邵慶翔，桑國衛(wèi)，姜麗霞，等.抗孕激素米非司酮及其代謝產(chǎn)物的臨床藥代動力學(xué)[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，1993，9（3）:149.